Научный журнал

Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований

ISSN 1996-3955

ИФ РИНЦ = 0,593

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Третьякова И.Е. 1 Григорян А.М. 1 Сохова А.З. 1 Колхидова З.А. 1 Едзиева Р.А. 1 Базаева С.А. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская Государственная медицинская академия Минздрава России»

Проведен анализ влияния аутологичных супернатантов активированных латексом нейтрофилов крови на функциональную активность фагоцитов в поврежденных тканях, на бактериологическое состояние раны, на регенеративные процессы в ране. Оценку эффективности местного применения аутологичных нейтрофилокинов проводили у 30 больных с гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей туловища и конечностей. Результаты исследования показали, что местное применение аутологичных нейтрофилокинов влияет на характер клеточного состава раневого отделяемого у больных с раневой хирургической инфекцией, достоверно снижая количество нейтрофилов и увеличивая содержание макрофагов, устраняет развитие дисбаланса в функциональной активности гранулоцитов и макрофагов в ране (фагоцитарной, НСТ-редуцирующей, лизосомальной), улучшает бактериологическое состояние раны, обеспечивает очищение раны, способствует развитию полноценной регенерации поврежденных тканей.

Статья в формате PDF

1390 KB

аутологичные нейтрофилокины

инфицированные хирургические раны

функциональная активность фагоцитов

бактериологическое состояние раны

регенерация поврежденных тканей

1. Военно-полевая хирургия. Национальное руководство [под ред. И.Ю. Быкова, Н.А. Ефименко, Е.К. Гуманенко]. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 815 с.

2. Долгушин И.И., Зурочка А.В., Власов А.В. Способ получения иммуностимулирующих нейтрофилокинов // Патент России № 1536977.1987.

3. Долгушин И.И., Андреева Ю.С., Савочкина А.Ю. Нейтрофильные ловушки и методы оценки функционального статуса нейтрофилов. – М.: Изд-во РАМН, 2009. – 204 с.

4. Камаев М.Ф. Инфицированная рана и ее лечение. – М.: Медицина, 1970. – 159 с.

5. Третьякова И.Е., Долгушин И.И., Зурочка А.В. Влияние секреторных продуктов активированных нейтрофилов на морфологический состав и функциональную активность клеток перитонеального экссудата в динамике воспаления стафилококковой этиологии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2004. – Том 137, № 2. – С. 198–201.

6. Хаитов Р.М. Иммунология. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 521 с.

Проблема заживления и лечения ран была и остается одной из самых актуальных проблем современной медицины [1]. Инфекционные осложнения ран являются не менее важной проблемой хирургии [1]. Одной из причин развития микрофлоры в ране является нарушение как общего, так и местного иммунного статуса. Недооценка важности диагностики и коррекции нарушений функции иммунной системы может приводить к развитию иммунодефицитных состояний и ухудшению течения патологического процесса [1, 6]. Работа посвящена оценке роли секреторных продуктов нейтрофилов в регуляции локальных реакций воспаления и иммунитета. Известно, что выделяемые нейтрофилами биологически активные продукты способны существенно влиять на протекание различных физиологических и патологических процессов в организме [3, 5]. При этом изучение механизмов индукции и торможения местных иммунных реакций занимает достойное место в комплексе современных клинико-иммунологических исследований.

Целью исследования было изучение влияния аутологичных супернатантов активированных латексом нейтрофилов крови на функциональную активность фагоцитов в поврежденных тканях, на бактериологическое состояние раны, на регенеративные процессы в ране.

Материалы и методы исследования

Выделение секреторных продуктов гранулоцитов с использованием микросфер латекса проводили с помощью метода, разработанного И.И. Долгушиным и соавт., 1987 [2]. Оценку эффективности местного применения супернатантов аутологичных нейтрофилов крови проводили у 30 больных с гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей туловища и конечностей, для чего всех больных обследовали дважды: на 5-6 сутки и 13-14 сутки после оперативного вмешательства (определяли клеточный состав раневого отделяемого, функциональную активность фагоцитов в ране). Оценку уровня бактериальной обсемененности раны проводили в 1 сутки и на 13-14 сутки после поступления больного в стационар. После проверки аутологичных супернатантов нейтрофилов на стерильность и иммунотропную активность больным опытной группы на фоне комплексного лечения по общепринятой схеме местно назначали выделенные аутологичные секреторные продукты нейтрофилов пятикратно с интервалом в 24 часа в дозе 0,5-1,0 мл супернатанта, разведенного в 4,0 мл стерильного изотонического раствора NaCl. Доза аутологичных нейтрофилокинов определялась уровнем активности содержащихся в них иммуностимулирующих факторов при сравнении на моноцитах донора со стандартными суммированными донорскими супернатантами гранулоцитов, имеющими установленный уровень иммуностимулирующей активности. Выбор сроков начала локального применения аутологичных нейтрофилокинов обусловлен тем, что на 7 сутки наблюдения у больных с раневой хирургической инфекцией сохранялся дисбаланс в функциональной активности фагоцитов в ране, отмечалось развитие неполноценной регенерации поврежденных тканей, не снижался уровень инфицирования ран. Помимо этого, при проверке стерильности полученных супернатантов нейтрофилов должно пройти не менее 7 суток. Группу сравнения составили 20 пациентов с аналогичной патологией, которые получали лечение по общепринятой схеме. В качестве плацебо использовали изотонический раствор NaCl в аналогичной дозе и кратности применения. Клиническое испытание было рандомизированным. Опытная группа и группа сравнения были сопоставимы по возрасту, полу, локализации гнойного раневого процесса, тяжести заболевания, сопутствующей патологии. Состояние раны у больных с раневой хирургической инфекцией оценивали при помощи цитологического исследования отделяемого из раны [4]. Изучали показатели функциональной активности нейтрофилов и макрофагов, выделенных из раны (фагоцитарной, НСТ-редуцирующей, лизосомальной) [3, 5]. Кроме того, были проведены бактериологические методы исследования, заключающиеся в идентификации возбудителей раневой инфекции и определении их чувствительности к антибактериальным препаратам, а также количественное определение содержания микроорганизмов (КОЕ) в 1,0 мл раневого отделяемого.

Полученные результаты исследований были подвергнуты статистической обработке с использованием пакетов статистических программ STADIA 6.3, Statistica for Windows 5.0.

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты исследования показали, что аутологичные нейтрофилокины влияют на характер клеточного состава раневого отделяемого у больных с раневой хирургической инфекцией, достоверно снижая количество нейтрофилов и увеличивая содержание макрофагов, что свидетельствует о происходящих в ране процессах регенерации, так как под влиянием ряда медиаторов макрофагов формируется грануляционная ткань [1, 6]. Напротив, в группе сравнения на 13-14 сутки после оперативного вмешательства сохранялось высокое содержание гранулоцитов на фоне низкого уровня макрофагов, что указывает на сохранение остроты воспаления и наличие неполноценной регенерации поврежденных тканей (табл. 1).

Таблица 1

Влияние аутологичных нейтрофилокинов на клеточный состав раневого отделяемого у больных с раневой хирургической инфекцией (М ± m)

Примечание. * – достоверность различий показателей внутри группы больных (между данными первого и второго обследования); ** – достоверность различий показателей первых и повторных исследований разных групп больных. Использован критерий Вилкоксона.

Оценка функциональной активности фагоцитов в ране у больных в группе сравнения с учетом общепринятых нормальных значений естественной резистентности организма выявила нарушение иммунореактивности этих клеток в динамике воспалительного процесса: угнетение фагоцитарной реактивности макрофагов, высокие значения кислородзависимого метаболизма поли- и мононуклеарных фагоцитов, которые сохранялись на протяжении всего периода наблюдения; снижение функционального резерва и лизосомальной активности изучаемых клеток. Отсутствие статистически значимых изменений между показателями первого и второго обследования свидетельствовало о сохраняющемся дисбалансе в функциональной активности фагоцитов в ране у больных в группе сравнения на протяжении всего периода наблюдения. Местное применение аутологичных нейтрофилокинов у больных с раневой хирургической инфекцией устраняло развитие дисбаланса в функциональной активности гранулоцитов и макрофагов в ране, способствовало развитию полноценной регенерации поврежденных тканей (табл. 2, 3).

Таблица 2

Влияние аутологичных нейтрофилокинов на функциональную активность нейтрофилов в ране у больных с раневой хирургической инфекцией (М ± m)

Примечание. * – достоверность различий показателей внутри группы больных (между данными первого и второго обследования); ** – достоверность различий показателей первых и повторных исследований разных групп больных. Использован критерий Вилкоксона.

Таблица 3

Влияние аутологичных нейтрофилокинов на функциональную активность макрофагов в ране у больных с раневой хирургической инфекцией (М ± m)

Примечание. * – достоверность различий показателей внутри группы больных (между данными первого и второго обследования);** – достоверность различий показателей первых и повторных исследований разных групп больных. Использован критерий Вилкоксона.

После установленного иммуномодулирующего влияния аутологичных секреторных продуктов ПМЯЛ на показатели местного иммунитета интересно было изучить бактериологическое состояние раны у больных после проведенной локальной иммунокоррекции, ибо можно было предположить, что секреторные продукты нейтрофилов, устраняя развитие дисбаланса в функциональной активности фагоцитов в ране, влияют на уровень бактериальной обсемененности поврежденных тканей.

Бактериологическое состояние раны изучали дважды: в 1 сутки и на 13-14 сутки после поступления больного в стационар. При бактериологическом исследовании мы проводили качественное и количественное изучение раневой микрофлоры.

Результаты исследований показали, что в 1 сутки после поступления в стационар у больных опытной группы и группы сравнения были выделены стафилококки: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus и стрептококки: Streptococcus pyogenes.

На 13-14 сутки лечения в стационаре, после проведения у больных способа локальной иммунокоррекции с помощью аутологичных нейтрофилокинов получена следующая картина микробного пейзажа. Уменьшилось количество больных с обнаруженным золотистым стафилококком, не зарегистрировано ни одного случая повторного инфицирования ран. При этом увеличилось количество пациентов, у которых отделяемое из раны было незначительным, оно имело серозный характер, рана выполнялась яркими грануляциями. У больных группы сравнения содержание в раневом отделяемом Staphylococcus aureus сохранялось на исходном уровне, а также присоединялась Грам (-) микрофлора (Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia). Это сопровождалось увеличением количества гнойного отделяемого из раны. В ране отмечались единичные участки некроза. Грануляции становились вялыми, бледными, тусклыми, медленно выполняли полость раны.

При количественной оценке бактериологического состояния ран между исследуемыми группами больных не было выявлено достоверной разницы в исходных значениях. Анализ количественного изучения раневой микрофлоры при повторном обследовании обнаружил, что в опытной группе в 3 и более раза уменьшилось количество пациентов с критическим уровнем бактериальной обсемененности ран 105 и более микробных клеток/1,0 мл раневого отделяемого. Тогда как в группе сравнения количество больных с критическим уровнем бактериальной обсемененности раны возросло более чем в 3 раза. Общее количество микроорганизмов в 1,0 мл отделяемого из раны у больных опытной группы достоверно снизилось более чем в 20 раз по сравнению с исходными данными и более чем в 50 раз по сравнению с данными повторного обследования в группе сравнения (табл. 4).

Таблица 4

Влияние аутологичных нейтрофилокинов на количество микроорганизмов в 1,0 мл раневого отделяемого у больных с раневой хирургической инфекцией (M ± m)

Примечание. * – достоверность различий показателей внутри группы больных (между данными первого и второго обследования). Использован критерий Вилкоксона.

Таким образом, при проведении у больных с раневой хирургической инфекцией локальной иммунокоррекции с помощью аутологичных нейтрофилокинов уменьшался уровень бактериальной обсемененности ран, не развивалась вторичная инфекция.

Заключение

Местное применение аутологичных нейтрофилокинов у больных с раневой хирургической инфекцией увеличивает количество макрофагов в ране, устраняет развитие дисбаланса в функциональной активности гранулоцитов и макрофагов в ране, улучшает бактериологическое состояние раны, обеспечивает очищение раны, способствует развитию полноценной регенерации поврежденных тканей.

Библиографическая ссылка