Из сапропеля оз. Тараскуль Тюменской области способом, включающим экстраги­рование водой очищенной, центрифугиро­ванием (5 000 g), упариванием супернатанта на ротационном испарителе, ультрафиль­трацией на мембране гидратцеллюлозной Т-100, замораживанием с последующим размораживанием продукта, обработки по­лученной фракции аммония сульфатом, удалением аммония сульфата путем заме­ны растворителя (спирт этиловый), удале­нием спирта этилового и гель-фильтрацией водного раствора сухого остатка на геле Sephadex G-25 получены высокоочищен-ные эффекторы с антикоагулянтной актив­ностью, по химической природе принад­лежащие к пептидам /А.Е. Бушин и соавт., 2009/, ограничивающие плазменный (оце­нивались время рекальцификации, тром-бопластиновое время, тромбиновое время и время самосборки мономерного фибри­на) и тромбоцитарный гемостаз in vitro и in vivo. Быяснено, что по механизму действия эффекторы отличаютеся от известного пря­мого антикоагулянта - гепарина.

Ограничение плазменного гемостаза преимущественно реализуется на уров­не заключительной, III фазы свертыва­ния - превращении фибриногена в фибрин под действием тромбина путем образова­ния малоактивных комплексов эффекторов с мономерным фибрином и полимерами различной степени зрелости за счет элек­тростатических взаимодействий; тромбо-цитарного - угнетением высвобождения внутренних факторов агрегации, провоци­руемого АДФ - или адреналином (раствор Тоногена) /Б.Л. Кортусов и соавт., 2007/.

Полученные нами эффекторы обладают защитным действием при создании экспе­риментальной тромбопластинемии. Чтобы это доказать мы использовали экзогенную тромбопластинемию как модель, которая позволяла оценить эффективность экстрак­та в качестве средства, повышающего то­лерантность животных к воздействиям, вызывающим внутрисосудистое тромбообразование.

Показано, что внутривенное введение подопытным животным (белые беспород­ные крысы) тромбопластина (активность 22,8 с) в дозе 40 мг/кг массы тела на фоне предварительного введения изотонического раствора натрия хлорида летальность соста­вила 63,3%. При этом основная часть жи­вотных гибла в течение 4-х часов. На фоне предварительного введения эффекторов в дозе 50мг/кг, после введения тромбопла-стина, летальность составила 30%, а при дозе 300мг/кг - только 13,3%. Причем ги­бель животных в обеих группах наблюда­лась на протяжении 15 часов. Таким обра­зом, превентивное внутривенное введение эффекторов лабораторным животным в дозе 50 и 300 мг/кг массы тела с последующей инъекцией тромбопластина снижает часто­ту гибели подопытных животным в 2,1 и 4,8 раза соответственно.

Установлено, что эффективная доза эф­фекторов ниже токсической в 15 раз и при повторных введениях он проявляет ми­нимальные кумулятивные свойства.

Мы изучали влияние эффекторов не неко­торые параметры жизнедеятельности орга­низма лабораторных животных. Длительное (в течение 20 дней) введение эффекторов са­пропеля в дозах 50 мг/кг внутривенно либо 300 мг/кг внутрибрюшинно один раз в день, не приводило к изменениям общего состоя­ния подопытных животных, их внешнего вида, поведения, потребления воды и пищи, динамики роста массы тела (связанное с ро­стом животного).

Токсическое действие не обнаружили, ис­следуя динамику изменений красной и белой крови у этих животных. Не изменилось у них и содержание гемоглобина. Особенно суще­ственно то, что не изменилось содержание тромбоцитов - клеток, активно участвующих в процессах свертывания крови. Это исклю­чает возможность того, что гипокоагулемия, вызываемая экстрактом, является вторич­ной, связанной с повышенным потреблени­ем факторов свертывания, так как известно, что тромбоциты при ускорении внутрисосу-дистого свертывания потребляются в числе первых и снижение их уровня является одним из признаков ДБС /З.С. Баркаган 1988/.

Не обнаружено какого-либо влияния экс­тракта на биоэлектрическую активность миокарда: все параметры ЭКГ оказались практически идентичными как у контроль­ных, так и у подопытных животных.

Длившееся в течение 20 дней введение подопытным крысам эффекторов в дозах 50 мг/кг внутривенно либо 300 мг/кг внутри-брюшинно один раз в день не изменило ин­тенсивность диуреза после водно-солевой нагрузки и функциональное состояние по­чек и печени. Следовательно, в заведомо больших дозах исследуемые эффекторы даже при длительном введении не изменяет состояние важнейших органов и систем.

Разумеется, проведенными наблюдениями не исчерпывается весь объем токсикологи­ческих исследований, которые необходимо осуществить для рекомендации противо-свертывающего средства к доклиническим испытаниям. Однако тот факт, что дозы, превышающие эффективную в 5-10 раз (10 против 50 и 300 мг/кг), не вызвали измене­ния группы довольно чувствительных инди­каторов интоксикации как то биоэлектриче­ская активность миокарда, состояние клеток крови, почек и печени, позволяет сделать предварительный вывод о невысокой ток­сичности экстракта и обосновывает интерес к дальнейшему исследованию в выбранно­му нами направлению.

Список литературы

1. Бушин А.Е. Пептидные ингибиторы плазменного и тромбоцитарного гемостаза из сапропеля. /А.Е. Бушин, Е.А. Чирятьев, О.А. Русакова, П.Я Шаповалов //Успехи современного естествознания. - 2008. - 2. - С. 80.

2.  Кортусов В.Л. Эффекторы свертывания крови природного происхождения. //Автореф. канд. биол. наук. - Тюмень, 2007. - 30 с.

3.  Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. // М.: Мед. 1988. - 528 с.