Scientific journal

International Journal of Applied and fundamental research

ISSN 1996-3955

ИФ РИНЦ = 0,593

Горлюха ястребинковая (Picris hieracioides L.) – дву- или многолетнее травянистое растение, широко распространенное в областях Центрального Черноземья [4].

Горлюха ястребинковая широко применяется в народной медицине в качестве мягчительного, потогонного, легкого слабительного средства [3]. Фармакологические исследования показали наличие антиоксидантной, противовоспалительной, антибактериальной и цитотоксической активности, у водно-спиртовых экстрактов из надземной части горлюхи ястребинковой [6].

Однако, химический состав горлюхи ястребинковой мало изучен недостаточно, имеются только отдельные сведения о качественном содержании биологически активных веществ, так в надземной и подземной частях растения найдены сесквитерпеновые лактоны, в листьях идентифицирован ?-ситостерин [6], в частности не изучены азотсодержащие соединения.

Азотсодержащие соединения имеют важное значение для организма человека. Азотистые основания участвуют в иммунных реакциях организма человека. Холин входит в состав фосфолипидов: лецитина и сфингомиелина, оказывает липотропное действие, являются составной частью лекарственных препаратов, применяемых для лечения и профилактики заболеваний нервной, сердечно-сосудистой систем.

Целью нашей работы явилось изучение азотсодержащих соединений травы горлюхи ястребинковой.

Объектом исследования служила измельченная воздушно-сухая, трава горлюхи ястребинковой заготовленная в 2016 г. в окрестностях города Курска в период массового цветения растения.

Материалы и методы исследования

Изучение азотистых оснований проводили в водном извлечении, для чего 5,0 г измельченного сырья заливали 50 мл воды очищенной и нагревали с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Извлечение фильтровали, сырье заливали снова 50 мл воды и операцию повторяли. Водные извлечения, полученные после трехкратной экстракции, объединяли, упаривали под вакуумом до 25 мл и использовали для определения азотистых оснований.

Наличие азотистых оснований устанавливали с помощью качественных реакций (с раствором кислоты фосфорновольфрамовой 3 %; с реактивом Манделина; с раствором кислоты хлористоводородной и бриллиантовым зеленым) и методом хроматографии на бумаге в системе растворителей н-бутанол – кислота уксусная – вода (4:1:2), в качестве проявителя выступали пары йода [5].

Количественное содержание азотистых оснований определяли по модифицированной методике Г.А. Луковниковой и А.И. Есютиной. В основе методики лежит определение оптической плотности окрашенных комплексов азотистых оснований с солью Рейнеке. Для определения азотистых оснований сырье исчерпывающе экстрагировали горячей водой очищенной и в полученном извлечении определяли холин и сумму азотистых оснований. Для этого к водному извлечению прибавляли раствор кислоты хлористоводородной до pH – 3, раствор охлаждали, далее прибавляли раствор соли Рейнеке и помещали в холодильник на 18 часов для полного осаждения азотистых оснований. Осадок окрашенного комплекса растворяли в ацетоне и не позднее 5 минут колориметрировали на фотоэлектроколориметре при синем светофильтре (при длине волны 400±10 нм), в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно в тех же условиях измеряли оптическую плотность раствора стандартного образца холин-стандарта с солью Рейнеке [5].

При определении суммы азотистых оснований к водному извлечению прибавляли 0,1Н раствор калия перманганата и нагревали на кипящей водяной бане 10 минут, чтобы азотистые основания окислились до холина. Последующее определение проводили как для холина.

Качественное обнаружение аминокислот проводили в водном извлечении с помощью нингидриновой реакции, а также анализировали их состав хроматографией в тонком слое сорбента [2]. Для хроматографического анализа 0,03–0,05 мл полученного извлечения хроматографировали в тонком слое сорбента на пластинках «Sorbfil» в системе растворителей 96 % спирт этиловый – конц. аммиак (16:4,5) с достоверными образцами аминокислот. Хроматограмму высушивали на воздухе, обрабатывали спиртовым раствором нингидрина 0,2 % и нагревали в сушильном шкафу при 100–105° С в течение нескольких минут. Аминокислоты проявлялись в виде красно-фиолетовых пятен [2].

Суммарный аминокислотный состав определяли на аминокислотном анализаторе – автоматизированном жидкостном хроматографе (ААА 400), для этого точную навеску сырья (0,2 г), вносили в колбу со шлифом, прибавляли 20 мл раствора 6 М кислоты хлористоводородной, плотно закрывали и термостатировали при температуре 110°С в течение 23 часов. По окончании гидролиза колбу охлаждали до комнатной температуры, фильтровали кислое извлечение и при использовании роторного испарителя выпаривали досуха. К сухому остатку добавляли 5 мл воды очищенной и процедуру повторяли дважды для удаления остатков кислоты хлористоводородной.

К полученному сухому остатку приливали 50 мл загрузочного буфера (рН – 2,2), который готовили следующим образом: в мерную колбу на 1 литр вносили отвешенные 14 г лимонной кислоты, 11,5 г хлорида натрия, 0,1 г азида натрия, 5 мл тиодигликоля, водой очищенной объем доводили до метки. В подготовленную ионообменную колонку вносили полученный и отфильтрованный раствор.

Аминокислотный анализ проводили при следующих условиях: поток буферных растворов 0,3 мл/мин, скорость потока нингидринового реактива 0,2 мл/мин, детектирование проводили в УФ областях при 440 и 570 нм, температура термостата реактора 121°С [2].

Результаты исследования и их обсуждениие

С помощью качественных реакций установили наличие азотистых оснований в траве горлюхи ястребинковой. Хроматографический анализ извлечения из травы горлюхи ястребинковой показал наличие 4 пятен имеющих темно-оранжевую окраску, отнесенные к азотистым основаниям, со значениями Rf 0,19, Rf 0,29, Rf 0,35, Rf.0,51.

Результаты количественного определения, проведенного методом фотоэлектроколориметрии показывают, что содержание суммы азотистых оснований в траве горлюхи ястребинковой составляет 0,048 %, в том числе холина 0,014 %;

Результаты качественного анализа аминокислот позволили установить их наличие в траве горлюхи ястребинковой. При хроматографическом анализе аминокислоты проявлялись в виде красно-фиолетовых пятен. Методом хроматографического анализа на бумаге установили аминокислотный состав горлюхи ястребинковой. Аминокислотный состав травы горлюхи ястребинковой представлен 16 аминокислотами: аспарагиновой кислотой, треонином, серином, глутаминовой кислотой, пролином, глицином, аланином, валином, метионином, изолейцином, лейцином, тирозином, фенилаланином, гистидином, лизином, аргинином. Среди идентифицированных аминокислот 7 являются незаменимыми (таблица).

Наибольшее содержание отмечено для аспарагиновой кислоты (1,44 %) и глутаминовой кислоты (1,36 %).

Выводы

Изучен качественный и количественный состав азотсодержащих соединений травы горлюхи ястребинковой (Picris hieracioides L.)

Содержание суммы азотистых оснований в траве горлюхи ястребинковой составляет 0,048 %, в том числе холина – 0,014 %.

Изучен качественный и количественный состав аминокислот травы горлюхи ястребинковой. Всего обнаружено 16 аминокислот, из них 7 – незаменимых. Наибольшее содержание отмечено у аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты.

Содержание связанных аминокислот в траве горлюхи ястребинковой, %