Исследование было проведено на клетках костного мозга 35 больных ХМЛ в хронической фазе, которые получали лечение иматинибом. Эффективность лечения оценивали согласно рекомендациям European LeukemiaNet по лечению ХМЛ иматинибом и ингибиторами тирозинкиназ II поколения. По признаку достижения или отсутствия гематологического и цитогенетического ответа на терапию больные были разделены на 4 группы.
Первую группу составили 12 больных, у которых был получен полный гематологический (ПГО) и цитогенетический ответ (ПЦГО). Во вторую группу были включены 13 больных ХМЛ с ПГО и большим цитогенетическим ответом (БЦГО). В третью группу было включено 4 больных с ПГО и малым или отрицательным цитогенетическим ответом. Четвертую группу составили 6 больных, у которых не было ни гематологического, ни цитогенетического ответа. Все больные 1-й, 2-й и 3-й группы получали иматиниб в дозе 400 мг/сутки. Больные 1-й группы получали иматиниб от 6 до 26 месяцев (в среднем 15,6 мес.). Больные 2-й группы получали иматиниб от 5 до 11 месяцев (в среднем 9,9 мес.). Больные 3-й группы получали иматиниб в течение 2 мес. Больные 4-й группы либо были обследованы до начала терапии, либо только начали принимать препарат и срок его приема составил менее 0,5 мес.
У всех больных, достигших или не достигших ответа, оценивали следующий показатель - увеличение числа клеток костного мозга, вступившего в апоптоз при его индукции дефицитом глюкозы в среде инкубации по сравнению со спонтанным апоптозом. Об интенсивности апоптоза судили по количеству клеток, связавших краситель - акридиновый оранжевый (АО) и выражали в % от общего числа клеток. К клеткам, вступившим в апоптоз, относили клетки с типичным для данного процесса признакам: ярко желто-зеленая флуоресценции ядра и наличии желто-оранжевых гранул хроматина в ядре. Микроскопию проводили в люминесцентном микроскопе Leica DM4000 B в синем ультрафиолетовом свете с использованием светофильтра H3. Подсчитывали не менее 100 клеток в разных полях зрения. Оценивали процент клеток с типичными для апоптоза изменениями.
У больных 1-й группы в условиях спонтанного апоптоза количества АО связывающих клеток было равно 10,7%, в условиях индуцированного апоптоза - 20,8%. Прирост числа АО связывающих клеток в условиях индукции апоптоза составило в среднем 10,1 %.
У больных 2-й группы в условиях спонтанного апоптоза количества АО связывающих клеток равнялось 11,3%, в условиях индуцированного апоптоза - 20,5%. Прирост числа АО связывающих клеток в условиях индукции составило в среднем 9,2%. Статистически достоверные отличия между 1-й и 2-группой были выявлены по показателю прироста АО связывающих клеток в условиях индукции апоптоза (p<0,05). В этих группах не было выявлено различий по величине спонтанного апоптоза.
В 3-й группе показатели спонтанного и индуцированного апоптоза в среднем составили 9,5% и 16,0% соответственно. Прирост числа клеток в условиях индукции составил в среднем 6,5%, что достоверно ниже аналогичного показателя (p<0,005) по сравнению с 1-й и 2-й группами.
У больных 4-й группы показатель спонтанного апоптоза был равен 6,5%, показатель индуцированного - 9,5%, прирост клеток в состоянии апоптоза - 3%. Величина данного показателя (прирост числа АО связывающих клеток в условиях индукции) у больных данной группы достоверно ниже по сравнениями с другими группами: p<0,005 по сравнению с 1-й и 2-й группами, p<0,05 - по сравнению с 3-й группой.
Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что определение у больных ХМЛ количества клеток костного мозга, связывающих акридин оранж, имеет прогностическое значение для оценки эффективности противоопухолевой терапии и может быть использовано в качестве одного из дополнительных критериев при мониторинге течения заболевания