В последнее время сверхнизкочастотное низкоинтенсивное магнитное поле (СНЧМП) и электротерапия с помощью самоконтролируемого энерго-нейро-адаптивного регулятора (СКЭНАР) широко используется с целью усиления противоопухолевого эффекта цитостатиков и повышения противоопухолевой неспецифической резистентности больного опухолью организма усиления противоопухолевого эффекта цитостатиков [1, 3, 5, 7]. Известно, что электрические импульсы, полученные от аппарата СКЭНАР, по своим характеристикам очень близки к электрическим сигналам в нервных волокнах. СНЧ МП способно влиять на системы исправляющие десинхронизацию процессов мозга, т.е. осуществлять коррекцию на уровне центральных регуляторных систем, а СКЭНАР-терапия адресована органам и тканям и определяет возможность включения периферических звеньев нейроадаптивной регуляции. Видимо, применяя такое комбинированное общее и местное воздействие, можно добиться формирования в организме опухоленосителя общих неспецифических антистрессорных реакций, оказывающих общее регулирующее и укрепляющее влияние [7]. Целью работы было определение некоторых критериев клеточного гомеостаза и изучение возможности повышения противоопухолевой резистентности и у животных с опухолью в легких без использования цитостатиков, а с помощью использования комбинированного электромагнитного воздействия СНЧМП- и СКЭНАР-терапии.
Материалы и методы исследования
Опыты были проведены на 41 белой лабораторной крысе, самцах со средней массой 250 г. Для получения модели метастаза опухоли в легком всем животным в подключичную вену была перевита взвесь клеток саркомы 45, на изотоническом растворе NаСl в объеме 0,5 мл, всего 2 млн опухолевых клеток С45[4]. Штамм С45 был получен из Онкологического Центра АМН России, г. Москва. Животные были поделены на две группы: основная группа (n = 21), в которой осуществляли только двойное воздействие физических факторов – СНЧМП и СКЭНАР без применения цитостатиков. Спустя неделю после эктопической перевивки С45 в легкое и на протяжении 5 недель опыта 4 раза в неделю в одни и те же часы утром животные основной группы (n = 21) подвергались воздействию на мозг (СНЧМП) в режиме 0,03 Гц – 0,3 Гц – 9 Гц экспозицией 5 мин – 1 мин – 1 мин индукцией 5 млТ – 3,5 мТл – 2,8 мТл, полученного от аппарата «Градиент-2». Через 20 минут после первого воздействия осуществляли второе воздействие импульсным электрическим током вдоль позвоночника с амплитудой 135 у.е., на область проекции легких, печени и грудины с амплитудой 60 у.е. и модуляции 2:1 при ежедневном изменении частоты в алгоритме частот 15,3Гц – 18,6Гц – 24.4Гц – 30,5Гц – 33.6Гц, полученного от аппарата СКЭНАР. Всего20 процедур. В Контрольной группе (n = 20) не осуществляли никаких воздействий.
Проводили цитохимическое исследование катионных белков (Кб) с помощью лизосомально-катионного теста (ЛКТ) на мазка крови [2, 8]. В препаратах крови, окрашенных прочным зеленым – азуром А, средний цитохимичесий коэффициент (ЦXК) определяли с использованием формулы Астольде и Верге (в у.е.) [2, 8]. В каждом препарате подсчитывали не менее 100 клеток. Кроме того, на этапах эксперимента было проведено гистологическое исследование тканей легких, для чего образцы фиксировали в 4 % формальдегиде 3 дня. После чего все образцы были подвергнуты рутинной гистологической обработке. Изготавливали срезы толщиной 5–3 мкм, которые окрашивали гематаксилином – эозином и анализировали под микроскопом. Изучали также показатели неспецифических адаптационных реакций, индексы интоксикации [1, 6]. Статистическую обработку проводили с использованием t критерия Стъюдента (р < 0,05).
Результаты исследования и их обсуждение
Как показали результаты наших исследований, для некоторых интегральных показателей гомеостаза, применение комбинированного электромагнитного воздействия СНЧМП- и СКЭНАР-терапии способствовало формированию и длительному поддержанию физиологических реакций антистрессорного типа [3, 7]. Подтверждением этому было значительное увеличение процентного содержания лимфоцитов в формуле периферической крови, как сигнального показателя развития общей неспецифической адаптационной реакции организма [6], а также возрастание показателей значений массы тимуса и, соответственно, уровня соотношения массы тимуса и надпочечников, что указывало на более высокую активность лимфопролиферативных процессов, коррелирующую с эффективностью применявшихся воздействий (таблица).
Показатели состояния интегральных и клеточных систем у крыс с опухолью легких на этапах электромагнитной терапии (М ± m)
Этапы наблюдений, недели |
Содержание лимфоцитов в крови, % |
Коэффициент Тимус \надпочечник у.е. |
Индексы интоксикации, % от нормы |
Частота развития антистрессорных реакций |
Уровень катионных белков нейтрофиллов, у.е. |
|||||
Контр. |
Опыт |
Контр. |
Опыт |
Контр. |
Опыт |
Контр. |
Опыт |
Контр. |
Опыт |
|
1-я |
66,5 ± 4,4 |
71,0 ± 6,5 |
– |
– |
33 ± 2,4 |
33 ± 2,4 |
100 |
100 |
1,4 ± 0,1 |
1,6 ± 0,1 |
2-я |
67,0 ± 4,4 |
48,7 ± 4,4* |
4,3 ± 0,5 |
4,5 ± 0,1 |
55 |
67 |
1,6 ± 0,2 |
1,8 ± 0,1 |
||
3-я |
50,2 ± 3,2 |
64,2 ± 5,8 |
3,2 ± 0,1 |
2,6 ± 0,2* |
44 |
33 |
0,9 ± 0,1 |
1,7 ± 0,1* |
||
4-я |
40,3 ± 5,4 |
62,0 ± 4,6* |
2,5 ± 0,9 |
2,7 ± 0,4 |
22 |
100* |
0,83 ± 0,3 |
1,3 ± 0,2* |
||
5-я |
32,8 ± 3,5 |
64,0 ± 6,7* |
1,9 ± 0,01 |
2,8 ± 0,1* |
0 |
67* |
0,75 ± 0,1 |
1,5 ± 0,1* |
||
6-я |
21,5 ± 5,7 |
68,2 ± 2,2* |
0,7 ± 0,01 |
3,4 ± 0,3* |
0 |
100* |
0,73 ± 0,1 |
2,1 ± 0,04* |
Примечание. Различия достоверны по отношению к Контролю Р ≤ 0,05.
Результаты гистологического анализа на заключительных этапах эксперимента показали, что при микроскопическом исследовании ткани легкого контрольной группы были обнаружены крупные очаги поражения, широкие поля кровоизлияний и присутствие в органе множественных опухолевых узлов, со средним размером 0,5–1,0 см. Инвазия опухоли обнаруживалась в основных респираторных структурах, в бронхиолах, межальвеолярных перегородках. Клетки опухоли были представлены веретиновидной, округлой и овальной формой с хорошо выраженными фигурами патологических митозов. Отмечено присутствие широких полей с кровоизлияниями. Соединительная ткань гиперплазирована, в отдельных участках органа было отмечено присутствие гистиоцитов, образующих многоядерный слой, и фибробластов. Вероятно, такая перестройка в легких контрольной группы, может быть оценена как построение клетками опухоли собственной стромы за счет материала организма-хозяина. У животных после сочетанного электромагнитного воздействия на макропрепаратах легких присутствовали лишь отдельные поля кровоизлияния, были отмечены незначительные очаги перифокального воспаления, инфильтрация соединительной тканью хорошо выражена. Крупные опухолевые узлы не были идентифицированы. В ткани легких, при микроскопии, определялись отдельные очень мелкие узлы с измененными опухолевыми клетками, теряющими веретенообразную форму и отростки. Для таких клеток были характерны следующие дистрофические изменения: наличие в цитоплазме крупных вакуолей, в ядрах гипохромия или беспорядочно лежащая хроматиновая сеть. На некоторых препаратах были отмечены поля с кариорексисом, кариопикнозом и лизисом опухолевых клеток С45.
В таблице представлены основные результаты наших исследований в том числе данные метаболического состояния нейтрофилов при цитохимическом исследовании Кб с помощью лизосомально-катионного теста (ЛКТ) [2]. Из таблицы следует, что с третьей недели эксперимента значения ЛКТ в опытной группе были достоверно выше. На завершаемом этапе эксперимента, уровень Кб был в 2,8 раз выше, чем в контроле, что свидетельствует о влиянии электромагнитотерапии на состояние кислородзависимых механизмов бактерицидности и интенсификации интенсивности «дыхательного взрыва» в нейтрофилах крови животных этой группы. Так как из данных литературы известно, что повышение неспецифической противоопухолевой резистентности как правило, сопровождается мобилизацией клеточного звена естественной противоопухолевой резистентности организма, проявляющейся в увеличении числа и качества нейтрофилов с более высоким уровнем содержания показателей КБ [8], что вполне согласуется с нашими данными и подтверждает этот постулат. Полученные значения тестов интоксикации по Яблучанскому и Кальф-Калифу в этой группе не отличались от показателей нормы (до 100 % уровня значений, соответствующих норме) особенно в период 6-й недели опыта (см. таблица), что косвенно свидетельствует о повышении уровня неспецифической резистентности. В основной группе также достоверно возрос процент животных, у которых на этапах лечения была сформирована неспецифическая антистрессорная реакция, а к концу эксперимента эта цифра составила 100 % (таблица).
Можно констатировать, что наблюдаемые нами деструктивные изменения в структуре опухолей легких (кариопикноз, кариорексис, лизис ядер и клеток опухоли, инфильтрация соединительной тканью, активация нейтрофильного звена и других лимфоцитарных элементов иммунной системы животного) являются следствием как минимум двух причин. Во-первых: локального повышения противоопухолевой резистентности, связанного с эффекторными механизмами клеточной резистентности; во-вторых: следствием, сформированных на уровне всего организма общих неспеци-
фических адаптационных реакций антистрессорного типа
Заключение
Применение в качестве сочетанного электромагнитного воздействия на мозг низкоинтенсивного СНЧМП и СКЭНАР-терапии на определенные зоны туловища животных позволяет без применения цитостатиков получить противоопухолевый эффект в легком в виде регрессии крупных опухолевых узлов или стабилизации метастатического роста. Такое воздействие оказывает выраженное антистрессорное, самоорганизующее системное влияние, присущее неспецифическим реакциям антистрессорного типа, сопровождается повышением неспецифической противоопухолевой резистентности и интенсификацией метаболических процессов в нейтрофилах крови.