В одной из наших работ [1] мы сообщили о результатах исследований растений рода Cerastium L. методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на наличие в видах рода соединений экдистерона, полиподина Б, виценина, являющихся перспективными для изучения как в качестве маркерных соединений семейства гвоздичные, так и для использования их фармакологических эффектов для лечения и профилактики различных заболеваний. В частности, имеются данные об использовании Cerastium holosteoides Fr. в качестве противоопухолевого средства народной медицины [2], C. arvense L. в качестве успокаивающего и противогеморроидального средства [3], C. glomeratum Thuill. обладает диуретическим, тонизирующим действием, используется в народной медицине Италии. Растения синтезируют углеводы, фенолкарбоновые кислоты, флавоноиды [4]. Allochrusa tadshikistanica Schischk. обладает отхаркивающим и ранозаживляющим действием, а также содержит сапонины. Растения рода Stellaria L. также содержат большое количество различных БАВ, производных витаминов, флавоноидов, алкалоидов и т.д.; они обладают болеутоляющим, гипотензивным, антибактериальным и противоопухолевым эффектами [4].
Надземные части Arenaria serpyllifolia L. в народной медицине Индии применяются при заболеваниях мочевого пузыря, хроническом цистите, нарушениях функции почек [4–5].
Злостный сорняк Stellaria media (L.) Vill. широко используется в народной медицине многих стран в качестве антиревматоидного, противовоспалительного, вяжущего, успокоительного, противопсориазного, противоотечного и противозудного средства [6].
Многочисленные фармакологические эффекты, проявляемые растениями, зависят от их химического состава, биологически активных веществ (БАВ), обуславливающих свое действие на организм. Одним из наиболее перспективных классов БАВ являются фитоэкдистероиды, действие которых проявляется многочисленными, в т.ч. перечисленными, эффектами. Виценин, флавоноидный гликозид, также является актуальным для изучения, т.к. в настоящий момент уже установлено, что соединение обладает сильным противовоспалительным [7–8], антигликационным, антиоксидантным, противоопухолевым, гепатопротекторным, противорадиационным [9] эффектами, также в некоторых исследованиях говорится о положительных результатах лечения виценином диабета и сопутствующих ему осложнений [8], тяжелых форм сепсиса [10].
В соответствии с этим поиск экдистероид- и виценинсодержащего сырья является актуальной задачей в настоящее время, однако многими исследователями были получены результаты изучения многих растений семейства, в которых фитоэкдистероиды не были идентифицированы [11–13].
Исходя из этого цель данной работы: фитохимическое изучение некоторых полифенольных (виценин) и стероидных соединений (экдистерон, полиподин Б) отдельных видов растений родов Сerastium L., Arenaria L., Stellaria L., Allochrusa Bunge Ex Boiss. семейства гвоздичные (Caryophyllaceae Juss.).
Материалы и методы исследования
В качестве материала исследования использован гербарный материал растений кафедры, полученный из различных гербариев стран СНГ, а также сырье, собранное в окрестностях г. Рязани. Исследование проводили на оборудовании, указанном в более ранних статьях [1].
Пробоподготовку проводили согласно описанной ранее методике [1]. На анализ брали навески растительных образцов, для анализа параллельно готовили серию 0,025 % растворов сравнения в 50 % спирте этиловом: экдистерона, виценина, полиподина Б. По 20 мкл исследуемых растворов и растворов сравнения вводили в хроматограф и хроматографировали в описанных ранее условиях [1].
Для количественного определения поступали следующим образом: готовили растворы РСО виценина, полиподина Б, экдистерона в 50 % спирте этиловом. Для этого около 0,0020 г (точная навеска) виценина, полиподина Б, экдистерона помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, прибавляли 8 мл спирта этилового 50 %, перемешивали до растворения и доводили объём до метки тем же растворителем.
По 20 мкл исследуемого раствора и растворов РСО вводили в хроматограф и хроматографировали по вышеприведенной методике.
Расчёт относительного количественного содержания виценина, полиподина Б, экдистерона производили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной программы «Мультихром» для «Windows» и с помощью формулы
где Sисх – площадь пика виценина или полиподина Б, экдистерона в исследуемом растворе;
Sст – площадь пика стандартного раствора РСО виценина, полиподина Б, экдистерона;
Х – концентрация виценина или полиподина Б, %;
С – концентрация РСО виценина или полиподина Б, г\мл;
а – навеска исследуемого образца, г.
W– потеря в массе при высушивании, %.
Р – чистота РСО виценина или полиподина Б, экдистерона, %.
Рис. 1. Хроматограмма ВЭЖХ водно-спиртового извлечения Cerastium glomeratum Thuill.
Рис. 2. Хроматограмма ВЭЖХ водно-спиртового извлечения Cerastium holosteoides Fries.
Рис. 3. Хроматограмма ВЭЖХ водно-спиртового извлечения Allochrusa tadshikistanica Schischk.
Рис. 4. Хроматограмма ВЭЖХ водно-спиртового извлечения Arenaria serpyllifolia L.
Результаты количественного определения виценина и полиподина Б, экдистерона методом ВЭЖХ
|
№ п/п |
Наименование образца |
Содержание, % |
||
|
экдистерон |
полиподин Б |
виценин |
||
|
1 |
Cerastium holosteoides Fr. |
0,0889 |
– |
0,0182 |
|
2 |
Cerastium alpinum L. |
– |
0,021 |
0,046 |
|
3 |
Cerastium glomeratum Thull. |
0,077 |
0,105 |
0,216 |
|
4 |
Cerastium glutinosum Fr. |
0,00486 |
0,039 |
0,0397 |
|
5 |
Cerastium dichotomium L. |
0,00996 |
– |
0,116 |
|
6 |
Cerastium maximum L. |
0,0025 |
0,0131 |
0,432 |
|
7 |
Cerastium pauciflorum Steven ex Ser. |
0,0079 |
– |
0,053 |
|
8 |
Cerastium dahuricum Fisch. |
– |
– |
0,0799 |
|
9 |
Cerastium perfoliatum L. |
0,0024 |
0,0076 |
0,0453 |
|
10 |
Arenaria juncea (Bieb.) Fenzl |
0,034 |
0,0019 |
0,00221 |
|
11 |
Arenaria formosa Fisch ex Ser |
0,0031 |
– |
0,0127 |
|
12 |
Arenaria serpyllifolia L. |
0,0015 |
0,0018 |
0,1806 |
|
13 |
Stellaria media (L.) Vill. |
– |
0,0064 |
0,005 |
|
14 |
Stellaria holostea L. |
0,0057 |
– |
0,043 |
|
15 |
Stellaria graminea L. |
0,403 |
0,0095 |
0,0083 |
|
16 |
Allochrusa tadshikistanica Schischk. |
0,022 |
0,0092 |
0,0603 |
Примечание. «–» – определяемое вещество не было обнаружено.
Результаты исследования и их обсуждение
В результате исследования растительных образцов методом ВЭЖХ были получены данные, представленные на рис. 1–4 и в таблице.
В результате проделанной работы можно сказать, что фитоэкдистероиды и виценин характерны для большинства изучаемых нами образцов растений семейства гвоздичные, т.к. в них в той или иной степени были найдены эти маркерные для Caryophyllaceae Juss. соединения. В процессе пробоподготовки и проведения анализа ВЭЖХ была использована специально разработанная методика, предполагающая использование спирта концентрации 50 % а также более концентрированный растительный экстракт. Такой подход гарантировал большую чувствительность при идентификации экдистерона, полиподина Б и виценина, что продемонстрировано на представленных хроматограммах и в таблице.
Виды Cerastium biebersteinii DC., Cerastium arvense L. нами были проанализированы ранее, в составе данных растений были также обнаружены фитоэкдистероиды и виценин [1].
Выводы
1. В проведенном ВЭЖХ исследовании фитоэкдистероиды экдистерон, полиподин Б и флавоноид виценин были впервые обнаружены у видов: Cerastium holosteoides Fr., C. alpinum L., C. glomeratum Thull., C. glutinosum Fr., C. dichotomium L., C. maximum L., C. pauciflorum Steven ex Ser., C. perfoliatum L., Arenaria juncea (Bieb.) Fenzl, A. formosa Fisch ex Ser, A. serpyllifolia L., Stellaria media (L.) Vill., S. holostea L., S. graminea L., Allochrusa tadshikistanica Schischk. Впервые виценин был обнаружен у Cerastium dahuricum Fisch.
2. Впервые была разработана методика пробоподготовки растительных образцов для последующей идентификации полифенольных и стероидных соединений методом ВЭЖХ, заключающаяся в использовании этилового спирта 50 % концентрации и приготовления меньшего объема спиртоводного извлечения (25 мл).
3. Полученные данные подтверждают наличие экдистерона, полиподина Б и виценина в описанных образцах растений несмотря на отрицательные результаты исследований, проведенных ранее [11–13], и обуславливают актуальность их дальнейшего изучения.