Важным фактором патогенеза алкогольной зависимости является структурно-функциональная дезорганизация эритроцитов при хроническом действии этанола и его метаболитов, в частности ацетальдегида и продуктов ПОЛ. Эритроциты подвергаются как прямому токсическому действию этанола и продуктов его метаболизма, так и окислительной модификации липидной компоненты эритроцитарных мембран [1–4]. Модификация липидного бислоя сопровождается изменением морфологии эритроцитов, снижением гемолитической устойчивости, возможным развитием анемии, нарушением роли в поддержании адекватного иммунного ответа [5–7]. Показано, что у больных алкоголизмом снижены значения большинства гематологических параметров [8], вместе с тем в литературе практически не освещен вопрос зависимости этих показателей от клинических характеристик и динамики течения алкоголизма.
Цель исследования
Изучить параметры красной крови больных алкоголизмом при терапии синдрома отмены и постабстинентного состояния; оценить влияние аскорбата лития на экспрессию поверхностных рецепторов лимфоцитов.
Таблица 1
Характеристика красной крови больных алкоголизмом в динамике лечения постабстинентного состояния
|
Показатели |
Meдиана (LQ–UQ) |
р |
||
|
Пациенты, точки обследования |
Контроль N = 19 |
|||
|
1 точка N = 35 |
2 точка N = 28 |
|||
|
Число эритроцитов (RBC), 10х12/l |
4,46 (4,17–4,84) |
4,63 (4,34–4,84) |
5,03 (4,73–5,19) |
Р1 = 0,000 Р2 = 0,001 |
|
Уровень гемоглобина (HGB), g/dl |
14,65 (13,50–15,20) |
14,90 (14,40–15,25) |
16,50 (15,80–17,20) |
Р1 = 0,000 Р2 = 0,000 |
|
Гематокрит (HCT), % |
41,45 (38,20–43,80) |
42,30 (39,95–44,35) |
45,80 (43,80–47,30) |
Р1 = 0,000 Р2 = 0,000 |
|
Объем эритроцитов (MCV), µm3 |
92,00 (90,00–96,00) |
92,00 (89,50–94,00) |
90,00 (89,00–93,00) |
Р1 = 0,525 Р2 = 0,891 |
|
Концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC), g/dl |
35,30 (24,40–35,90) |
35,20 (34,05–35,75) |
36,20 (36,00–36,60) |
Р1 = 0,000 Р2 = 0,000 |
Примечание. p1 – достоверность различий показателей в 1 точке к контролю; p2 – достоверность различий показателей во 2 точке к контролю.
Материалы и методы исследования
Обследовано 35 мужчин (средний возраст 46,6 ± 10,0 лет), страдающих алкогольной зависимостью. Диагноз больных по МКБ-10 квалифицировался как «Психические и поведенческие расстройства в результате употребления алкоголя (синдром зависимости – F10.21 и синдром отмены – F10.30); длительность заболевания составила 10,6 ± 9,2 лет. Контрольная группа – 19 практически здоровых мужчин, соответствующих по возрасту группе пациентов. Гематологические исследования пациентов были проведены на этапе синдрома отмены алкоголя в динамике терапии постабстинентного состояния: 1 точка на 3–4 день поступления пациента в стационар после проведения курса дезинтоксикационной терапии, 2 точка – на 12–14 день стандартной терапии постабстинентного состояния с назначением основных групп препаратов для коррекции аффективных нарушений, диссомнических, нейровегетативных расстройств и редукции симптомов проявления зависимости от алкоголя в острый период синдрома отмены.
Забор крови для исследований осуществляли из локтевой вены утром натощак с использованием стерильной системы однократного применения Vacutainer («Becton Dickinson», USA) с антикоагулянтом EDTA. Гематологический анализ крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе Micros 60 (HORIBA ABX SAS). Фенотипы лимфоцитов с поверхностными рецепторами (поверхностными антигенами, кластерами дифференцировки CD) определяли на автоматическом проточном цитометре системы BD FACSCalibur.
Исследование с участием людей проведено с соблюдением принципов информированного согласия Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации и одобрено Локальным этическим комитетом при НИИ психического здоровья Томского НИМЦ (протоколы № 53/4 от 01.10.2012; № 361 от 23.10.2017 г.).
Статистическую обработку данных осуществляли с использованием пакета программ STATISTICA для Windows, версия 12.0. Описательная статистика представлена средним арифметическим значением M, стандартной ошибкой среднего m, стандартным отклонением σ, медианой Ме и межквартильным интервалом (LQ – UQ). Корреляционный анализ проводили с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена (rS). Использовали уровень достоверности p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
В ходе исследования установлено, что число эритроцитов (RBC), занимаемый ими объем крови (гематокрит), уровень гемоглобина и концентрация его в эритроците (MCHC) в группе пациентов при синдроме отмены этанола в 1 точке исследования были с высокой степенью достоверности снижены по сравнению с контрольной группой мужчин (табл. 1).
К концу периода наблюдения на 12–14 день терапии постабстинентного состояния у пациентов отмечается уменьшение степени тяжести симптомов абстиненции, исчезновение вегето-соматической, алгической симптоматики, субъективно удовлетворительное самочувствие, при этом исследуемые гематологические параметры остаются практически без изменения.
Показатель среднего объема эритроцитов (MCV) в группе пациентов и здоровых мужчин был сопоставим. В то же время значительное число публикаций посвящено обсуждению макроцитоза, макроцитарной анемии – состоянию, при котором объем эритроцита равен или более 100 фемтолитров (фл.), или мкм3. Stouten K et al. [9] показали, что макроцитарная анемия является относительно частой в общей медицинской практике, и среди этиологических факторов патологии эритроцитов – злоупотребление алкоголем. Исследователями отмечается разная частота встречаемости макроцитоза (MCV ≥ 100 fL) у больных алкоголизмом – от 24,1 % до 36,5 % случаев. Аномалия эритроцитов при алкоголизме может быть связана с непосредственным токсическим действием алкоголя на мембраны эритроцитов, высоким уровнем ацетальдегида, продуктами ПОЛ, а также недостаточностью питания [6; 10]. В нашем исследовании в группе больных значение MCV ≥ 100 µm3 (при сниженном по сравнению с контролем уровне гемоглобина) установлено у 29,4 % лиц. Тогда как в группе контроля макроцитоз (MCV = 105 µm3) отмечен только у одного человека при уровне гемоглобина у него 17,5 g/dl.
Далее нами был проведен корреляционный анализ зависимости всех гематологических параметров от клинических характеристик алкоголизма, таких как длительность заболевания и суточная толерантность пациентов к этанолу в пересчете на водку. Толерантность к психоактивному веществу определяется его минимальной дозой, способной вызвать желаемый психофизический эффект. Установлена прямая статистически значимая корреляционная зависимость между числом эритроцитов (RBC) и уровнем толерантности как в 1-й точке обследования, так и во 2-й (r = 0,33; r = 0,35; р < 0,001). Возможно, прямая зависимость объясняется тем, что высокая толерантность свидетельствует о большей адаптивности и сохранности гомеостатических систем организма; при дальнейшем развитии заболевания происходит снижение адаптивных возможностей организма к действию алкоголя и, соответственно, снижение толерантности [11]. В данном фрагменте исследования обнаружены слабые отрицательные корреляции между числом эритроцитов, гематокритом, уровнем гемоглобина с длительностью заболевания (r = – 0,22; – 0,23; – 0,23 соответственно).
В связи с аномалиями эритроцитов у больных алкоголизмом важное значение приобретает расширение арсенала защитных средств биологических мембран эритроцитов от воздействия этанола. В лечении пациентов с расстройствами аффективного спектра (депрессивным эпизодом, биполярным аффективным расстройством, алкогольной зависимостью с аффективными нарушениями) применяются соли лития, чаще в виде карбоната. Ранее нами в опытах in vitro был выявлен гемопротекторный эффект аскорбата лития, заключающийся в повышении в 1,5–2 раза устойчивости эритроцитов к гемолизу, индуцированному этанолом [12]. Представляются актуальными исследования действия аскорбата лития на мембраны лимфоцитов пациентов с алкогольной зависимостью.
В литературе имеются сведения об иммуносупрессивном действии этанола. Вместе с тем отмечается сложность и неясность молекулярных механизмов влияния этанола на систему иммунитета и имеются факты активации адаптивного иммунитета при алкогольной зависимости. В нашем исследовании не обнаружено снижения популяций Т-лимфоцитов у больных алкоголизмом при синдроме отмены (табл. 2).
Напротив, относительное количество зрелых Т-лимфоцитов в 1 точке обследования было повышено по отношению к контролю, что может быть обусловлено включением компенсаторных механизмов при стрессе, поскольку длительное потребление алкоголя и его отмена является мощным стрессором [13, 14].
Таблица 2
Популяции Т-лимфоцитов у больных алкоголизмом
|
Показатели |
Meдиана (LQ–UQ) |
||
|
Пациенты, точки обследования |
Контроль, n = 19 |
||
|
1 точка, n = 35 |
2 точка, n = 28 |
||
|
Т-клетки CD3+ (CD3+CD19–), % |
78,00 (71,00–81,00) p1 = 0,016 |
76,00 (68,00–80,00) |
73,00 (68,00–77,00) |
|
Т-хелперы CD4+(CD3+CD4+), % |
47,00 (44,00–53,00) |
45,00 (39,00–49,00) |
47,00(43,00–54,00) |
|
Т-цитотоксические CD8+ (CD3+CD8+), % |
27,00 (21,00–32,00) |
26,00 (22,00–34,00) |
22,00(16,00–31,00) |
Примечание. p1 – достоверность к контролю.
Таблица 3
Влияние аскорбата лития на экспрессию рецепторов лимфоцитов (M ± m)
|
Параметры |
Количество лимфоцитов в пробах крови больных алкоголизмом (n = 6) |
|
|
контроль |
пробы с аскорбатом лития |
|
|
Т-клетки (CD3+CD19-), % |
75,83 ± 4,26 |
75,01 ± 4,21 |
|
Т-хелперы (CD3+CD4+), % |
41,00 ± 2,13 |
41,02 ± 2,15 |
|
Т-цитотоксические (CD3+CD8+), % |
34,17 ± 3,84 |
34,00 ± 4,01 |
Проведены предварительные эксперименты по влиянию аскорбата лития на экспрессию поверхностных рецепторов лимфоцитов больных алкоголизмом. К пробам крови 6 пациентов (1 точка обследования) добавляли равный объем раствора лития аскорбата, содержащего 500 мкл/мл лития (опыт), или физиологического раствора (контроль) и инкубировали с реагентами для проточной цитометрии. Результаты цитометрии показали, что аскорбат лития в исследуемой дозе не оказывал негативного влияния на мембраны лимфоцитов и количество Т-лимфоцитов, Т-хелперов, цитотоксических Т-лимфоцитов в контрольных пробах крови и в нагрузочных пробах с аскорбатом лития было сопоставимо (табл. 3).
Возможно, устойчивость мембран лимфоцитов к аскорбату лития связана с его антиоксидантным действием. Вольтамперометрическим методом был установлен антиоксидантный эффект аскорбата лития в отношении активных форм кислорода. Процесс четырехэлектронного катодного восстановления кислорода в известной степени моделирует процессы дыхательной цепи на внутренней мембране митохондрий. Влияние аскорбата лития проявляется в нейтрализации кислородных радикалов и уменьшении тока [15].
В целом проведенные исследования выявили статистически значимое по отношению к контролю снижение большинства показателей красной крови в группе мужчин, страдающих алкоголизмом, в динамике терапии синдрома отмены и постабстинентного состояния. Макроцитоз (MCV ≥ 100 µm3) установлен у 29,4 % лиц с алкогольной зависимостью и у 1 человека из 19 группы контроля. Установлена прямая корреляционная зависимость между числом эритроцитов и уровнем суточной толерантности. Ранее в опытах in vitro нами был обнаружен позитивный гемопротекторный эффект аскорбата лития. Данные в рамках настоящего исследования свидетельствуют об отсутствии негативного влияния аскорбата лития на экспрессию поверхностных рецепторов лимфоцитов больных алкоголизмом. Полученные обнадеживающие результаты по гемопротекторной, мембранопротекторной и антиоксидантной активности аскорбата лития являются основанием для дальнейших исследований других химически синтезированных органических солей лития с целью выявления наиболее перспективных соединений для разработки в будущем фармакологических препаратов, обладающих комбинированным нормотимическим, цитопротекторным, антиоксидантным действием и расширяющих спектр лекарственных средств при лечении психической патологии аффективного спектра.
Исследование выполнено при поддержке гранта Российского научного фонда (проект № 17-75-20045).