Scientific journal

International Journal of Applied and fundamental research

ISSN 1996-3955

ИФ РИНЦ = 0,593

Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), а именно язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК), являются прогрессирующим иммунным воспалением желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). ЯК поражает только толстый кишечник и характер поражения поверхностный, в то время как при болезни Крона поражение трансмуральное и может затронуть любой отдел ЖКТ [1].

Важными элементами воспаления в кишечной стенке являются лимфоциты, нейтрофилы и мононуклеары, которые обильно инфильтрируют последнюю, продуцируя большое количество провоспалительных интерлейкинов, свободных радикалов и активных форм кислорода. Также нейтрофилы, и в меньшей степени моноциты, способны продуцировать кальпротектин, обнаружение которого в кале на данный момент рассматривается как биомаркер, отражающий активность воспаления в кишечнике и весьма специфичен для язвенного колита и болезни Крона [2].

В развитии воспалительной реакции при ВЗК немалое значение имеют В-лимфоциты, синтезирующие специфические антитела к перинуклеарным нейтрофильным антигенам (pANKA), которые чаще всего выявляются при ЯК, и манановому полисахариду клеточной стенки Saccharomyces cerevisiae (ASCA), чаще ассоциированные с БК [3, 4].

Обнаружение антител для проведения дифференциальной диагностики между ЯК и БК недостаточно чувствительный и специ- фичный метод, а также весьма дорогостоящий. Определение кальпротектина, как в кале, так и в сыворотке крови, несмотря на высокую чувствительность метода, как маркера активности воспаления, оценки эффективности проводимой терапии, не позволяет провести дифференциальную диагностику между ЯК и БК.

Изучению цитохимической активности нейтрофилов и моноцитов крови у пациентов терапевтического профиля посвящены единичные работы, что определяет актуальность нашего исследования [5–7].

Цель исследования: оценить информативность определения активности окислительно-восстановительных ферментов нейтрофилов и моноцитов периферической крови, как дополнительный критерий дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона.

Материалы и методы исследования

В условиях гастроэнтерологического отделения ГБУЗ АО «Александро-Мариинская областная клиническая больница» было обследовано 69 пациентов с ВЗК в возрасте от 20 до 65 лет: с ЯК 49 человек и 20 человек с БК (55 % женщин, 45 % мужчин в обеих группах).

Критериями включения в исследование послужили следующие параметры: наличие диагноза «язвенный колит», «болезнь Крона», возраст от 20 до 65 лет.

Критериями исключения явились: злокачественные новообразования, заболевания системы крови, острые бактериальные и вирусные инфекции, возраст старше 65 лет.

Диагноз установлен согласно клиническим рекомендациям Российской гастроэнтерологической ассоциации и ассоциации колопроктологов России.

При поступлении в стационар 26 пациентов с ЯК и все пациенты с БК уже принимали базисную противовоспалительную терапию (5-аминосалициловая кислота, глюкокортикостероиды, азатиоприн), 23 пациента я ЯК подобную терапию не получали.

В контрольную группу вошли 35 здоровых доноров. Средний возраст женщин с ВЗК 44,1 (мин. 31, макс. 54 лет), мужчин 43,3 (мин. 20, макс. 62 лет).

По локализации воспалительного процесса у 65 % пациентов с ЯК левосторонний колит, 16,7 % – тотальный колит. Среди пациентов с болезнью Крона чаще всего обнаруживался терминальный илеит – 10,0 %, илеоколит был выставлен у 8,3 %. По характеру течения заболевания у 73,3 % пациентов с ЯК и всех пациентов с БК наблюдалось хроническое рецидивирующее, у 5 % и 3,3 % пациентов с ЯК – хроническое непрерывное и острое течение соответственно. У 59,2 % пациентов с ЯК диагностирована средняя степень тяжести атаки заболевания, у 20,4 % пациентов лёгкая и у такого же количества пациентов тяжелая степень тяжести по критерию Truelove-Witts. У 11 пациентов (55 %) тяжесть атаки БК была расценена как лёгкая, что соответствовало индексу Беста в диапазоне 150–300 баллов, у 9 пациентов (45 %) выставлена среднетяжёлая атака с индексом Беста в пределах 301–450 баллов.

Системные проявления ВЗК среди пациентов встречались со следующей частотой: у всех пациентов был выявлен синдром эндотоксемии, метаболические расстройства – у 20,4 % пациентов, артрит диагностирован у 18,4 % пациентов, узловатая эритема – у 22,4 %.

Цитохимические исследования проводились как при поступлении в стационар, так и по выписке. В венозной крови определялась активность метаболических ферментов нейтрофилов и моноцитов, а именно сукцинатдегидрогеназы (СДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) [8]. Для исследования дегидрогеназной активности нейтрофилов и моноцитов использовался метод Р.П. Нарциссова (1970), выделение моноцитов осуществлялось методикой И.С. Фрейдлин (1978).

Для более объективной оценки результатов цитохимических реакций нами применен метод полуколичественной оценки Kaplow [9] с определением среднего цитохимического показателя (СЦП), который является показателем активности реакции в условных единицах. Согласно этому методу, в специально окрашенном препарате крови подсчитывают 100 клеток и разделяют их на группы в зависимости от интенсивности окраски цитоплазмы или количества содержащегося в них цитохимически активного вещества.

– 0 – нулевая группа, цитоплазма не окрашена, гранул нет;

– 1 степень (низкая, степень «а») – в цитоплазме единичные гранулы или слабое диффузное окрашивание;

– 2 степень (средняя, степень «б») – 30– 70 % цитоплазмы заполнено гранулами, диффузная окраска почти всей цитоплазмы;

– 3 степень (высокая, степень «в») – 70–100 % цитоплазмы заполнено гранулами, выраженное окрашивание цитоплазмы.

Средний цитохимический показатель (СЦП) рассчитывали путем подсчета 100 клеток (нейтрофилов или моноцитов) в мазке крови, используя формулу: СЦП = а + 2б + 3в (усл. ед.).

Для обработки полученных данных использовался пакет программ Статистика 8. Достоверность полученных величин определяли с помощью критерия χ2. Достоверными считали различия при p < 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Согласно полученным результатам, статистически значимых различий между активностью окислительно-восстановительных ферментов нейтрофилов и моноцитов пациентов, находящихся на базисной противовоспалительной терапии, и пациентов, не получавших таковую терапию на момент госпитализации в стационар, не обнаружено, поэтому далее мы приведем средние значения. Отсутствие различий объясняется малой продолжительностью предшествующей госпитализации терапии (1–2 месяца).

При поступлении в стационар активность СДГ нейтрофилов пациентов с ЯК превышала норму в 7 раз и составила 108 ± 0,02 у.е. (норма СДГ 15,04 ± 0,02 у.е.). Активность ЛДГ составила 116 ± 0,02 у.е. (норма ЛДГ 15,04 ± 0,02 у.е.), что превышало нормальные значения также более чем в 7 раз. СЦП активности Г-6-ФДГ при норме 15,04 ± 0,02 у.е. составила 152 ± 0,02 у.е., это превышение нормы в 10 раз. Реагирующие клетки по всем трем ферментам были представлены клетками степени «б».

В отношении моноцитов обнаружилась следующая тенденция. Активность СДГ моноцитов составила 76,02 ± 0,01 у.е. (норма СДГ 20,02 ± 0,01 у.е.), ЛДГ – 56,02 ± 0,04 у.е. (норма ЛДГ 15,16 ± 0,04 у.е.), что превысило нормальные значения более чем в 3 раза. Средний цитохимический показатель активности Г-6-ФДГ составил 67 ± 0,04 у.е. при норме 15,60 ± 0,04 у.е. (превышение нормы в 4 раза). Качественный состав реагирующих моноцитов по всем трём ферментам был представлен клетками степени «а» и в меньшей степени «б».

У пациентов с БК мы получали следующие результаты.

При госпитализации в гастроэнтерологическое отделение активность СДГ нейтрофилов составила 92 ± 0,02 у.е. при норме СДГ 15,04 ± 0,02 у.е. (превышение нормы в 6 раз). Активность ЛДГ и Г-6-ФДГ составила 67 ± 0,02 у.е. и 71 ± 0,02 у.е. соответственно (норма 15,04 ± 0,02 у.е.), что превысило нормальные показатели в 4 раза. По всем трем ферментам клетки были 1 степени активности.

Далее мы выявили корреляционные связи средней и высокой силы между активностью ВЗК, клинико-лабораторными показателями и активностью окислительно-восстановительных ферментов нейтрофилов и моноцитов.

У пациентов с ЯК обнаружена сильная положительная корреляционная связь между частотой стула и всеми исследуемыми ферментами нейтрофилов и моноцитов (в среднем r = 0,8), температурой тела (в среднем r = 0,72) и уровнем СОЭ (в среднем r = 0,75). Отрицательная сильная корреляция выявлена между показателем гемоглобина и всеми указанными выше ферментами (в среднем r = –0,73), т.е. чем выше активность ферментов, тем выраженней анемия.

У пациентов с БК выявлена положительная сильная корреляция между величиной индекса Беста и активностью ферментов нейтрофилов и моноцитов крови и величиной индекса Беста (в среднем r = 0,75). Таким образом, чем выше индекс Беста, отражающий активность заболевания, тем выше активность СДГ, ЛДГ и Г-6-ФДГ нейтрофилов и моноцитов крови.

Обнаружена сильная положительная корреляция между активностью вышеперечисленных ферментов нейтрофилов и моноцитов и уровнем СОЭ (в среднем r = 0,80), лейкоцитами (в среднем r = 0,75), уровнем СРБ (в среднем r = 0,81), отрицательная корреляция средней силы между вышеперечисленными ферментами и уровнем общего белка крови (в среднем r = –0,73).

Далее мы прибегли к регрессионному анализу для оценки риска развития ЯК и БК в зависимости от активности СДГ, ЛДГ, Г-6-ФДГ нейтрофилов и моноцитов крови. Этот метод позволяет установить возможную зависимость криториальной, т.е. зависимой переменной (в нашем случае показатель, отражающий основную желудочно-кишечную нозологию) от нескольких предикторов, т.е. независимых переменных (СДГ, ЛДГ, Г-6-ФДГ нейтрофилов и моноцитов крови).

Бета-коэффициенты отражают вклад каждого предиктора в предсказание отклика. СДГ нейтрофилов и моноцитов не вносит вклад в развитие ЯК и БК, поскольку для этих показателей уровень значимости: р > 0,005 (таблица).