Ахатина гигантская (Achatina fulica, Achatinidae, Gastropoda), крупный сухопутный моллюск, распространенный в России и других странах Европы как домашний питомец, опасный инвазивный вид в странах тропического климата. Ахатина съедобна и культивируется в странах Африки, Юго-Восточной Азии и Южной Америки. Мясо ахатины характеризуется высоким содержанием белка, низким содержанием углеводов и жира, в нем присутствуют почти все аминокислоты, необходимые человеку. Основными макро- и микроэлементами, содержащимися в мясе, являются кальций, фосфор, калий, цинк, марганец, железо и медь [1–4]. Содержание в мясе незаменимых жирных кислот составляет 16,6 % от их общего количества, среди незаменимых жирных кислот доминируют линоленовая и линолевая кислоты. Achatina fulica перспективна для использования в искусственных биорегенеративных системах жизнеобеспечения, служащих для автономного существования человека на космических станциях и т.п., так как ахатины способны потреблять и перерабатывать несъедобную биомассу растений и пищевые отходы, быстро расти и набирать массу. Добавление мяса улитки к основному рациону позволяет увеличить продовольственную независимость биорегенеративной системы жизнеобеспечения до 97 % [5].
Слизь (муцин) Achatina fulica используется в косметике и косметологии благодаря своим антибактериальным, заживляющим и омолаживающим свойствам [6, 7]. Выявлено, что слизь проявляет антибактериальную активность как в отношении грамположительных (Bacillus subtilis и Staphylococcus aureus), так и в отношении грамотрицательных бактерий (Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa). Предполагается, что антибактериальным фактором слизи улитки является гликопротеин с молекулярной массой около 160.000 [8].
Муцин Achatina fulica оказывает защитное действие на фибробласты и коллаген [9], что может использоваться для предотвращения фотостарения под воздействием УФ-облучения [10]. Из слизи выделен гликозаминогликан ахаран сульфат, имеющий первичную повторяющуюся дисахаридную структуру α-DN-ацетилглюкозаминил-2-O-сульфо-α-L-идуроновой кислоты. Ахаран сульфат в опытах как in vivo, так и in vitro продемонстрировал противоопухолевую активность, которая связана с ингибированием ангиогенеза [11]. Муцин улитки, приготовленный в виде сухого порошка сублимационной сушкой, обладает потенциальным действием для регенерации и восстановления костей и зубов [12]. Лектин, выделенный из слизи улитки и способствующий ее врожденному иммунитету [13], содержит антимикробные пептиды, в том числе цистеин-богатый антимикробный пептид митамицин-AF, состоящий из 80 аминокислотных остатков, включая 10 цистеинов. Митамицин-AF обладает выраженной антимикробной активностью против грамотрицательных и грамположительных бактерий и грибка Candida albicans [14]. Пептиды слизи A. fulica показали in vitro цитотоксичность в отношении линий клеток рака молочной железы (MCF-7) и клеток нормального эпителия (Vero), что делает эти вещества перспективными для разработки новых противораковых лекарственных средств [15].
Цель исследования – изучение компонентного состава летучих веществ в спиртовом извлечении из тканей ахатины гигантской (Achatina fulica).
Материалы и методы исследования
Анализ проводили методом ГЖХ-МС на хромато-масс-спектрометре Varian 450GC-220MS с масс-анализатором типа «ионная ловушка. Извлечение получали настаиванием тканей моллюска (Achatina fulica) с 90 % (по объему) этиловым спиртом в соотношении 1:10 в течение 14 сут.
Хроматографическое разделение компонентов пробы проводили на кварцевой капиллярной колонке FactorFOUR VF-5ms (30 м×0,25 мм). Газ-носитель – гелий с постоянной скоростью потока 1,0 мл/мин. В инжектор хроматографа при температуре 200 °С (деление потока 10) вводят 1 мкл испытуемого раствора. Температурная программа колонки: 50 °С – 5 мин, нагрев до 110 °С со скоростью 5 °С/мин, 110 ° – 2 мин, нагрев до 240 °С – 25 °С/мин, изотерма при 240 °С 10 мин. Идентификацию разделенных компонентов проводили с использованием библиотеки масс-спектров NIST08 Mass Spectral Library и алгоритмов сравнения программного обеспечения Saturn (Varian). Количественную оценку осуществляли методом нормализации по площади пиков (полный ионный ток) идентифицированных соединений с использованием автоматической системы обработки.
Результаты исследования и их обсуждение
В извлечениях из тканей Achatina fulica было найдено 152 соединения, из которых идентифицировано 78 веществ. Состав и относительные содержания этих компонентов приведены на рис. 1 и в таблице.
Рис. 1. Хроматограмма спиртового извлечения из Achatina fulica
Рис. 2. Масс-спектр 2-(4-изобутилфенил)-пропионовой кислоты в сравнении с библиотечным
Состав спиртового извлечения из Achatina fulica
|
№ |
Время (мин) |
Название вещества |
Площадь пика |
% |
Вероятн. cовпаде-ния, % |
CAS Номер |
|
1 |
3.717 |
3-Метилбутановая (изовалериановая) кислота |
278859 |
0.34 |
73.82 |
503-74-2 |
|
2 |
3.972 |
2-Фуранметанол |
8484 |
0.01 |
61.36 |
98-00-0 |
|
4 |
5.947 |
1,1,1-Трифторогексанон |
258754 |
0.32 |
32.59 |
360-34-9 |
|
5 |
7.281 |
2,3-Дигидроксипропаналь-, (S)- |
162332 |
0.20 |
52.36 |
497-09-6 |
|
6 |
8.909 |
1-(Тетрагидрофуран-2-ил)-N-(тетрагидрофуран-2-илметил)метанамин |
9845 |
0.01 |
18.86 |
5343-16-8 |
|
7 |
10.831 |
3-(Метилтио)-пропионовая кислота |
96700 |
0.12 |
76.46 |
646-01-5 |
|
8 |
10.961 |
Мальтол |
54366 |
0.07 |
77.16 |
118-71-8 |
|
9 |
12.042 |
Гидроксидигидромальтол |
2.43E+06 |
3.00 |
74.18 |
28564-83-2 |
|
10 |
12.596 |
Валериановый ангидрид |
17680 |
0.02 |
35.01 |
2082-59-9 |
|
11 |
13.187 |
Моноэтилсукцинат |
465933 |
0.58 |
88.75 |
1070-34-4 |
|
12 |
13.882 |
Изовалериановый ангидрид |
42679 |
0.05 |
35.45 |
1468-39-9 |
|
13 |
13.889 |
3β,28-Бис[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]луп-20(29)-ен-21β-ол 3,3-диметилбутаноат |
40093 |
0.05 |
23.64 |
55401-92-8 |
|
14 |
14.226 |
5-Гидроксиметилофурфурол |
161542 |
0.20 |
64.08 |
67-47-0 |
|
15 |
14.515 |
1,2,3-Пропантриол, 1-ацетат |
625615 |
0.77 |
51.76 |
106-61-6 |
|
16 |
15.443 |
Фениляблочная кислота |
274592 |
0.34 |
30.16 |
2613-89-0 |
|
17 |
15.469 |
Фенилуксусная кислота |
328446 |
0.41 |
44.09 |
103-82-2 |
|
18 |
17.165 |
D-Цитрамалевая кислота |
148439 |
0.18 |
15.79 |
6236-10-8 |
|
19 |
17.783 |
3-Гидрокси-2-метил-3-фенил-пропионовая кислота |
12507 |
0.02 |
12.9 |
– |
|
20 |
18.454 |
3-Хлоро-пропановой кислоты 4-формилфениловый эфир |
73522 |
0.09 |
39.45 |
– |
|
21 |
19.685 |
1-нитро-β-d-арабинофуранозы татраацетат |
37679 |
0.05 |
48.98 |
– |
|
22 |
21.526 |
8-Ацетил-8-азабицикло[3.2.1]октан |
255658 |
0.32 |
63.93 |
769-04-0 |
|
23 |
22.914 |
1-нафтойной кислоты пентафторфениловый эфир |
49015 |
0.06 |
7.64 |
– |
|
24 |
23.335 |
Фумаровой кислоты 2-хлорфенилэтиловый эфир |
37357 |
0.03 |
18.1 |
– |
|
25 |
24.098 |
2-(4-Изобутилфенил)-N-(3,5-динитрофенил)-пропанамид |
68542 |
0.08 |
64.16 |
135241-50-8 |
|
26 |
25.028 |
2-(4-Изобутилфенил)-пропионовая кислота (Ибупрофен) |
2.93E+07 |
36.17 |
91.83 |
15687-27-1 |
|
27 |
26.157 |
Этил-α-d-глюкопиранозид |
3.90E+06 |
4.81 |
73.24 |
– |
|
28 |
26.301 |
Этил-α-d-глюкопиранозид (изомер) |
7.19E+06 |
8.87 |
46.28 |
– |
|
29 |
26.363 |
Этил-α-d-глюкопиранозид (изомер) |
9.66E+06 |
11.92 |
73.36 |
– |
|
30 |
28.627 |
Тетрадекановой (миристиновой) кислоты С14:0 этиловый эфир |
235714 |
0.29 |
41.75 |
124-06-1 |
|
31 |
29.042 |
Пентадеканаль |
143460 |
0.18 |
11.93 |
09.11.2765 |
|
32 |
29.139 |
Пентакозан |
69385 |
0.21 |
12.18 |
– |
|
33 |
29.916 |
1H-Индол-3-уксусной кислоты этиловый эфир |
51622 |
0.06 |
69.86 |
778-82-5 |
|
34 |
30.097 |
цис-9-Октадеценовой (олеиновой) кислоты С18:1 этиловый эфир |
110214 |
0.14 |
8.47 |
111-62-6 |
|
35 |
30.311 |
Оксациклогексадекан-2-он |
224487 |
0.28 |
19.91 |
106-02-5 |
|
36 |
30.457 |
Цикло(пролил-лейцил), (гексагидро-3-(2-метилпропил)-пиролло(1,2а)- пиразин-1,4-дион) |
68788 |
0.08 |
81.49 |
5654-86-4 |
|
37 |
30.628 |
13-Метил-тетрадекановой кислоты, (13Me-C14:0), этиловый эфир |
191480 |
0.24 |
75.76 |
– |
|
38 |
31.076 |
2-Метил-Z,Z-3,13-октадекадиенол |
26981 |
0.03 |
14.14 |
– |
|
39 |
31.986 |
3-Деокси-17β-эстрадиол |
294414 |
0.36 |
25.8 |
2529-64-8 |
|
40 |
32.098 |
9-Гексадеценовой кислоты, С16:1(n-7), этиловый эфир |
198953 |
0.25 |
13.17 |
54546-22-4 |
|
41 |
32.548 |
Гексадекановой (пальмитиновой) кислоты С16:0 этиловый эфир |
1.78E+06 |
2.20 |
42.35 |
628-97-7 |
|
42 |
33.019 |
Цис-9-эйкозен-1-ол |
75776 |
0.09 |
6.59 |
112248-30-3 |
|
43 |
33.074 |
E-2-Тетрадецен-1-ол |
94659 |
0.12 |
5.96 |
– |
|
Продолжение таблицы |
||||||
|
№ |
Время (мин) |
Название вещества |
Площадь пика |
% |
Вероятн. cовпаде-ния, % |
CAS Номер |
|
44 |
33.148 |
Транс-1,10-диметил-транс-9-декалинол |
52580 |
0.06 |
33.69 |
– |
|
45 |
33.895 |
14-Метил-гексадекановой (14-метил-пальмитиновой) кислоты 14Me-C16:0 этиловый эфир |
329421 |
0.41 |
68.13 |
– |
|
46 |
34.4 |
15-Метил-гексадекановой (15-метил-пальмитиновой) кислоты 15Me-C16:0 этиловый эфир |
257676 |
0.32 |
61.1 |
– |
|
47 |
35.114 |
2-[[2-[(2-этилциклопропил)-метил]-циклопропил]метил]-циклопропан-октановой кислоты метиловый эфир |
295486 |
0.36 |
6.71 |
10152-71-3 |
|
48 |
35.217 |
8,11,14-Эйкозатриеновая (Z,Z,Z) (дигомо-γ-линоленовая) кислота С20:3(n-6) |
1.02E+06 |
1.26 |
10.82 |
1783-84-2 |
|
49 |
35.188 |
9,12,15-Октадекатриеновой кислоты ) С18:3(n-3) 2,3-дигидроксипропиловый эфир (1-монолиноленин) |
668997 |
0.83 |
9.6 |
18465-99-1 |
|
50 |
35.518 |
9,12-Октадекадиеновой (линолевой) кислоты С18:2 (n-6) н-пропиловый эфир |
3.72E+06 |
4.62 |
17.64 |
– |
|
51 |
35.613 |
9,12,15-Октадекатриеновой (α-линоленовй) кислоты С18:3(n-3) этиловый эфир |
3.38E+06 |
4.17 |
43.12 |
1191-41-9 |
|
52 |
35.76 |
11-Октадеценовой (вакценовой) кислоты C18:1(n-11) н-пропиловый эфир |
319868 |
0.39 |
10.04 |
– |
|
53 |
36.149 |
Октадекановой (стеариновой) кислоты С18:0 этиловый эфир |
818105 |
1.01 |
71.13 |
111-61-5 |
|
54 |
36.803 |
Транс-1,10-диметил-транс-9-декалинол (изомер) |
103024 |
0.13 |
15.21 |
– |
|
55 |
36.834 |
Геосмин ((4S,4aS,8aR)-4,8a-диметил-1,2,3,4,5,6,7,8-октагидронафтален-4a-ол) |
151059 |
0.19 |
13.84 |
19700-21-1 |
|
56 |
37.351 |
11,12-Метилен-октадеценовой кислоты (лактобациловой) 11,12-Mt 18:0 изо-пропиловый эфир |
63589 |
0.08 |
27.58 |
– |
|
57 |
37.916 |
1,1',1"-Докозагексаеновой (цервоновой) кислоты 22:6 (n−3) 1,2,3- пропантрииловый эфир (тридокозагексаеноин) |
141178 |
0.17 |
22.32 |
11094-59-0 |
|
58 |
38.163 |
5,8,11,14-Эйкозатетраеновой (арахидоновой) кислоты 20:4(n-6) этиловый эфир |
1.01E+06 |
1.25 |
22.88 |
1808-26-0 |
|
59 |
38.28 |
5,8,11,14,17-Эйкозапентаеновая (тимнодоновая) кислота, 20:5(n-3) |
227476 |
0.28 |
33.72 |
– |
|
60 |
38.431 |
5,11,14-Эйкозатриеновой (подокарповой) кислоты 20:3(n-3) метиловый эфир |
99527 |
0.12 |
16.66 |
– |
|
61 |
38.517 |
5,11,14,17-Эйкозатетраеновой (юнипереновой) кислоты 20:4(n-3) метиловый эфир |
554691 |
0.68 |
31.83 |
59149-01-8 |
|
62 |
38.558 |
9,12,15-Октадекатриеновой (α-линоленовой) кислоты 20:3(n-3) бутиловый эфир |
795200 |
0.98 |
11.05 |
– |
|
63 |
38.867 |
цис-11,14-Эйкозадиеновой кислоты 20:2(n-6) метиловый эфир |
1.19E+06 |
1.47 |
21.07 |
– |
|
64 |
38.957 |
9,12,15-Октадекатриеновой кислоты (α-линоленовой) 18:3(n-3) 2,3-дигидроксипропиловый эфир (глицерил линолеат) |
343329 |
0.42 |
10.6 |
18465-99-1 |
|
65 |
39.087 |
1-Гексакозен |
98668 |
0.12 |
14.13 |
18835-33-1 |
|
66 |
39.475 |
Докозановая (бегеновая) кислота, С22:0 |
111537 |
0.14 |
36.42 |
112-85-6 |
|
67 |
39.54 |
Гексакозен |
94922 |
0.12 |
8.08 |
18835-33-1 |
|
68 |
39.724 |
Тетратриаконтилгептафторбутират |
392666 |
0.48 |
3.83 |
– |
|
69 |
39.991 |
Гептакозен |
13228 |
0.02 |
5.42 |
18835-33-1 |
|
70 |
40.337 |
Гептакозен (изомер) |
7053 |
0.01 |
18.64 |
18835-33-1 |
|
71 |
41.713 |
5,8,11,14-Эйкозатетраеновой кислоты 20:4(n-6) этиловый эфир |
178510 |
0.22 |
7.52 |
1808-26-0 |
|
72 |
42.064 |
1(22),7(16)диэпокси-трицикло [20.8.0.0(7,16)]триаконтан |
70727 |
0.09 |
8.95 |
– |
|
73 |
42.268 |
Октадекатриеновой кислоты (α-линоленовой) С18:3 2,3-дигидроксипропиловый эфир |
151655 |
0.19 |
6.88 |
18465-99-1 |
|
74 |
45.221 |
Тетратриаконтил гептафторбутират |
564062 |
0.70 |
8.03 |
– |
|
75 |
45.377 |
Тетратриаконтил гептафторбутират (изомер) |
77887 |
0.10 |
5.51 |
– |
|
Окончание таблицы |
||||||
|
№ |
Время (мин) |
Название вещества |
Площадь пика |
% |
Вероятн. cовпаде-ния, % |
CAS Номер |
|
76 |
45.466 |
1-Октакозен |
176766 |
0.22 |
12.83 |
– |
|
77 |
46.655 |
Триаконтил трифторацетат |
2.70E+06 |
3.33 |
4.83 |
– |
|
78 |
47.785 |
17-(1,5-Диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1H-циклопента[a]фенантрен-3-ол |
1.16E+06 |
1.45 |
46.08 |
– |
|
Сумма |
81014852 |
100 |
||||
В пробе обнаружено значительное количество 2-(4-изобутилфенил)-пропионовой кислоты (ибупрофен), которое обладает противовоспалительным, анальгезирующим и жаропонижающим действием, масс-спектр обнаруженного вещества в сравнении с библиотечным приведен на рис. 2.
Найдены омега-3 и омега-6 жирные кислоты, их этиловые и пропиловые эфиры, среди которых превалируют линолевой кислоты н-пропиловый эфир, α-линоленовой, пальмитиновой, арахидоновой кислот этиловые эфиры, цис-11,14-эйкозадиеновой кислоты метиловый эфир. Содержится триацилглицерин тридокозагексаеноин, гидроксидигидромальтол, стероидные соединения (3-деокси-17β-эстрадиол, 3β,28-Бис[(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси]луп-20(29)-ен-21β-ол 3,3-диметилбутаноат и 17-(1,5-диметилгексил)-10,13-диметил-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-тетрадекагидро-1H-циклопента[a]фенантрен-3-ол), карбоновые кислоты, геосмин и другие спирты, альдегиды, азотсодержащие вещества и др. Идентифицированы галогенсодержащие соединения (3-хлоро-пропановой кислоты 4-формилфениловый эфир, 1-нафтойной кислоты пентафторфениловый эфир, фумаровой кислоты 2-хлорфенилэтиловый эфир, тетратриаконтил гептафторбутират, триаконтил трифторацетат), содержание которых может быть обусловлено присутствием в рационе улитки панциря каракатицы.
Заключение
В извлечении идентифицировано 78 различных соединений, выявлено значительное содержание 2-(4-изобутилфенил)-пропионовой кислоты, полиненасыщенных жирных кислот и их эфиров, стероидов и др. соединений могут обуславливать наряду с противовоспалительными гликопротеинами и пептидами фармакологическое действие муцина и препаратов Achatina fulica.