Scientific journal

International Journal of Applied and fundamental research

ISSN 1996-3955

ИФ РИНЦ = 0,593

Введение

Респираторный дистресс-синдром новорожденных (РДСН) или синдром дыхательных расстройств новорожденных (СДРН) – наиболее тяжелая и часто встречающаяся перинатальная патология, развивающаяся вследствие дефицита сурфактанта и незрелости легких [1, с. 578]. Проблема РДСН в Кыргызстане обусловлена тем, что перинатальная патология вышла на первое место в структуре детской заболеваемости и смертности. Значимость изучения проблем недоношенных детей возросла с переходом страны на критерии живорожденности ВОЗ. По данным исследований ЮНИСЕФ (2017), в нашей стране РДСН является одной из основных причин мертворождаемости и смертности недоношенных новорожденных детей [2, с. 53]. Роль инфекции в невынашивании беременности и рождении недоношенных детей общепризнана. Указывают на роль TORCH-синдрома и ИВЛ-ассоциированной инфекции в развитии и причине смерти глубоко недоношенных новорожденных детей [3]. Т.В. Осьмирко с соавт. установлено что 83 % новорожденных с TORCH-синдромом были недоношенными, что подтверждает значимость инфекционного фактора в риске невынашивания беременности и рождении недоношенных детей в зарубежных и собственных исследованиях [4; 5]. Дискутабельным остается вопрос этиологии РДС у недоношенных детей. По классическому определению РДСН относят к пневмопатиям, что определяет неинфекционную теорию его развития [1, с. 580].

Таким образом, сведения о роли инфекции в развитии у недоношенных детей СДРН крайне противоречивы – от ее значимости до полного отрицания. Большинство исследователей единодушны во мнении, что инфекция, в том числе внутриутробная – одна из основных причин недоношенности [6; 7]. Роль инфекции в реализации РДСН до конца не изучена.

Цель исследования – изучить роль специфической для перинатального периода инфекции в развитии РДСН, иммунологическим (ИФА) и генетическим методом (ПЦР), что в стране еще не проводилось.

Материалы и методы исследования

Исследование проведено в отделениях реанимации и интенсивной терапии новорожденных и патологии новорожденных детей городского перинатального центра (ГПЦ) г. Бишкек. Этиология РДСН изучена методом иммуноферментного анализа (ИФА) у 108, методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) – у 80 недоношенных детей с РДС за 2020–2021 гг.

При ИФА использовались тест-наборы: ВектоВПГ – 1,2 Ig G и Ig М ,-: ВектоЦМВ – Ig G и Ig М: ВектоТоксо – Ig G и Ig М: ВектоУреаплазма урелитикум – Ig G и Ig М, Россия. ИФА проводился на оборудовании МR-96А Mindray (Китай).

Метод ПЦР проводился с помощью тест-систем АО «ВекторБест», Россия. Выделение ДНК проводили с помощью тест набора «РеалБест ДНК-экспресс». Детекцию выделенного ДНК проводили с помощью тест-наборов: «РеалБест ДНК Chlamydia trachomatis», «РеалБест ДНК Mycoplasma genitalium», «РеалБест ДНК Mycoplasma hominis», «РеалБест ДНК Ureaplasma urealyticum», «РеалБест ДНК ВПГ-1/ВПГ-2», «РеалБест ДНК ЦМВ» на амплификаторе ДТ-96 (Россия) в соответствии с инструкциями к наборам. В качестве материала для исследования использовались соскоб клеток из носовой и ротовой полости ребенка и сыворотка пуповинной крови.

Результаты исследования и их обсуждение

ИФА-методом изучен спектр иммуноглобулинов IgМ и IgG к специфичной флоре перинатального периода. Наличие IgМ, непроницаемого для маточно-плацентарного барьера, свидетельствует о самостоятельной выработке его плодом в ответ на инфицирование. В то же время IgG может быть двойного генеза, так как он проницаем для маточно-плацентарного барьера. Установлено, что только в единичных случаях (в 2–3 %) в организме недоношенных с СДР выявляются IgМ к ЦМВ и ВПГ герпеса 1-го и 2-го типа. А к микоплазмам и хламидиям IgМ не выявлен. В то же время IgG выявляется практически в равных количествах (р > 0,05) к ЦМВ (в 43,52 %) и ВПГ (в 42,59 %). К микоплазмам и хламидиям IgG выявлен в единичных случаях (табл. 1).

Таблица 1

Этиоструктура перинатальной флоры у недоношенных с СДР при ИФА

Примечание: ** – р < 0,01.

Следовательно, ИФА не дает статистически значимых доказательств роли практически всей специфической перинатальной патологии в развитии СДР недоношенных детей.

В этом плане наиболее доказательно применение генетических исследований – ПЦР с выявлением ДНК/РНК специфических патогенов. В исследованиях положительные результаты выявлены у 37 (46,25 %) недоношенных. Микст-инфекция выявлена у 5 (6,25 %) детей, у троих положительна ПЦР к ВПГ-1, ВПГ-2 и к микоплазме, у двоих – к ВПГ-1, ВПГ-2 и ЦМВ. Статистически значимо чаще положительная ПЦР выявляется к ЦМВ, чем к ВПГ 1 и 2 (в 23,75 % и в 13,75 %, р < 0,05). Микоплазменная инфекция обнаружилась у 6 (7,5 %), хламидии обнаружены у 1 (1,25 %), (табл. 2).

Таблица 2

Этиоструктура перинатальной флоры у недоношенных детей с СДР методом ПЦР

Примечание: * – р < 0,05.

Полученные данные доказывают роль ЦМВ в развитии СДРН, практически в четверти случаев. Реже выявлена роль ВПГ 1, 2 (р < 0,05). В единичных случаях выявляется микст-инфекция. В этиологии СДРН микоплазмы и хламидии практически роли не играют.

При сравнительном анализе двух методов исследования отмечается, что ПЦР выявляется с высокой степенью статистической значимости, в 7,5–8,5 раз чаще (р < 0,001) наличие в организме больных детей ДНК ЦМВ и ВПГ, чем IgМ при ИФА (23,75 % против 2,77 % и 13,75 % против 1,85 %) (табл. 3).

Проведен сравнительный анализ частоты внутриутробного инфицирования недоношенных детей с СДР в зависимости от степени недоношенности по массе тела ребенка при рождении. Положительная ПЦР практически не выявляется у детей с ЭНМТ. С ростом срока гестации статистически значимо увеличивается число недоношенных детей с положительной ПЦР (с 25,81 % до 58,06 %, р < 0,001), достигая максимума у детей и НМТ. Низкий показатель ПЦР с детей с ЭНМТ, даже при возможном инфицировании, связан с коротким временем для репликации вирусной инфекции (табл. 4).

Таблица 3

Сравнительные показатели ПЦР и ИФА

Примечание: * – р < 0,05.

Таблица 4

Частота положительной ПЦР в зависимости от степени недоношенности детей с СДРН по массе тела

Примечание: ** – р < 0,01.

Таблица 5

Результат ПЦР в зависимости от времени забора биоматериала

Для подтверждения полученных результатов проведено изучение результатов ПЦР у детей в зависимости от дней забора биоматериала. Отмечается, что у детей положительный результат ПЦР увеличивается в 7 раз при взятии анализа на 3–5 день, чем в первые 2 дня (табл. 5).

Как известно, IgМ непроницаем для маточно-плацентарного барьера, и его наличие свидетельствует о самостоятельной выработке его плодом в ответ на инфицирование [8; 9]. В наших исследованиях при ИФА IgМ не определяется ни у одной из изученных инфекций перинатального периода. Однако выявляется в относительно большом количестве IgG к ЦМВ и ВПГ 1 и 2, для которых маточно-плацентарный барьер проницаем, что подтверждают и зарубежные коллеги в своих исследованиях [4]. Наличие IgG свидетельствует о принадлежности их к материнскому организму [9]. Однако не исключается внутриутробное инфицирование, на которое плод уже способен самостоятельно вырабатывать IgG, что и может лежать в основе преждевременных родов и развития у них СДРН. Таким образом, наличие IgG может быть обусловлено двумя причинами: переходом их от матери через плаценту и выработкой самим ребенком при инфицировании в антенатальном периоде. В этом случае возможна дифференцировка материнских и фетальных IgG определением их авидности [10], что требует дополнительных исследований. Роль хламидий и микоплазм в реализации заболевания не существенна.

Заключение

Наиболее достоверно определение этиоструктуры заболевания генетическим методом – ПЦР. Однако время исследования ПЦР зависит от степени недоношенности ребенка и срока забора исследуемого биоматериала с учетом времени репликации инфекта. Следует подчеркнуть, что в этиоструктуре СДРН недоношенных детей наиболее значимы ЦМВ и ВПГ 1 и 2.