Интерес к структурно-функциональным особенностям и молекулярной биологии отдельных компонентов калликреин – кининовой системы (ККС), молекулярным механизмам их взаимодействия и связи с другими регуляторными системами объясняется участием ее в регуляции широкого спектра физиологических функций организма [7]. Вместе с тем, регуляторная физиологически активная система может стать причиной или участником патологических событий в организме [3; 10]. Функционирование ККС имеет большое значение в процессах морфогенеза клеток, увеличении проницаемости сосудистой стенки, реакции иммунного ответа, развитии воспаления и трансформации клеток, патогенезе злокачественного роста [1; 4]. Существенным прорывом в понимании функций ККС явилось изучение и клонирование генов кининогена и тканевых калликреинов [7].
Механизм участия тканевых калликреинов в канцерогенезе рака яичников пока не известен, но данные, имеющиеся в литературе, указывают на то, что эти биоактивные вещества могут быть использованы в качестве дополнительных диагностических и прогностических маркеров рака яичников [1; 8].
Целью настоящего исследования явилось сравнительное изучение активности калликреина, прекалликреина и общей аргининэстеразной активности в ткани обоих яичников при доброкачественных и злокачественных процессах.
Материалы и методы исследования
Были изучены образцы ткани: доброкачественных эпителиальных опухолей яичников – цистаденомы(20 пациенток), злокачественных опухолей яичников без лечения – цистаденокарциномы(35 больных IIIстадии) иморфологически неизмененных яичников, удаленных во время операции по поводу миомы матки – условно интактные (18 пациенток). Во всех случаях была изучена ткань левого и правого яичников.
Медиана возраста составила 56,5±2,6 лет. Все женщины находились в переменопаузе и различных сроках менопаузы. Во всех случаях получено письменное добровольное информированное согласие больных на использование материала для научных исследований.
В 10 % цитозольных фракциях, приготовленных на 0,1М калий-фосфатном буфере рН 7.4, содержащим 0,1 % Твин-20 и 1 % БСА проводили определение калликреина, прекалликреина, общей аргининэстеразной активности протеиназ трипсинового типа по методу Пасхиной Т.С., Яровой Г.А. [5] и Пасхиной Т.С. и др. [6].
Статистический анализ результатов проводили с помощью пакета Statistica(версия 8). Оценка достоверности произведена с использованием t-критерия Стьюдента. Уровень Р<0,05принимали как значимый.
Результаты исследования и их обсуждение
Результаты проведенного исследования представлены в таблице 1. Не было найдено достоверно значимых различий между показателями в условно интактной ткани яичников и ткани доброкачественных образований.
Таблица 1
Показатели калликреин-кининовой системы в ткани яичников
|
Образцы ткани |
Общая аргининэстеразная активность, мкМ/г ткани |
Калликреин, мкМ/г ткани |
Прекалликреин, мкМ/г ткани |
|||
|
левый |
правый |
левый |
правый |
левый |
правый |
|
|
Интактные яичники (n=18) |
1420±93 |
1200±76 |
243,5± 19,8 |
215,7± 23,2 |
727,1± 64,6 |
601,6± 70,2 |
|
Доброкачествен-ные опухоли яичников(n=20) |
1505±84 |
1304±83 |
199,7± 22,5 |
221,5± 16,3 |
701,8± 53,2 |
682,1± 49,7 |
|
Злокачественные опухоли правого яичника (n=10) |
2108± 137, 01 |
1839± 1251 |
909,0± 72,41 |
981,7± 56,91 |
1490,2± 112,71 |
1499,5± 125,31 |
|
Злокачественные опухоли левого яичника (n=11) |
1875± 1161 |
1860± 971 |
1199,9± 86,91 |
1136,2± 91,41 |
1763,8± 142,81 |
1690,5± 135,31 |
|
Злокачественные опухоли при двустороннем поражении яичников (n=14) |
1899± 1251 |
1995± 1491 |
1018,1± 92,41 |
1199,9± 87,61 |
1687,9± 135,21 |
1733,4± 146,81 |
Примечание. 1 – отличие от условно интактного яичника (р<0,05).
Жирным шрифтом выделены показания в контралатеральном яичнике.
Вместе с тем, имели место выраженные изменения активности исследуемых звеньев ККС при злокачественных опухолях яичников относительно значений в условно интактной ткани яичников. Так при двустороннем поражении показатель активности калликреина в ткани злокачественной опухоли был в среднем в 4,8 раза выше, чем средний показатель в ткани условно интактного яичника. Активность прекалликреина превосходила соответствующий нормативный показатель в 2,6 раза, а АЭА – в 1,5 раза.
При правостороннем процессе активность калликреина в злокачественной опухоли была повышена относительно показателя в условно интактной ткани в 4,3 раза, активность прекалликреина – в 2,3 раза, АЭА – в 1,4 раза. При левостороннем злокачественном процессе в ткани опухоли активность калликреина превосходила нормативные показатели в 5,2 раза, прекалликреина – в 2,7 раза, АЭА – в 1,4 раза.
При двусторонних поражениях яичников уровень ПК, активность К и АЭА достоверно не различался в обоих яичниках. Следует отметить отсутствие различий исследуемых показателей в контралатеральных непораженных яичниках от показателей в пораженном злокачественной опухолью парном яичнике (табл. 1).
Основными компонентами ККС являются сериновыепротеиназы, одна из функций которых заключена в осуществлении ограниченного протеолиза – важного специфического механизма функционального взаимодействия белков организма. При оценке функционирования ККС необходимо учитывать не только активность калликреина, как биологически активного вещества, но и состояние промежуточных звеньев его синтеза или распада, например прекалликреина, как предшественника [2]. Поэтому мы сочли целесообразным изучить в ткани исследуемых образцов коэффициенты соотношения прекалликреин/калликреин (ПК/К), характеризующие эффективность образования калликреина из его предшественника, а также долю активности калликреинав общей АЭА. Результаты представлены в табл. 2. Установлено, что вне зависимости от локализации злокачественной опухоли и ее распространенности коэффициент соотношения ПК/К оказался в среднем на 30 % ниже, чем в ткани условно интактных яичников. Естественно, такие же значения были получены в ткани контралатеральных непораженных опухолью яичников.
Далее было изучено долевое участие активности калликреинав общей АЭА. Установлено, что в ткани злокачественной опухоли вне зависимости от ее локализации и распространенности, а так же в ткани контралатеральных яичников, процентное отношение активности калликреинак суммарной АЭА возрастало в среднем в 3,2 раза (табл. 2).
Таблица 2
Значения коэффициента прекалликреин/калликреин и процентного содержания калликреина в общей аргининэстеразной активности в ткани яичников
|
Образцы ткани |
Коэффициент соотношения прекалликреин/калликреин (ПК/К) |
Коэффициент соотношения калликреин/ общая аргининэстеразная активность (К/АЭА) |
||
|
Левый яичник |
Правый яичник |
Левый яичник |
Правый яичник |
|
|
Интактные яичники |
2,2±0,2 |
2,1±0,2 |
17,1±1,5 |
18,0±1,4 |
|
Злокачественные опухоли правого яичника (n=10) |
1,6±0,151 |
1,5±0,11 |
43,1±3,51 |
53,3±4,21 |
|
Злокачественные опухоли левого яичника (n=11) |
1,5±0,11 |
1,5±0,21 |
64,0±5,81 |
61,1±4,31 |
|
Злокачественные опухоли при двустороннем поражении яичников (n=14) |
1,5±0,11 |
1,5±0,11 |
53,6±3,81 |
60,1±4,61 |
Примечание. 1 – отличие от условно интактного яичника (р<0,05).
Жирным шрифтом выделены показания в контралатеральном яичнике.
Анализируя полученные результаты изучения активности компонентов ККС, а именно: калликреина, прекалликреина, общей АЭА, а так же коэффициента ПК/К и К/АЭА, можно резюмировать следующее. В ткани злокачественной опухоли яичников вне зависимости от ее локализации имеет место активация указанной системы с увеличением содержания предшественников и качественным нарушением соотношения компонентов. Это свидетельствует о «поломке» регуляторных связей в калликреин-кининовой системе, и переходе их из разряда физиологических в статус патологических [2]. Интересно, что это же касается и контралатеральных морфологически не измененных яичников.
В отличие от плазменных калликреинов, механизм активации предшественников калликреиновв тканях с экзокринной функцией и их секретах, в частности, в половых железах практически не изучен. Наше внимание привлекла новая концепция об активации калликреин-кининовой на поверхности эндотелиальных клеток [7]. И хотя этот механизм описан как активация протеолитических систем плазмы крови, некоторые положения этой концепции могут быть применены для объяснения процессов, происходящих в тканях. Согласно этой концепции, благоприятные условия активации ККС создаются при образовании полибелкового ансамбля на поверхности эндотелиальной клетки, в состав которого входят кроме высокомолекулярного кининогена и прекалликреина, рецептор активатора плазминогенаурокиназного типа (UPAR), рецептор q-субъединицы первого компонента комплемента (gC1qR), фактор XII и цитокератин 1.
Вероятно, изучение активности тканевой фибринолитической системы может дать полезную информацию для выяснения механизмов активации тканевых калликреинов.