Проблема поиска новых биологически активных веществ и создание на их основе эффективных лекарственных средств для лечения и профилактики вирусных инфекций, является одной из важнейших задач не только вирусологии, но и органической, биоорганической и медицинской химии. Это обусловлено рядом причин, основной из которых является появление новых вариантов возбудителей вирусных респираторных инфекций, устойчивых к применяемым препаратам. Одним из перспективных путей при разработке новых лекарственных средств является поиск биологически активных веществ среди доступных природных соединений и их производных. В наших исследованиях проводилось сравнительное изучение противовирусной активности препаратов, выделенных из 10 сапонинсодержащих растений, принадлежащих к различным семействам: Fabaceae, Sapindaceae, Caryophyllaceae, Betullaceae, Berberidaceae, Hippocastanaceae, Chenopodiaceae, Araliaceae [1]. Предварительные исследования показали, что препараты, полученные из растений Acacia concinna (Fabaceae), Sapindus mucorossi (Sapindaceae), Allochrusa gypsophiloides (Caryophyllaceae), Saponaria officinalis (Caryophyllaceae) обладают противовирусной активностью и являются перспективными для дальнейшей разработки.
Производство био- и фармпрепаратов на основе биологическиактивных соединений растительного происхождения требует решения двух вопросов: обеспечения достаточного объема сырьевой базы для производимого препарата и его стандартизации в тех случаях, когда точно не установлен химический состав многокомпонентного лекарственного средства. В отношении противовирусных препаратов, полученных из растений, отобранных по результатам настоящего исследования, первый вопрос решается достаточно просто – туркестанский мыльный корень (Allochrusa gypsophiloides) и красный мыльный корень (Saponaria officinalis) не только имеют достаточную сырьевую базу в странах Средней Азии, но и с успехом культивируются. Что касается индийских Acacia concinna и Sapindus mucorossi, то успешное их применение в области натуральных моющих средств привело к буму выращивания данных растений на территории стран произрастания. Стоимость 1 кг исходного сырья для данных растений не превышает 10 долларов.
Достаточно долгое время основными методами выявления и стандартизации тритерпеновых сапонинов в растительном сырье было определение 1) гемолитического индекса,
2) пенного числа, 3) токсичности для холоднокровных животных, 4) проведение гравиметрического анализа на основе разной степени растворимости сапонинов и 5) химический анализ (реакция Лафона, нитрат натрия, раствор холестерина). Эти методы в силу ряда объективных причин показывают несколько завышенные результаты, поэтому в настоящее время для стандартизации сапонинсодержащих препаратов широко используются хроматографические и спектрометрические методы анализа [2-4].
В представленных исследованиях для стандартизации препаратов, выделенных из растений Acacia concinna, Sapindus mucorossi, Allochrusa gypsophiloides, Saponaria officinalis, использовался метод ВЭЖХ на колонках C18, позволяющий с достаточной степенью достоверности определять не только качественный, но и количественный состав полученных препаратов. В качестве подвижной фазы была использована система растворителей: вода – ацетонитрил в условиях градиентного элюирования в присутствии трифторуксусной кислоты (рН 2,5). Наилучшее разделение сапонинсодержащих препаратов наблюдалось при скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин и объеме вводимой пробы – 10 мкл.
Для проверки пригодности хроматографической системы использовали коммерческие сапонинсодержащие растворы. Расчет параметров хроматографической системы проводился для пиков сапонинов на 5 хроматограммах, полученных при фракционировании растительных экстрактов.
Воспроизводимость методики характеризовалась величиной стандартного отклонения S (0,1876) или относительным стандартным отклонением RS (3,69 %) для серии измерений на примере одного образца сырья в 10 независимых повторностях.
На основании полученных результатов установлено, что между величинами площадей хроматографических пиков и содержанием сапонинов соблюдалась линейная зависимость, подтверждающая валидацию данной методики стандартизации сапонинсодержащего растительного сырья.
По результатам валидации установлено, что приведенная методика является специфичной для определения содержания сапонинов в растительном сырье, характеризуется корректной точностью и воспроизводимостью, линейной зависимостью, что позволяет использовать ее для достоверной оценки качества растительных препаратов, содержащих сапонины.
Таким образом, для стандартизации растительных препаратов, содержащих сапонины, разработана методика количественного определения тритерпеновых гликозидов с использованием метода ВЭЖХ в препаратах из Acacia concinna, Sapindus mucorossi, Allochrusa gypsophiloides, Saponaria officinalis. Показано, что данная методика не зависит от типа используемого растительного препарата и может использоваться для стандартизации сапонинсодержащих растительных препаратов.