Введение
В научной медицине России официальными растениями из рода Тимьян являются тимьян ползучий (чабрец) Thymus serpyllum L., а также тимьян обыкновенный Thymus vulgaris L., которые находят применение в качестве отхаркивающего средства [2]. Тимьян обыкновенный произрастает в странах Средиземноморья. Основной ареал тимьяна ползучего сосредоточен в Европейской части России, но ресурсы его сильно истощены. В настоящее время на территории областей Центрального Черноземья чабрец встречается единично, но наряду с ним на территории указанных областей произрастает около 7-8 близких видов, основными из которых являются тимьян Маршалла, тимьян блошиный, тимьян меловой, тимьян Палласа.
При заготовке сырья чабреца заготовители как правило не различают виды, поэтому в сырье наряду с чабрецом и вместо него могут быть другие виды, широко распространенные в данном регионе и их сочетание в различных соотношениях. Однако, виды тимьяна, распространенные в средней полосе Европейской части России относятся к различным секциям так и подсекциям и естественно будут различаться по химическому составу, в том числе по содержанию и качественному составу эфирного масла, как одного из основных классов биологически активных веществ растений рода тимьян.
В траве растений рода тимьян содержится эфирное масло в состав которого входят ароматические терпены: тимол, карвакрол; монотерпены, сесквитерпены, содержание которых сильно варьирует в зависимости от места произрастания, места обитания, высоты над уровнем моря, фазы развития растения и др. [3].
Выделяют более 8 хемотипов эфирного масла растений рода тимьян, в одном из них преобладающими компонентами являются тимол и карвакрол, в другом преобладает α-терпениол, в третьем гераниол и т.д. [4].
Поэтому было интересно изучить качественный и количественный состав эфирного масла тимьяна блошиного флоры Средней полосы России.
Материалы и методы исследования
Объектом исследования явилась воздушно-сухая измельченная трава тимьяна блошиного, заготовленная в период массового цветения в 2013 году в Брянской области.
Для получения и количественного определения эфирного масла навеску воздушно-сухого сырья тимьяна блошиного (20г) помещали в колбу вместимостью, заливали 300 мл воды, закрывали пробкой с холодильником и приемником и доводили до кипения. Время перегонки от момента закипания – 2 часа. После охлаждения определяли объем эфирного масла в приемнике [1].
Для анализа эфирного масла в виалу «Agilent» на 20 мл помещали 0,5-5 г измельченной высушенной травы тимьяна блошиного, добавляли внутренний стандарт (тридекан), из расчета 50 мкг на навеску, далее прибавляли 10 мл воды очищенной, прикручивали крышку с холодильником с воздушным охлаждением и помещали в небольшую песчаную баню с регулируемым подогревом и нагревали в течении 2 часов. В процессе отгонки летучие вещества адсорбировались на внутренней поверхности обратного холодильника. Адсорбированные вещества после охлаждения системы смывали 3 мл особо чистого пентана в сухую виалу на 10 мл. Смыв концентрировали продувкой (100 мл/мин) особо чистого азота до остаточного объема экстракта 10 мкл, который полностью отбирали хроматографическим шприцом. Дальнейшее концентрирование пробы проводили в самом шприце до объема 2 мкл.
Ввод пробы в хроматографическую колонку проводили в режиме splitless, т.е. без деления потока, что позволяет ввести пробу без потери на деление и существенно увеличить чувствительность метода хроматографирования.
Исследование компонентного состава эфирного масла проводили методом газожидкостной хроматографии на хроматографе Agilent Technology 6890 N с масс-спектрометрическим детектором 5973 N. Условия анализа: хроматографическая колонка капиллярная ДВ-5, длина колонки 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм; газ-носитель-гелий, скорость газа носителя 1 мл/мин; объем пробы -2 мкл, скорость ввода пробы 1,2 мл/мин в течение 0,2 минут; температура термостата 500 С с программированием 3 0/мин до 2200 С; температура детектора и испарителя 2500 С.
Компоненты эфирных масел идентифицировали в результате сравнения масс-спектров веществ, входящих в исследуемое эфирное масло, полученных в процессе хроматографирования с данными библиотеки масс-спектров NISTO5 и WILEY 2007 с общим количеством спектров более 470000 в сочетании с программами для идентификации AMDIS и NIST.
Количественное содержание компонентов рассчитывали, используя метод внутреннего стандарта [5].
Результаты исследования и их обсуждения
На первом этапе нами проведено количественное определение эфирного масла объемным методом [1], в основе которого лежит перегонка с водяным паром.
В результате установлено, что содержание эфирного масла в траве тимьяна блошиного накапливается до 0,95%. Эфирное масло представляет собой легкоподвижную жидкость желтоватого цвета с приятным специфическим запахом.
Анализ эфирного масла травы тимьяна блошиного показал на хроматограмме не менее 40 веществ, из которых идентифицировали 32 (рис.1, табл.1).
Таблица 1
Состав эфирного масла тимьяна блошиного
|
№ п\п |
Время удерживания |
Название компонента |
Содержание компонентов в образцах, % |
|
1 |
5.71 |
1-октен-3-ол |
1,65 |
|
2 |
7.57 |
γ-терпинен |
0,04 |
|
3 |
8.09 |
транс-сабиненгидрат |
0,55 |
|
4 |
9.03 |
линалоол |
0,26 |
|
5 |
11.18 |
терпинен-4-ол |
0,01 |
|
6 |
11.65 |
борнеол |
1,86 |
|
7 |
13.10 |
метилтимол |
0,11 |
|
8 |
13.49 |
метилкарвакрол |
2,15 |
|
9 |
15.27 |
тимол |
2,03 |
|
10 |
16.48 |
карвакрол |
41,03 |
|
11 |
17.60 |
эвгенол |
1,09 |
|
12 |
17.92 |
β-бурбонен |
0,16 |
|
13 |
19.16 |
β-кариофиллен |
6,39 |
|
14 |
19.26 |
β-кубебен |
0,16 |
|
15 |
19.51 |
не идентифицировано |
0,18 |
|
16 |
19.95 |
гумулен |
0,37 |
|
17 |
20.69 |
α-аморфен |
0,50 |
|
18 |
20.80 |
гермакрен D |
0,73 |
|
19 |
21.19 |
бициклогермакрен |
0,46 |
|
20 |
21.33 |
α-мууролен |
0,17 |
|
21 |
21.81 |
β-бисаболен |
3,81 |
|
22 |
21.86 |
γ-кадинен |
0,17 |
|
23 |
22.11 |
δ-кадинен |
0,95 |
|
24 |
22.59 |
цис-α-бисаболен |
0,14 |
|
Продолжение таблицы 1 |
|||
|
25 |
23.69 |
спатуленол |
0,64 |
|
26 |
23.77 |
кариофилленоксид |
0,94 |
|
27 |
28.18 |
миристиновая кислота |
0,09 |
|
28 |
29.41 |
гексагидрофарнезилацетон |
0,05 |
|
29 |
31.26 |
пальмитиновая кислота |
0,18 |
|
30 |
37.20 |
пентакозан |
0,02 |
|
31 |
39.07 |
гептакозан |
0,01 |
|
32 |
40.25 |
сквален |
0,19 |
|
33 |
40.82 |
нонакозан |
0,02 |
Рис. 1 Схема хроматограммы хромато-масс-спектрального анализа эфирного масла травы тимьяна блошиного
Доминирующими компонентами исследованного эфирного масла является карвакрол (41,03 %), и β-кариофиллен (6,39%). Содержание типичного для растений рода тимьян соединения тимола в исследуемом эфирном масле составляет (2,03%).
Выводы
Таким образом, исследовано эфирное масло травы тимьяна блошиного флоры Средней полосы России. В результате можно утверждать, что исследованный образец эфирного масла тимьяна блошиного принадлежит к хемотипу карвакрола, кариофиллена.