В настоящее временя актуальна проблема профилактики и лечения болезней с нарушением репродуктивной функции мужчин с различным этиопатогенезом [1, 2, 3]. Для повышения эффективности методов профилактики и лечения, при различных болезнях, интоксикациях и патологических процессах, наряду с общепринятой специфической этиопатогенетической терапией, все чаще применяются различные иммуностимулирующие и антиоксидантные препараты в комплексе, так как они все вместе оказывают многокомпонентное влияние на организм в целом[4.5.6.7].
Целью исследования явилось изучение влияния тималина и витаминов Е и С на морфофункциональное состояние семенника при их комплексном введении с профилактической и лечебной целью до и после острой интоксикации желтым фосфором в эксперименте.
Материалы и методы исследования
Опыты проводились на белых беспородных крысах, массой 150-180 г. Модель интоксикации воспроизводили путем однократного введение желтого фосфора в дозе 10 мг/к.г.С профилактической целью препаратов вводили в течение 20 дней до и лечебной целью 30 дней после интоксикации в дозах: тималин-2-4 мг/кг, витамин Е-60 мг/кг, витамин С-10 мг/кг. Исследование проводили через 24часа, 3 дня, 7, 15, 30 дней. Кусочки семенника фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и в жидкости Карнуа. Материалы после соответствующей обработки заливали в парафин и готовили серийные срезы тольщиной 5-8 мкм. Парафинные срезы после соответствующей проводки окрашивали гемотоксилин-эозином (по Караччи). На срезах семенников кроме общеморфологических исследований, проводили и морфометрические исследования. Определяли соотношения различных (I-V) типов семенных канальцев и их средний диаметр с вычислением индекса сперматогенеза. В 20 канальцах VII-VIII цикла сперматогенеза подсчитывали число сперматогониев, сперматоцитов, сперматидов и клеток Сертоли (сустентоцитов с вычислением клеточно-сертолиевого индекса).
Результаты исследования и их обсуждение
При микроскопическом исследования препаратов семенника при профилактическом, так и лечебном введении иммунокорректора тималина и витаминов Е и С при острой интоксикации желтым фосфором, отмечаются некоторые восстановления дистрофических и некротических процессов паренхиматозных элементов семенных канатиков. При этом на третий день эксперимента в некоторых семенных канальцах сохраняются массивные некрозы клеток с заполнением их просвета гомогенным детритом и жидкостями в виде вакуоль. Такие пораженные канальцы значительно увеличены в размерах, окружающая их рыхлая соединительнотканная строма отечна, волокнистая структура распавшаяся и гомогенизирована. Базально расположенные сперматиды мелкие, в основном образуют один ряд, последующие слои сперматогонии разрушены, слоистость их неопределяется, большинство клеток в состоянии некроза и распада. При профилактическом введении препаратов отмечалось, что сохранившиеся сперматогонии за счет отека гипертрофированы. Зрелые клетки определяются лишь в составе гомогенного детрита, обнаруживаются единичные нитевидные базофильно окрашенные хвостовой части сперматозоиды. В данный срок опыта большинство семенных канатиков в отличие от острого опыта без лечения сохраняют свое гистотопографическое строение. В строме органа отмечается очаговый отек и полнокровие сосудов. В канальцах паренхима разрыхлена за счет межклеточного отека. В результате слоистость паренхиматозных клеток отсутствуют, даже базальные клетки отторжены от подлежащей базальной мембраны, их цитоплазма за счет отека вакуолизирована, ядра сморщенны, окрашены гематоксилином. В других слоях паренхимы семенных канальцев клетки удлиненной формы и расположены рыхло. Ядра большинства из них не определяются, цитоплазма находится в состоянии распада и гомогенизации.
На 7 день эксперимента в большинстве семенных канальцах отмечается появление регенераторных и гипертрофических процессов, хотя в строме и в межклеточном пространстве отмечается отек и разрыхление тканей. При этом, в семенных канатиках базальное расположенные сперматиды мелкие по сравнению с другими слоями и расположены в 1-2 ряда. Клетки промежуточных слоев имеют значительно крупные размеры за счет гипертрофии ядер и расширения цитоплазмы. Необходимо отметить тот факт, что ядерные структуры имеют разную хромофильность, где имеется гиперхромазия, ядра более увеличена в размерах, имеют неправильную форму, что свидетельствует о морфологических признаках регенераторной активности сперматогонии. В таких канальцах внутренние слои представлены относительно мелкими клетками, у большинства которых ядра отсутствуют, они имеют удлиненную форму и окрашены эозином более интенсивно. В просвете канальцев появляется небольшое количество зрелых сперматозоидов. В данный срок эксперимента в отдельных канальцах сохраняются отечность, дистрофические и некробиотические явлений.
На 15 день эксперимента в паренхиме семенника отечность и дистрофические изменения стабилизируются в виде гиперплазии базальных сперматидов, увеличения количества сперматогонии и зрелых сперматозоидов. При этом под малым увеличением микроскопа определяется сохранение небольшого отека стромы и разрыхления паренхимы. При этом, в базальных и промежуточных слоях в семенных канатиках отмечаются очаговое вакуолизация паренхимы и концентрация клеточных элементов в виде трабекул и солидных участков, в которых видны сперматиды и сперматогонии разной величины и формы и окрашиваемости. Сперматогонии внутренних слоев расположены радиально, имеют удлиненную форму и некоторые из них десквамируются в просвет канальцев. В результате которых, в просвете канальцев увеличиваются гомогенные белковые массы относительно сперматогонии и зрелых сперматозоидов.
На 30 день эксперимента при малом увеличении микроскопа, отмечается наличие семенных канатиков относительно увеличенной формы и величины. Если некоторые из них имеют удлиненную и овальную форму, то другие имеют плоскостные округлые формы. При этом отмечается заполнение просвета почти всех канальцев содержимым, состоящим из розовой белковой массой, разбросанно расположенных сперматозоидов и клеточных фрагментов сперматогонии. В этих канальцах базально расположенные сперматиды усиленно гиперплазированы и представлены толстым слоем клеточных пластов. В промежуточных слоях семенных канальцах сперматогонии расположены рыхло и беспорядочно. Выраженность отека межклеточного пространства уменьшена по сравнении с предыдущим сроком.
Таким образом, можно сделать следующее заключение, что при комплексном применении тималина и витаминов Е и С, в тканях семенника восстановительные процессы развиваются более интенсивно, начиная с 3дня эксперимента, которые морфологически проявляются гиперплазией базально расположенных сперматидов с образованием толстого пласта к 30 дню. В промежуточных слоях выявляются регенераторная активация сперматогониев в виде гипертрофии и гиперхромазии ядер, усиление образования сперматогонии и относительно зрелых сперматозоидов. Эти изменения к 30 дню, проявляются в виде увеличения размеров канальцев, повышении плотности клеточных элементов и заполнения просвета канальцев зрелыми сперматозоидами и белковой массой.
Результаты морфометрического исследования количества канальцев, находящихся на определенных стадиях сперматогенеза после лечения тималином и витаминами Е и С на фоне острого отравления желтым фосфором показали, что на 3 день опыта в начальных стадиях цикла количества канальцев несколько меньше чем нормы и составляет на 1- 6 стадиях 19,7±1,6 %, а на 7-8 стадиях 58,1±4,4 %. Количество канальцев 9-14 стадий значительно увеличивается по сравнению с нормой (табл. 1). В последующие сроки эксперимента количество канальцев начальных стадиях цикла сперматогенеза постепенно увеличивается, а последних стадиях цикла значительно уменьшается и к 15 дню лечения показатели всех стадий цикла приближаются почти к норме. При этом количество канальцев на 7-8 стадиях цикла заметно увеличивается и составляют: 60,7 %; 61,8 %; 63,6 % соответственно, а к 30-дню составляет 64,8 %, которое превышает нормальных показателей (62,5 %). Однако, количество канальцев на 1-6 стадиях цикла остается низкими, по сравнению с нормой. Количество канальцев на 9-14 стадиях цикла на 3 и 7 дни опыта несколько увеличивается, а на 15, 30 дни уменьшается до 11,1 %, которые являются низкими чем нормы. Количество всех видов сперматогенных клеток в 1 семенном канальце на 7-8 стадиях цикла на 1 день эксперимента остается низкими и составляет 384,6±3,6, на 3 день – 534,5±5,7, на 7 день увеличивается до 582,6±5,8, на 15 день – 728,4±6,8, и на 30 день эксперимента доходит до 782,8±7,3 штук и превосходит цифров нормальных показателей. При этом количество сперматогоний значительно больше по сравнению с острым опытом и к 30 дню доходили почти до нормальных показателей – 92,3±3,7. Количество сперматоцитов и сперматидов также имеют тенденцию к увеличению и до конца экспериментов они достигают нормальных показателей. Хотя количество клеток Сертоли во всех сроках эксперимента остается в пределах нормы, однако клеточно-сертолиевый индекс в начальных сроках значительно меньше нормы, а в последующие сроки поднимается до нормальных показателей.
Таким образом, количественное исследование морфологических структур семенника позволяет более объективно охарактеризовать адаптивные и патологические изменения органа. Полученные результаты позволили доказать однотипность ответа сперматогенных клеток на иммунно- и витаминотерапию в виде нарастания количества канальцев 7-8 стадий и с уменьшением количества канальцев 9-14 стадий цикла.