Сбор и анализ слюны один из самых нетравматичных методов исследований в медицине, в связи с этим он имеет преимущества по сравнению с методами гемодиагностики. Слюнные железы тонко реагируют на любые изменения в состоянии внутренних органов и систем организма, будь это патологический процесс или физиологическое состояние [3]. Вместе с тем исследователь ротовой жидкости должен обладать достаточной квалификацией, чтобы иметь возможность учитывать региональную, стоматологическую специфику [8]. Так повышенная активность ксантиноксидазы в ротовой жидкости может объясняться не только ростом маркеров окислительного стресса во внутренних органах, в крови, а как следствие и в слюне, но и местной реакцией ротовой полости на изменение микробиоциноза, поскольку под влиянием бактериальных токсинов, ферментов патогенности и ишемии неизменно включается лейкоцитарный механизм активации перекисного окисления липидов [9].
Цель исследования изучить биохимические показатели окислительного стресса в ротовой жидкости у студентов с разным стоматологическим статусом и качеством жизни.
Материалы и методы исследования
Участниками исследования стали 40 студентов стоматологического факультета ГБОУ ВПО ИвГМА России в возрасте 20-21 года. Все исследования проводились с учётом этических норм. Для исследования биохимических маркеров оксидантного стресса у каждого обследуемого проводили забор ротовой жидкости, которую получали без стимуляции, сплевыванием в стерильные полипропиленовые пробирки, утром натощак в течение 5–15 минут. Затем ротовая жидкость центрифугировалась 15 минут при 8000 об/мин. Надосадочную часть ротовой жидкости переливали в пластиковые пробирки и хранили при температуре – 30 °С. Концентрацию малонового диальдегида (МДА) в ротовой жидкости определяли барбитуратовым методом. Активность ксантиноксидазы (АКО) определяли по методу Hashimoto, спектрофотометрически по образованию мочевой кислоты из ксантина.
Параллельно у студентов определялись следующие стоматологические индексы: папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс (РМА) в модификации Parma (1960) и гигиенический индекс (ГИ) по методу Ю.А. Федорова и В.В.Володкиной (1971). Также на основе изготовленных по классической гистологической методике цитологических мазков соскобов эпителия слизистой десны при микроскопии определялись цитологические индексы: кариопикнотический индекс (КПИ), эозинофильный индекс (ЭИ), а также соотношение ороговевших чешуек к поверхностным клеткам (РП). Вышеописанные индексы для более точной характеристики состояния ротовой полости [6] определялись для слизистой десны в области оральной поверхности нижних резцов.
Для оценки стоматологического здоровья в терминах его влияния на качество жизни, обычно, применяются специальные стоматологические тесты, каждый из которых предназначен для измерения частоты, степени влияния стоматологических проблем на функциональное и социально-психологическое благополучие [1] , такие как OHIP-14, DIDL, OHQoL, Шкала ВАШ [3]. Однако, поскольку нашей целью стала не оценка влияния стоматологического статуса на качество жизни, а напротив, изучение коррелятов между локальными особенностями состояния ротовой полости и показателями, характеризующими организм в целом, то для определения «качества жизни» был использован русско-язычный аналог международного универсального опросника ВОЗ КЖ-100. С помощью опросника осуществляется оценка шести крупных сфер качества жизни: физическая сфера (ФС), психологическая сфера, уровень независимости, социальные взаимоотношения, окружающая среда, духовная сфера (ДС).
Полученные данные обработаны статистически, достоверность разницы средних определялась при помощи Т-критерия Стьюдента (p < 0,05). Кроме того был проведен двухфакторный дисперсионный анализ с определением показателей силы влияния факторов по отдельности, их совокупной, и общей силы влияния [4, 5].
Результаты исследования и их обсуждение
В результате исследования были получены следующие данные. 20 % изученных студентов имели РМА в диапазоне 0,08–0,33, и 25 % студентов – ГИ в диапазоне 1,1–1,7 у остальной выборки студентов они составили 0 и 1, соответственно. Концентрация МДА в ротовой жидкости в среднем составила 1,63 ± 0,14 (нм/мл), а АКО 0,062 ± 0,005 у.е. Следует отметить, что коэффициент ранговой корреляции Спирмена между МДА и АКО составил только 0,31. В связи с этим следующим этапом нашего исследование стало уточнение сопряжённости каждого из маркеров окислительного стресса со стоматологическими показателями и показателями качества жизни, по отдельности.
На первом этапе настоящей работы все испытуемые были разделены на две подгруппы - с низкой и высокой концентрацией МДА в ротовой жидкости: в группе лиц с низкой концентрацией МДА в ротовой жидкости ее среднее значение составило 1,2 ± 0,1 нм/мл, а в группе лиц с высокой концентрацией МДА в ротовой жидкости ее среднее значение составило 2,1 ± 0,1 нм/мл. В ходе исследования (рис.1) были выявлены достоверно более высокие значения качества жизни в физической сфере (ФС) (p < 0,05). Вместе с тем Т-критерий Стьюдента для данных о качестве жизни в области духовной сферы (ДС) у изучаемых групп лиц с высокой и низкой концентрацией МДА в ротовой жидкости достоверно указывал на отсутствие различий между указанными группами (p > 0,95).
Рис. 1. Показатели качества жизни в физической и духовной сферах у групп с высокой и низкой концентрацией МДА в ротовой жидкости
Вместе с тем была выявлена достоверная (p < 0,05) взаимосвязь между высокими показателями концентрации МДА и низкими значениями ЭИ и РП для эпителия слизистой оральной поверхности десны в области нижних резцов (рис. 2).
Общепризнана роль МДА как маркера окислительного стресса, который довольно часто рассматривается на организменном уровне и является типовым процессом целого ряда физиологических состояний, в том числе: старения, адаптации, стресса. Последний, сочетаясь с рациональным питанием, может оказывать тренирующее влияние на системном уровне. В связи с этим становится очевидной сопряженность его концентрации в ротовой жидкости с оценкой физической сферы качества жизни изучаемой группы студентов. При таком, организменном подходе его концентрация в ротовой жидкости может рассматриваться как результат фильтрации из плазмы крови в слюну.
В тоже время, локально на уровне ротовой полости концентрация МДА также оказывается взаимосвязанной с состоянием тканей и клеток. Эозинофильный индекс –представляет собой процентное отношение всех зрелых отделившихся поверхностных клеток с эозинофильной окраской цитоплазмы к зрелым поверхностным клеткам с базофильной окраской цитоплазмы, такие изменения тинкториальных свойств вызваны процессами дифференцировки клеток, накоплением в их цитоплазме гранул кератина. Синхронное увеличение доли роговых чешуек и клеток с эозинофильной цитоплазмой в мазке ротовой жидкости группы низкой концентрацией МДА в ротовой жидкости (рис. 2), по-видимому, отражает взаимосвязь регенерации и дифференцировки эпителиальной ткани слизистой десны со скоростью деградации полиненасыщенных жиров мембран клеток активными формами кислорода.
Рис. 2. Цитологические индексы у групп с высокой и низкой концентрацией МДА в ротовой жидкости
На втором этапе настоящей работы все испытуемые были разделены на две подгруппы - с низкой и высокой АКО в ротовой жидкости: в группе лиц с низкой АКО в ротовой жидкости ее среднее значение составило 0,052 ± 0,007 м.е./мл, а в группе лиц с высокой АКО в ротовой жидкости ее среднее значение составило 0,067 ± 0,006 м.е./мл.
В отличие от групп с высокой и низкой концентрацией МДА значения ЭИ и РП для групп с высокой и низкой активностью фермента были разнонаправлены. Так для более низких значений АКО были характерны высокие значения ЭИ и низкие значения ПК и наоборот, высокие значения АКО сочетались с достоверно (p < 0,05) более низкими значениями ЭИ и более высокими значениями ПК (рис. 3). Кроме того была выявлена достоверная (p < 0,05) взаимосвязь низких значений АКО с высокими значениями КПИ.
Рис. 3. Цитологические индексы у групп с высокой и низкой АКО в ротовой жидкости
При этом была выявлена достоверная (p < 0,05) взаимосвзь между высокими значениями РМА и ГИ и низкими значениями АКО (рис. 4). Последнее, по видимому, объясняется биологической ролью ксантиноксидазы в местной антибактериальной защите организма, окисляя ксантин либо гипоксантин и она образует супероксидный анион-радикал – ведущую активную форму кислорода в процессах свободнорадикального окисления. Последний же обладает токсическим действием на аэробные и анаэробные организмы. Вышеописанный механизм позволяет расматривать ксантиноксидазу как один из элементов неспецифической защиты, эфекты которой, хорошо изучены на примере грудного молока [10].
Рис. 4. Стоматологические индексы у групп с высокой и низкой концентрацией МДА в ротовой жидкости
На третьем этапе настоящей работы для выявления совместных эффектов взаимодействия маркеров окислительного стресса с выбранными стоматологическими параметрами и характеристиками качества жизни нами был применен двуфакторный дисперсионный анализ (таблица).
Представленные таблице данные свидетельствуют о неодинаковой силе влияния концентрации МДА и АКО ротовой жидкости, как на местные, так и на системные показатели. 24 % вариации ГИ и 23 % вариации РМА сопряжено с изменениями АКО. При этом его влияние на КПИ и ЭИ незначительно. Наоборот концентрация МДА в ротовой жидкости определяет 15 % вариации бальной оценки физической сферы качества жизни.
Влияние некоторых маркеров окислительного стресса на изучаемые показатели
|
Показатель силы влияния факторов (?) |
||||
|
Изучаемые параметры |
Концентрация МДА |
АКО |
Совокупное влияние концентрации МДА и АКО |
Общее влияние концентрации МДА и АКО |
|
КПИ |
0,07 |
0,01 |
0,20 |
0,28 |
|
ЭИ |
0,09 |
0,01 |
0,09 |
0,19 |
|
ПК |
0,09 |
0,05 |
0,11 |
0,25 |
|
ГИ |
– |
0,24 |
– |
0,24 |
|
РМА |
– |
0,23 |
– |
0,23 |
|
ФС |
0,15 |
0,08 |
0,06 |
0,29 |
Кроме разной роли концентрации МДА и АКО в формировании изучаемых параметров нами было выявлено совокупное влияние этих факторов на КПИ (20 % вариации индекса) и ПК (11 % вариации показателя) слизистой десны оральной поверхности нижних резцов.
Заключение
Таким образом, концентрация МДА и АКО в ротовой жидкости находятся в зависимости, как от местных, так и от факторов, реализующихся на организменном уровне. Высокая оценка качества жизни в физической сфере, у практически здоровых студентов в возрасте 20–21 года сочетается с более высокими показателями МДА в ротовой жидкости и признаками замедления процессов ороговения эпителия слизистой десны. Низкая АКО ротовой жидкости сопровождается повышением индексов гигиены ротовой полости. Вместе с прямым воздействием их эффекты в ряде случаев дополняют, потенцируют друг друга, увеличивая совокупное действие на изучаемые признаки и прежде всего на показатели морфологии эпителия.
Вследствие этого, при оценке вышеописанных показателей окислительного стресса становится очевидна необходимость учитывать локальные, ограниченные ротовой полостью состояния и процессы, в том числе стоматологический статус пациента.