Лечебные свойства лекарственных растений зависят от количественного содержания и компонентного состава биологически активных веществ, обладающих определенной фармакологической активностью. Часто такие соединения содержатся лишь в определенных или близкородственных видах лекарственных растениях. Например, для растений рода шалфей характерно накопление эфирного масла, которое обладает противовоспалительным, антибактериальным действие [6]. Противовоспалительный эффект может быть обусловлен и полисахаридами, которые в растениях рода шалфей еще не исследованы. Актуальность применения полисахаридов в медицинской практике обусловлено отсутствием их токсичности и побочного действия на организм. В связи с этим представило большой интерес изучение противовоспалительной активности водорастворимых полисахаридов, выделенных из культивируемого вида шалфея горминового.
Материалы и методы исследования
Объектом исследования служила сухая воздушно-измельченная трава культивируемого вида шалфея горминового (Salvia horminum L.), заготовленная в период массового цветения растения в 2013 г.
Для выделения полисахаридного комплекса воздушно-сухое измельченное сырье предварительно обрабатывали спиртом этиловым 70 % для удаления полифенольных соединений.
Из шрота, оставшегося после получения полифенольных соединений, выделяли водорастворимый полисахаридный комплекс (ВРПС). Для чего воздушно-сухой шрот экстрагировали водой в соотношении 1:20 к массе сырья при нагревании до 95 °С в течение 1 часа при постоянном перемешивании. Повторное извлечение полисахаридов проводили дважды водой в соотношении 1:10. Растительный материал отделяли центрифугированием, и объединенные экстракты упаривали до 1/5 первоначального объема. Полисахариды осаждали тройным объемом спирта этилового 96 % при комнатной температуре. Выпавший плотный осадок полисахаридов отделяли, промывали спиртом этиловым 70 %, ацетоном. Полученные ВРПС лиофильно высушивали [2].
Оценку противовоспалительного действия ВРПС проводили в соответствии с методическими рекомендациями по исследованию противовоспалительных препаратов [7], влияющих на разные стадии процесса воспаления и в соответствии с установленными документами «Об утверждении правил лабораторной практики» [5].
Антипролиферативную активность ВРПС изучали на модели «ватной гранулемы» [1]. У крыс, находящихся под легким эфирным наркозом в области спины тщательно выстригали шерсть и в асептических условиях делали разрез кожи и подкожной клетчатки длиной 1–2 см. Затем пинцетом через образовавшийся разрез кожи в подкожной клетчатке формировали полость, куда помещали предварительно простерилизованный ватный шарик массой 25 мг, после чего накладывали 1–2 шва. Через 7 дней, на протяжении которых вводили исследуемый фитопрепарат в дозе 100 мг/кг массы животного, имплантированный шарик с образовавшейся вокруг него грануляционной тканью извлекали и высушивали до постоянной массы при t 55–60 °С. Массу образовавшейся грануляционно-фиброзной ткани определяли по разнице между массами высушенной гранулы и имплантированного ватного шарика. В качестве контроля использовали дистиллированную воду, которую вводили в аналогичных условиях .
Антиэкссудативные свойства оценивали на модели острого воспалительного отека, вызванного субплантарным введением в заднюю лапу мыши 0,05 мл 2,5 % водного раствора формалина [3].
Одним группам мышей в течение недели, а затем за 2 часа до введения формалина, через 5 часов и 18 часов после него вводили внутрижелудочно ВРПС в дозе 100 мг/кг массы животного. Мышам контрольной группы в те же сроки применяли воду очищенную. Воспаление вызывали путем впрыскивания в толщу бедра одной из задних лапок 0,05 мл 2,5 % раствора формалина. Через 24 часа после введения формалина мышей усыпляли и у них отрезали воспаленные и невоспаленные задние лапки на уровне тазобедренного сустава. О выраженности воспалительного отека судили по приросту веса воспаленных лапок, который определяли по разнице в весе между воспаленными и невоспаленными лапками; о противовоспалительном действии изучаемых препаратов – по разнице между величиной отека лапы, вызванного формалином у контрольных животных и мышей, получавших изучаемый препарат.
Фармакологическую активность фитопрепарата сравнивали с настоем официнального вида, полученного из листьев шалфея лекарственного, который готовили по методике ГФ XI издания [4].
Статистическую обработку данных проводили согласно руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ [7].
Результаты исследования и их обсуждения
В результате проведенных исследований впервые из травы шалфея горминового выделены ВРПС, выход которых составил 8,59 % от воздушно-сухого сырья. Водорастворимый полисахаридный комплекс шалфея горминового, представляет собой аморфный порошок кремового цвета, без запаха, хорошо растворим в воде, практически нерастворим в органических растворителях, дает положительные реакции осаждения со спиртом этиловым, ацетоном, реакцию Феллинга после кислотного гидролиза, а также образуют оранжевое окрашивание с раствором основного ацетата свинца и зеленоватый осадок с сульфатом меди.
Изучение антипролиферативной активности показало, что в контрольной группе животных вес грануляционно-фиброзной ткани составил 140,55 ± 8,07 мг. Эта величина нами принята за 100,00 % (табл. 1).
Таблица 1
Влияние изучаемых фитопрепаратов на образование грануляционно-фиброзной ткани у крыс
|
Фитопрепараты растений рода Salvia L. |
Доза |
Масса сухой грануляционно-фиброзной ткани, мг |
Угнетение пролиферации, % |
|
Контроль |
– |
140,55 ± 8,07 |
|
|
Настой шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.) |
1г/кг |
37,68 ± 3,13* |
73,19 |
|
ВРПС шалфея горминового (Salvia horminum L.) |
100 мг/кг |
49,85 ± 3,62* |
64,53 |
Примечание: * – различия по сравнению с контролем статистически достоверны при Р < 0,05; число животных в контроле и в каждом варианте опыта 6.
Под влиянием исследуемых ВРПС, величина грануляционной ткани по сравнению с контрольными данными составила 49,85 ± 3,62 мг, что приводило к достоверному снижению воспалительного процесса. Противовоспалительный эффект составил 64,53 %. Под действием препарата сравнения (настоя листьев шалфея лекарственного) вес грануляционно-фиброзной ткани составил 37,68 ± 3,13 мг, что приводило к угнетению пролиферации на 73,19 %.
При изучении антиэкссудативной активности на модели формалинового отека установлено, что максимальная величина отека лапы в контроле составляет 58,27 ± 2,65 мг (100 %) (табл. 2).
Таблица 2
Влияние изучаемых фитопрепаратов на отек лапы, вызванный у мышей формалином
|
Фитопрепараты растений рода Salvia L |
Вес лапок, мг |
Величина отека |
Противовоспалительный эффект, % |
||
|
правой |
левой |
(М ± m), мг |
% |
||
|
Контроль |
126,51 |
184,78 |
58,27 ± 2,65 |
100,00 |
|
|
Настой шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.) |
134,53 |
172,60 |
38,07 ± 2,18* |
65,33 |
34,67 |
|
ВРПС шалфея горминового (Salvia horminum L.) |
122,86 |
155,35 |
32,49 ± 2,22* |
55,76 |
44,24 |
Примечание: * – различия по сравнению с контролем статистически достоверны при Р < 0,05; n = 6 – количество мышей в группе.
Под действием ВРПС происходило снижение величины оттека (32,49 ± 2,22 мг) лапы мыши. При введении настоя шалфея лекарственного величина отека составила 38,07 ± 2,18 мг. Противовоспалительный эффект данных фитопрепаратов составил 44,24 % (ВРПС шалфея горминового) и 34,67 % (шалфей лекарственный).
Выводы
● Таким образом, впервые из травы шалфея горминового выделен водорастворимый полисахаридный комплекс, выход которого составил 8,59 %.
● Изучена противовоспалительная активность ВРПС шалфея горминового, проявляющаяся в угнетении степени развития отека конечности мышей и в замедлении развития гранулемы у крыс.
● Доказано, что ВРПС шалфея горминового проявляют выраженную антипролиферативную и антиэкссудативную активность, причем антиэкссудативная активность ВРПС шалфея горминового (противовоспалительный эффект составил 44,24 %) превышает таковую у настоя шалфея лекарственного (противовоспалительный эффект составил 34,67 %).
● Антипролиферативная активность, проявляющаяся при действии ВРПС шалфея горминового (противовоспалительный эффект составил 64,53 %), незначительно уступает по силе действия настою шалфея лекарственного (противовоспалительный эффект которого составил 73,19 %).