В диагностике заболеваний органов и тканей ротовой полости большую роль отводят биохимическим исследованиям ротовой жидкости, поскольку хронический генерализованный пародонтит сопровождается не только морфологическими поражениями со стороны тканей пародонта [4], но и серьезными отклонениями в биохимических показателях, что отражает глубину нарушения метаболических процессов в ротовой полости 1, 10, 12]. В связи с этим применение комплексного клинико-биохимического анализа состояния полости рта является достаточно перспективным способом прогнозирования течения патологического процесса при заболеваниях пародонта [3, 7]. В развитии воспалительных заболеваний тканей пародонта большую роль играют микроорганизмы, агрессивность действия которых обусловлена наличием в их мембранах протеолитических ферментов и эндотоксинов, способных поражать пародонт. В регуляции иммунных и метаболических процессов большую роль отводят лизоциму, ферменту, который инициирует синтез лимфокинов, участвует в регуляции роста клеток и их дифференцировке, стимулирует метаболические процессы, способен инактивировать изоантигены, имеющие в составе гликозаминогликаны и гликопротеины [5]. Исследования химического состава ротовой жидкости, определение факторов неспецифической и специфической защиты ротовой полости позволяют решать вопросы как диагностики, так и выбора тактики рационального лечения пациентов [2, 8, 11].
Целью настоящей работы являлось изучение особенностей функционирования системы иммунной защиты ротовой полости при хроническом генерализованном пародонтите.
Материалы и методы исследования
Забор РЖ у пациентов осуществлялось во время максимальной секреции слюны в утренние часы (с 9 до 11 часов), натощак или через 1,5-2 часа после приема пищи. Обследование пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом (n=105) проводили в ГБУЗ "Краевой клинический стоматологический центр" министерства здравоохранения Краснодарского края (г. Краснодар); Стоматологической поликлинике ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России (г. Краснодар). Биохимический анализ РЖ и крови проводили в строгом соответствии с требованиями, регламентируемыми существующей нормативной базой медико-биологических исследований. Длительность заболеваний пародонта составила 7,5±0,4 лет. Контрольную группу 2 составили 25 человек (мужчин 12 и женщин 13, в возрасте 56,3±8,7 года) без патологии пародонта, соизмеримых по полу и возрасту с другими обследованными.
Содержание иммуноглобулинов (Ig) А, G, M (sIgA, IgG, IgM) в РЖ определяли турбидиметрическим методом, который основан на фотометрической оценке рассеяния свет образующимися комплексами "антиген-антитело". Для турбидиметрической оценки иммуноглобулинов использовали стандартные диагностические наборы (козьи моноклональные антитела к sIgA, IgG, IgM) компании Biosystems (Испания) Регистрировали показатели спектофотометрически с использованием термостатируемой измерительной ячейки при температуре 37°С и фильтра с длиной волны 340±20 нм. Расчет результатов анализа производили по калибровочной кривой, построенной на основании значений абсорбции для каждой концентрации калибратора конкретного класса Ig. Концентрацию определяемого Ig высчитывали путем интерполяции значения абсорбции пробы ротовой жидкости на калибровочную кривую.
Определение активности лизоцима в ротовой жидкости турбидиметрическим методом, активность фермента выражали в мг/мл ротовой жидкости [9]. Активность церулоплазмина (ЦП) определяли по методу [6], принцип метода основан на способности фермента окислять диметилпарафенилендиамин с образованием продуктов, дающих розовое окрашивание. Активность выражали в мг/л ротовой жидкости.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили в соответствии с методами, принятыми в вариационной статистике, с использованием свободного программного обеспечения – системы статистического анализа R (R Development Core Team, 2008, достоверным считали различие при р<0,05).
Результаты исследования и их обсуждение
При изучении содержания IgG в РЖ пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом отмечено его увеличение на 43,5% (p<0,05), повышение IgG в РЖ имеет место при нарушении гематопаренхиматозного барьера слизистой оболочки десны, что является свидетельством нарастания напряженности в местном иммунитете за счет воспалительного процесса, сопровождающегося микроциркуляторными и трофическими расстройствами в слизистой полости рта. Сходный характер изменений имел место и при исследовании содержания Ig M, увеличение которого может быть следствием как повышенной избирательной проницаемости через эпителиальный барьер, так и местным повышенным синтезом. При изучении содержания IgM у обследованных пациентов отмечен его рост на 59,8%, что характеризовало состояние местной резистентности в условиях инфекционных и воспалительных поражений ротовой полости и коррелировало с тяжестью патологического процесса.
Содержание лизоцима в ротовой жидкости пациентов, страдающих хроническим генерализованным пародонтитом, сопровождается значительным падением, составляющим в среднем 33,2%. Это свидетельствует о значительном ослаблении неспецифической резистентности тканей полости рта, что неминуемо приводит к ослаблению способности ротовой жидкости противостоять повреждающему действию патогенных факторов. Антибактериальные свойства ротовой жидкости во многом обусловлены присутствием в ней значительных количеств этого фермента, бактерицидное действие которого обусловлено его способностью гидролизовать гликозоаминогликаны в полсахаридах клеточных оболочек микроорганизмов. Наряду с антибактериальной лизоцим обладает и выраженной иммуномодуляторной активностью.
На фоне снижения содержания в РЖ лизоцима отмечен рост концентрации церулоплазмина. Его количество у пациентов, страдающих хроническим генерализованным пародонтитом, было на 58,1% выше, чем у лиц контрольной группы. Эти изменения можно рассматривать как компенсаторный фактор, направленный на усиление мощности системы неспецифической защиты тканей полости рта. Кроме того, церулоплазмин способен выполнять роль перехватчика токсических форм кислорода.
Проведенный анализ информативности клинико-лабораторных методов исследования позволил разработать и обосновать алгоритм тактики ведения пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом с использованием иммунохимических показателей ротовой жидкости.
Заключение
Таким образом, в работе показано, что при хроническом генерализованном пародонтите наблюдается нарушение метаболических процессов в полости рта, что приводит к значительным изменениям в РЖ и сопровождается ослаблением иммунной защиты ротовой полости. Снижение функциональной активности иммунной защиты создает условия для падения способности ротовой жидкости обеспечивать антибактериальную защиту, что приводит к дальнейшей потери зубов, ухудшает качество жизни пациентов. Лизоцим и церулоплазмин объективно отражают состояние неспецифической антибактериальной резистентности ротовой полости. Лизоцим, без сомнения, достаточно объективный и информативный показатель, он может служить диагностическим и прогностическим критерием в клинической практике. Доступным и информативным является тест по определению содержания церулоплазмина в РЖ. Повышение активности ЦП является следствием усиления окислительно-восстановительных процессов в полости рта, он одним из важнейших показателей, достаточно объективно отражающих состояние метаболических процессов в ротовой полости, поэтому возможно включение оценки содержания церулоплазмина в алгоритм биохимических исследований при обследовании стоматологических пациентов. Необходимо отметить, что широкое использование в клинической практике саливодиагностики, позволит успешнее контролировать состояние больных при хроническом генерализованном пародонтите за счет комплексного анализа показателей локальной иммунологической реактивности.