Во время беременности у женщин изменяется секреция женских половых гормонов: уровень прогестерона в крови повышен в 10 раз, а эстрогенов – в 30 раз по сравнению с организмом небеременной женщины и сохраненным менструальным циклом [4]. Гормональные изменения приводят к изменению клеточного метаболизма микробов ротовой полости, перестройке местных иммунных реакций [6]. Неспецифический механизм защиты ротовой полости от бактериальных патогенов представлен многими механизмами. К ним можно отнести механические механизмы (барьерная функция слизистых оболочек), микробиологический компонент (роль нормальной микрофлоры), химические (гуморальные) и клеточные факторы ротовой жидкости [1,5,7,9].
Клеточные механизмы неспецифических иммунных реакций представлены системой клеток, обладающих фагоцитарной и киллерной натуральной активностью. Система натуральных киллеров (NK-клеток), обладающих способность разрушать и переваривать клетки, представлена моноцитами и Т-лимфоцитами с рецепторами CD16 и CD56. Натуральные киллеры оказывают неспецифическое токсическое действие на клетки, пораженные инфекционным патогеном либо опухолевые клетки [2-3]. Согласно [8], пародонтит чаще всего протекает на фоне снижения бактерицидного потенциала нейтрофильных лейкоцитов, поликлональной активации В-лимфоцитов, высокого уровня антибактериальных антител и нарушения функции Т-лимфоцитов. Но многие стороны взаимодействия бактериальных агентов с факторами неспецифической резистентности и иммунитета. Особенно при беременности, остаются нераскрытыми, что требует дальнейшего изучения иммунологических аспектов пародонтита в гестационный период.
Целью работы явилось изучить у беременных женщин с воспалительными заболеваниями пародонта различной степени тяжести иммунофенотип лимфоцитов.
Материалы и методы исследования
Клеточное звено иммунитета изучено у 165 беременных женщин с воспалительными заболеваниями пародонта путем иммунофенотипирования лимфоцитов, в ходе которого определяли поверхностные маркеры и, соответственно, принадлежность клеток к той или иной субпопуляции. Как известно, лимфоциты экспрессируют особые у каждой субпопуляции поверхностные маркерные молекулы (CD) в зависимости не только от типа и стадии дифференцировки, но и от их функционального состояния, что позволяет дать характеристику различным иммунным реакциям в ответ на бактериальное воспаление. В работе определяли абсолютное и относительное количество лимфоцитов с маркерами CD3+ (общие Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хелперы), CD8+ (цитотоксические клетки), CD16+ (NK-клетки), CD95+ (FAS/APO-1 антиген-индукторный фактор апоптоза).
Состояние клеточного иммунитета оценивали путем количественного определения как относительного, так и абсолютного содержания циркулирующих в крови Т- и В- лимфоцитов, исходя из количества лимфоцитов в 1 мкл крови. Абсолютное количество лейкоцитов рассчитывали на ×109/л.
Мононуклеарные клетки крови выделяли центрифугированием на градиенте плотности фиколла-верографина (плотность 1,077 г/см3). Иммунофенотипирование лимфоцитов проводили методом лазерной проточной цитофлюориметрии (Cytomics FC500, BeckmanCoulter, USA) с использованием мышиных моноклональных антител LT3, LT4, LT8, LNK16, LT95, меченных ФИТЦ (ООО "Сорбент", Москва) к антигенам CD3+ (общие Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хелперы), CD8+ (цитотоксические клетки), CD16+ (NK-клетки), CD95+ (FAS/APO-1 антиген-индукторный фактор апоптоза).
Статистический анализ результатов исследования проводился с помощью программы STATISTICA 10.0 (StatSoft Inc., США), MedCalc (версия 9.3.5.0).
Результаты исследований и их обсуждение
Количество субпопуляций лимфоцитов в целом по группе в сравнительном аспекте со здоровыми донорами и здоровыми соматически женщинами с физиологически протекающей беременностью отражено в таблице 1. У здоровых женщин с физиологически протекающей беременностью в отличие от здоровых доноров наблюдалось снижение общего количества лимфоцитов на 10%, а также процентного содержания относительного числа зрелых Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD4+), соответственно, на 8,9% (p<0,05) и 7,4% (p<0,05) на фоне повышения Т-цитотоксических (CD8+) клеток на 19,5% (p<0,05). Изменение количества лимфоцитов с хелперными и киллерными свойствами привело к снижению иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 на 17,4% (p<0,05) (рис. 2). Абсолютное и относительное количество лимфоцитов с естественной киллерной активностью CD16+ было достоверно снижено на 19,6%, а также лимфоцитов с рецептором программирования клеточной гибели повышено, соответственно, на 26,2% (p<0,05) (рис. 2). Установленное изменение иммунофенотипирования лимфоцитов у беременных женщин с физиологически протекающей беременностью свидетельствовало о развитии незначительной иммуносупрессии.
Таблица 1
Абсолютное и относительное количество лимфоцитов и их субпопуляций у больных
2 группы и у здоровых доноров
|
Показатель |
2 группа, n=165 |
Здоровые доноры, n=32 |
Здоровые беременные женщины, n=31 |
|
Лимфоциты, % |
24,6±0,6*° |
30,1±1,2 |
27,1±0,8* |
|
Лимфоциты, х109/л |
1,6±0,2 |
1,9±0,4 |
1,7±0,3 |
|
СD3+,% |
60,8±1,2*° |
70,5±2,2 |
64,2±1,1* |
|
CD3+,×109 |
0,97±0,1 |
1,1±0,2 |
1,0±0,1 |
|
CD4+,% |
38,2±0,4*° |
43,3±0,6 |
40,1±0,5* |
|
CD4+,×109 |
0,61±0,08 |
0,73±0,09 |
0,62±0,06 |
|
CD8+,% |
28,9±0,5*° |
21,5±1,3 |
25,7±0,7* |
|
CD8+,×109 |
0,47±0,05 |
0,42±0,03 |
0,48±0,02* |
|
ИРИ |
1,32±0,1*° |
1,9±0,3 |
1,57±0,2 |
|
CD16+,% |
23,5±0,7*° |
20,9±1,0 |
16,8±0,6* |
|
CD16+,×109 |
0,37±0,04° |
0,40±0,03 |
0,28±0,02* |
|
CD95+,% |
9,9±0,6*° |
6,5±0,9 |
8,2±0,4* |
|
CD95+,×109 |
0,16±0,01* |
0,10±0,02 |
0,13±0,01 |
Примечание: * - достоверные отличия по сравнению со здоровыми донорами при p<0,05, ° - достоверные отличия по сравнению со здоровыми беременными женщинами
Рис. 1. Процентное изменение относительного количество лимфоцитов и их субпопуляций у беременных женщин (Бер.ж.) и беременных женщин с воспалительными заболеваниями пародонта (ВЗП) по сравнению со здоровыми донорами. * - достоверные отличия по сравнению со здоровыми донорами при p<0,05
У беременных женщин с воспалительными заболеваниями пародонта снижение общего количества лимфоцитов, зрелых Т-лимфоцитов (CD3+) и лимфоцитов с хелперно-индукторными свойствами (CD4+) происходило в большей мере, соответственно, на 18,3% (p<0,05), 13,8% (p<0,05) и 11,8% (p<0,05) по сравнению со здоровыми донорами (рис. 2). При этом, наблюдалось значимое повышение клеток, обладающих цитотоксическими свойствами, а также лимфоцитов, обладающих естественной киллерной активностью. В результате иммунорегуляторный индекс у беременных женщин на фоне воспалительных заболеваний пародонта значительно снижался на 30,5% (p<0,05) по сравнению со здоровыми волонтерами. У беременных женщин 2 группы относительное количество лимфоцитов с апоптической активностью возрастало на 52,3% (p<0,05), что предрасполагало к цитокиновому дисбалансу.
Таким образом, у беременных пациенток на фоне воспалительных заболеваний пародонта по сравнению со здоровыми беременными женщинами иммуносупрессия была выражена в большей мере, что предрасполагало затяжному течению хронических воспалительных заболеваний.
Абсолютное и относительное количество лимфоцитов и их субпопуляций у беременных женщин с хроническим пародонтитом различной степени тяжести в сравнительном аспекте со здоровыми донорами отражено в таблице 2.
Абсолютное и относительное количество лимфоцитов и их субпопуляций у беременных женщин с хроническим пародонтитом легкой и средней степени тяжести и у здоровых доноров
|
Показатель |
Хронический пародонтит легкой степени |
Хронический пародонтит средней степени |
Здоровые доноры, n=32 |
|
Лимфоциты, % |
24,8±0,6* |
23,3±0,7*° |
30,1±1,2 |
|
Лимфоциты, х109/л |
1,62±0,3 |
1,58±0,2 |
1,9±0,4 |
|
СD3+,% |
61,2±0,9* |
58,9±1,1*° |
70,5±2,2 |
|
CD3+,×109 |
0,97±0,1 |
0,92±0,05 |
1,1±0,2 |
|
CD4+,% |
37,8±0,4* |
36,4±0,3*° |
43,3±0,6 |
|
CD4+,×109 |
0,61±0,08 |
0,57±0,06* |
0,73±0,09 |
|
CD8+,% |
27,4±0,5* |
29,6±0,7*° |
21,5±1,3 |
|
CD8+,×109 |
0,46±0,05 |
0,47±0,03 |
0,42±0,03 |
|
ИРИ |
1,32±0,1* |
1,21±0,06* |
1,9±0,3 |
|
CD16+,% |
22,7±0,7 |
24,9±0,8*° |
20,9±1,0 |
|
CD16+,×109 |
0,37±0,04 |
0,39±0,06 |
0,40±0,03 |
|
CD95+,% |
8,7±0,6* |
10,9±0,4*° |
6,5±0,9 |
|
CD95+,×109 |
0,16±0,01 |
0,17±0,03 |
0,10±0,02 |
Примечание: * - достоверные отличия по сравнению со здоровыми донорами при p<0,05,
° - достоверные отличия по сравнению с беременными женщинами с хроническим пародонтитом легкой степени
При повышении тяжести пародонтита снижалось общее количества лимфоцитов, зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов, повышалось число Т-лимфоцитов с цитотоксической и киллерной, апоптической активностью (рис. 2). При хроническом пародонтите средней степени тяжести в отличие от здоровых доноров относительное число лимфоцитов снижалось на 22,6%, зрелых Т-лимфоцитов на 16,5%, Т-хелперов на 15,9% на фоне повышения относительного количества Т-лимфоцитов с маркером CD8+ на 37,7%, CD16+ на 19,1% и CD95+ на 67,7% (p<0,05).
Рис. 2. Процентное изменение относительного количество лимфоцитов и их субпопуляций у беременных женщин с хроническим пародонтитом легкой и средней степени тяжести по сравнению со здоровыми донорами (Зд). * - достоверные отличия по сравнению со здоровыми донорами при p<0,05. ПЛ – хронический пародонтит легкой степени, ПС - хронический пародонтит средней степени тяжести.
Таким образом, воспалительные заболевания пародонта у беременных женщин ассоциированы с нарушениями в клеточном звене иммунитета. У беременных женщин с хроническим пародонтитом по мере повышения степени тяжести патологии пародонта, наблюдалась более выраженная лимфопения, дисбаланс субпопуляций Т-клеток с уменьшением относительного числа зрелых Т-лимфоцитов и Т-хелперов на фоне повышения клеток с киллерной и апоптической активностью. Особенности иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови в большинстве своем по направленности повторяли изменения у беременных женщин без стоматологической патологии, но были более выраженными. Более выраженная иммуносупрессия у бременных женщин с воспалительными заболеваниями пародонта предрасполагала к затяжному течению хронических воспалительных заболеваний.
Заключение
У беременных женщин с хроническим пародонтитом по мере повышения степени тяжести от легкой к средней наблюдается усугубление лимфопении, дисбаланса субпопуляций Т-клеток с уменьшением относительного числа зрелых Т-лимфоцитов и Т-хелперов на фоне повышения клеток с киллерной и апоптической активностью, что ведет к цитокиновому дисбалансу и активации секреции провоспалительных медиаторов.