Проблемы стимуляции заживления ран и изучения органотипической регенерации не утратили своей актуальности, несмотря на большое количество написанных по этой теме научных работ и широкий спектр лекарственных препаратов, стимулирующих процессы репарации. Это связанно с тем, что закономерности течения органотипической регенерации до конца не выяснены, а так же с возможностью влияния на этот процесс целого ряда различных факторов. Одним из них является ТЭС-терапия – ее воздействие обладает антистрессовым, противовоспалительным, иммуномодулирующим, обезболивающим, заживляющим действием [1–5, 7, 8, 10].
Цель работы – изучение влияния ТЭС-терапии на репаративную регенерацию кожи крыс в условиях ишемии, вызванной формированием кожной складки.
Материалы и методы исследования
Исследование проведено в лаборатории кафедры общей и клинической патофизиологии ГБОУ ВПО КубГМУ. Эксперименты проведены на 10 белых нелинейных самцах крыс средней массой – 200 ± 25 гр. Содержание животных и постановка экспериментов проводилась в соответствии с требованиями приказов № 1179 МЗ СССР от 11.10.1983 года и № 267 МЗ РФ от 19.06.2003 года, а также международными правилами «Guide for the Care and Use of Laboratory Animals». Все оперативные вмешательства сопровождались использованием золетил-ксилазинового наркоза по следующей схеме: золетил 0,3 мг в/м («Virbac» Франция), ксиланит 0,8 мг в/м (ЗАО «НИТА-ФАРМ, Россия, г. Саратов), атропина сульфат 0,1 % раствор – 0,01 мл п/к из расчета на 100 гр. массы тела животного [6, 9]. Наркоз верифицировали по исчезновению реакции на болевые раздражители (укол лапы) и угнетению роговичного рефлекса.
Моделирование ишемии кожи проводилось путем прошивания кожной складки на спине животного хлопковой нитью. В основании складка прошивалась прерывистым одиночным швом без промежутков между стежками, длина складки составляла в среднем 4,6–5 см, ее высота 0,8–1 см (по методике В.П. Галенко-Ярошевского, 2005 год).
Животные были разделены на 2 группы: 1 группа (контрольная) – 5 крыс с моделью ишемии кожи, 2 группа (опытная) – 5 крыс с моделью ишемии кожи, которым проводилась ТЭС-терапия, 3 сеанса каждый по 15 минут, использован электростимулятор «ТРАНСАИР-03».
Динамику процесса регенерации оценивали путем измерения длины некротизированного участка кожной складки с 1 по 7 сутки. На 3 сутки эксперимента у двух животных из каждой группы был выполнен забор участка некротизированной кожной складки на границе с жизнеспособной тканью.
Гистологический материал подвергался фиксации в 10 % нейтральном забуференном фосфатами формалине. Выполнялась проводка образцов через изопропанол-минеральное масло, с последующей заливкой в парафин [9]. Парафиновые блоки нарезались на срезы толщиной 10 мкм. на микротоме МПС-2 (CCCP). Выполняли окрашивание микропрепаратов гематоксилином и эозином. Полученные микропрепараты фотографировали с помощью окулярной камеры «Levenhuk 230» (США) на микроскопе Микромед-6 (Россия). Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы «Statistica». Полученные результаты исследуемых групп после статистической обработки выражены в виде средних значений (М) и ошибки среднего (m). Достоверность различий между сравниваемыми группами проверялась с помощью t-критерия Стьюдента (t).
Результаты исследования и их обсуждение
Случаев незапланированной гибели и осложнений у животных не было. Отмечено, что получившие ТЭС-терапию крысы лучше переносили постоперационный период.
На 1 сутки у крыс группы № 1 и группы № 2 наблюдалось появление незначительного очага некроза в прошитом наглухо конце кожной складки, его размеры составили 0,66 ± 0,06 см. На 2 сутки длина зоны некроза в кожной складке у крыс группы № 1 стала 1,5 ± 0,02 см, что больше в сравнении с крысами группы № 2 в среднем на 0,2 см. На 3 сутки у животных группы № 2 длина участка некроза складки составляла 2 ± 0,2 см., в то время как у группы № 1 некроз распространился на 2,5 ± 0,1 см., таким образом, у крыс из группы № 2 на фоне ТЭС-терапии зона некроза на 8 % меньше в сравнении с контролем. На микропрепаратах полученных от животных группы № 1 и группы № 2 на фоне окраски гематоксилином-эозином мы видим отчетливое формирование зоны некроза, в группе № 2 воспалительная инфильтрация на границе с областью некроза была выражена несколько меньше.
На 4 сутки наблюдения длина участка некроза у крыс группы № 2 составила 2,7 ± 0,2 см, в то время в группе № 1 3,3 ± 0,07 см. На 5 день длина участка некроза в группе № 2 составляла 3,2 ± 0,2 см., а в группе № 1 4,1 ± 0,1 см, то есть на 18 % больше. На 6 день у крыс из группы № 1 длина области некроза складки составила 4,6 ± 0,06 см, а в группе № 2 3,7 ± 0,3 см, что на 20 % меньше. К 7 дню наблюдения у крыс из группы № 1 кожные складки, сформированные на спине, подвергались некрозу полностью. У крыс из группы № 2 кожная складка некротизировалась в среднем на 3,9 ± 0,3 см., что составило в среднем на 20 % меньше в сравнении с группой № 1. Согласно критерию Стьюдента начиная с 4 дня эффективность действия ТЭС-терапии в условиях ишемии кожи, вызванной формированием кожной складки, составляет 95 % и более. До 4 дня она составляла менее 95 %, но не меньше 68 %.
Выводы
На модели ишемии кожи показан значительный дерматопротекторный и противоишемический эффекты ТЭС-терапии, что показывает перспективность применения метода при тяжелых поражениях кожи в клинической практике.