Заболевания щитовидной железы приводящие к развитию гипертиреоза являются одними из наиболее распространенных форм эндокринной патологии в России [1, 3]. К настоящему времени многие аспекты патогенеза гипертиреоза остаются недостаточно изученными, одним из таких вопросов является тиреотоксическая кардиомиопатия. В связи с этим весьма актуальным представляется создание экспериментальной модели тиреотоксического поражения сердца у крыс.
Цель работы – разработка модели тиреотоксической кардиомиопатии в эксперименте у крыс.
Материалы и методы исследования
Исследование проведено в лаборатории кафедры общей и клинической патофизиологии ГБОУ ВПО КубГМУ. Эксперименты проведены на 6 белых нелинейных крысах средней массой – 150 ± 25 гр. Содержание животных и постановка экспериментов проводилась в соответствии с требованиями приказов № 1179 МЗ СССР от 11.10.1983 года и № 267 МЗ РФ от 19.06.2003 года, а также международными правилами «Guide for the Care and Use of Laboratory Animals» [10]. Все потенциально болезненные вмешательства сопровождались использованием золетил-ксилазинового наркоза по следующей схеме: золетил 0,3 мг в/м («Virbac» Франция), ксиланит 0,8 мг в/м (ЗАО «НИТА-ФАРМ, Россия, г. Саратов), атропина сульфат 0,1 % раствор – 0,01 мл п/к из расчета на 100 гр. массы тела животного [4, 7, 8]. Наркоз верифицировали по исчезновению реакции на болевые раздражители (укол лапы) и угнетению роговичного рефлекса.
Крысы были разделены на 2 группы: группа № 1 – из 4 животных, которых поили раствором «L-тироксина»; группа № 2 – из 2 крыс, контрольная, интактные животные.
Создание модели тиреотоксической кардиомиопатии у крыс проводилось путем спаивания препарата «L-тироксин» с питьевой водой в дозировке 1 мг гормона на 1 мл воды в поилке. Проводился общий подсчет объема выпитой жидкости и массы съеденного корма. Спустя 30 дней после начала эксперимента мы осуществляли эвтаназию крыс с последующим забором сердца. Забранное сердце быстро промывалось в холодном 0,9 % растворе хлорида натрия, разрезалось лезвием по длиннику на две части, которые затем помещались в 10 % нейтральный забуференный фосфатами формалин. Выполнялась проводка препарата через изопропанол-минеральное масло, с последующей заливкой в парафин [2, 5, 6, 9]. Парафиновые блоки нарезались на срезы толщиной 10 мкм на микротоме МПС-2 (CCCP), проводилось их монтирование на предметные стекла. Выполняли окрашивание микропрепаратов гематоксилином и эозином и их заключение под покровное стекло в пихтовый бальзам. Полученные микропрепараты фотографировали с помощью окулярной камеры «Levenhuk 230» (США) на микроскопе Микромед-6 (Россия).
Результаты исследования и их обсуждение
Случаев незапланированной гибели и осложнений у животных зарегистрировано не было. Анализ динамики объема выпитой животными жидкости в сутки показал: для группы № 1 – объем выпиваемого раствора увеличился с 10–12 мл до 20–23 мл (из расчета на одну крысу); для группы № 2 – выраженных колебаний объема выпиваемой жидкости не выявлено (в среднем 12 мл). При исследовании микропрепаратов миокарда крыс группы № 1, окрашенных гематоксилином-эозином, были обнаружены области с размытой картиной поперечно-полосатой исчерченности, фибриноидного отека, полнокровия сосудов с признаками отека эндотелиоцитов, очажки глыбчатого распада кардиомиоцитов, участки контрактур волокон кардиомиоцитов данные явления трактовались нами как кардиомиопатия. У крыс группы № 2 отмечается нормальная микроскопическая структура миокарда, структура кардиомиоцитов сохранна, отчетливо видна поперечно-полосатая исчерченность, сосуды миокарда умеренно полнокровны.
Выводы
Установлено, что развитие экспериментального гипертиреоза у крыс сопровождается увеличением объема выпиваемой жидкости и развитием морфологических признаков кардиомиопатии. В связи изменением объема потребляемой жидкости, а следовательно и L-тироксина в ходе эксперимента, данную модель для воспроизведения экспериментальной патологии применять нежелательно. Для проверки результатов полученных при использовании данной модели требуется сменить путь введения L-тироксина c перорального на парентеральный.