Из сапропеля оз. Тараскуль Тюменской области способом, включающим экстрагирование водой очищенной, центрифугированием (5 000 g), упариванием супернатанта на ротационном испарителе, ультрафильтрацией на мембране гидратцеллюлозной Т-100, замораживанием с последующим размораживанием продукта, обработки полученной фракции аммония сульфатом, удалением аммония сульфата путем замены растворителя (спирт этиловый), удалением спирта этилового и гель-фильтрацией водного раствора сухого остатка на геле Sephadex G-25 получены высокоочищен-ные эффекторы с антикоагулянтной активностью, по химической природе принадлежащие к пептидам /А.Е. Бушин и соавт., 2009/, ограничивающие плазменный (оценивались время рекальцификации, тром-бопластиновое время, тромбиновое время и время самосборки мономерного фибрина) и тромбоцитарный гемостаз in vitro и in vivo. Быяснено, что по механизму действия эффекторы отличаютеся от известного прямого антикоагулянта - гепарина.
Ограничение плазменного гемостаза преимущественно реализуется на уровне заключительной, III фазы свертывания - превращении фибриногена в фибрин под действием тромбина путем образования малоактивных комплексов эффекторов с мономерным фибрином и полимерами различной степени зрелости за счет электростатических взаимодействий; тромбо-цитарного - угнетением высвобождения внутренних факторов агрегации, провоцируемого АДФ - или адреналином (раствор Тоногена) /Б.Л. Кортусов и соавт., 2007/.
Полученные нами эффекторы обладают защитным действием при создании экспериментальной тромбопластинемии. Чтобы это доказать мы использовали экзогенную тромбопластинемию как модель, которая позволяла оценить эффективность экстракта в качестве средства, повышающего толерантность животных к воздействиям, вызывающим внутрисосудистое тромбообразование.
Показано, что внутривенное введение подопытным животным (белые беспородные крысы) тромбопластина (активность 22,8 с) в дозе 40 мг/кг массы тела на фоне предварительного введения изотонического раствора натрия хлорида летальность составила 63,3%. При этом основная часть животных гибла в течение 4-х часов. На фоне предварительного введения эффекторов в дозе 50мг/кг, после введения тромбопла-стина, летальность составила 30%, а при дозе 300мг/кг - только 13,3%. Причем гибель животных в обеих группах наблюдалась на протяжении 15 часов. Таким образом, превентивное внутривенное введение эффекторов лабораторным животным в дозе 50 и 300 мг/кг массы тела с последующей инъекцией тромбопластина снижает частоту гибели подопытных животным в 2,1 и 4,8 раза соответственно.
Установлено, что эффективная доза эффекторов ниже токсической в 15 раз и при повторных введениях он проявляет минимальные кумулятивные свойства.
Мы изучали влияние эффекторов не некоторые параметры жизнедеятельности организма лабораторных животных. Длительное (в течение 20 дней) введение эффекторов сапропеля в дозах 50 мг/кг внутривенно либо 300 мг/кг внутрибрюшинно один раз в день, не приводило к изменениям общего состояния подопытных животных, их внешнего вида, поведения, потребления воды и пищи, динамики роста массы тела (связанное с ростом животного).
Токсическое действие не обнаружили, исследуя динамику изменений красной и белой крови у этих животных. Не изменилось у них и содержание гемоглобина. Особенно существенно то, что не изменилось содержание тромбоцитов - клеток, активно участвующих в процессах свертывания крови. Это исключает возможность того, что гипокоагулемия, вызываемая экстрактом, является вторичной, связанной с повышенным потреблением факторов свертывания, так как известно, что тромбоциты при ускорении внутрисосу-дистого свертывания потребляются в числе первых и снижение их уровня является одним из признаков ДБС /З.С. Баркаган 1988/.
Не обнаружено какого-либо влияния экстракта на биоэлектрическую активность миокарда: все параметры ЭКГ оказались практически идентичными как у контрольных, так и у подопытных животных.
Длившееся в течение 20 дней введение подопытным крысам эффекторов в дозах 50 мг/кг внутривенно либо 300 мг/кг внутри-брюшинно один раз в день не изменило интенсивность диуреза после водно-солевой нагрузки и функциональное состояние почек и печени. Следовательно, в заведомо больших дозах исследуемые эффекторы даже при длительном введении не изменяет состояние важнейших органов и систем.
Разумеется, проведенными наблюдениями не исчерпывается весь объем токсикологических исследований, которые необходимо осуществить для рекомендации противо-свертывающего средства к доклиническим испытаниям. Однако тот факт, что дозы, превышающие эффективную в 5-10 раз (10 против 50 и 300 мг/кг), не вызвали изменения группы довольно чувствительных индикаторов интоксикации как то биоэлектрическая активность миокарда, состояние клеток крови, почек и печени, позволяет сделать предварительный вывод о невысокой токсичности экстракта и обосновывает интерес к дальнейшему исследованию в выбранному нами направлению.
Список литературы
1. Бушин А.Е. Пептидные ингибиторы плазменного и тромбоцитарного гемостаза из сапропеля. /А.Е. Бушин, Е.А. Чирятьев, О.А. Русакова, П.Я Шаповалов //Успехи современного естествознания. - 2008. - 2. - С. 80.
2. Кортусов В.Л. Эффекторы свертывания крови природного происхождения. //Автореф. канд. биол. наук. - Тюмень, 2007. - 30 с.
3. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. // М.: Мед. 1988. - 528 с.