Scientific journal
International Journal of Applied and fundamental research
ISSN 1996-3955
ИФ РИНЦ = 0,556
HETEROGENEOUS DISTRIBUTION OF CYTOTOXIC T-LYMPHOCYTES IN THE STROMA OF INVASIVE BREAST CARCINOMA: PROGNOSTIC SIGNIFICANCE
Рак молочной железы не перестает занимать лидирующие позиции среди онкологических заболеваний у женщин [4]. Те или иные формы прогрессии зачастую становятся причиной гибели. В настоящее время актуальным является поиск новых подходов к прогнозированию течения этого заболевания. Известно, что ключевым фактором метастатического потенциала опухоли является состояние его микроокружения. Kohrt et al. [2005] показали, что при раке молочной железы присутствие опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов в высоком CD4+/CD8+ и Th2/Th1 соотношении является плохим прогностическим показателем [6]. J. Galon et al. ввели такое понятие как Immunoscore, где в качестве прогностического признака используется определение соотношения CD3/CD8 в инвазивном крае и центре опухоли [5]. Дальнейшие исследования подтверждали показанное ранее, так, при масштабных исследованиях транскриптома опухоли было продемонстрировано, что благоприятным для исхода болезни является местный Th1-ответ, ведущий к цитотоксическому уничтожению клеток опухоли [7]. Однако в литературе встречаются и противоположные данные, возможно, в силу явления внутриопухолевой гетерогенности [2], одним из проявлений которой является морфологическая гетерогенность [1]. Ранее было показано, что наличие различных морфологических структур в опухоли молочной железы имеет разное прогностическое значение и связь с вариантами прогрессии [3]. В настоящей работе было изучено наличие и распределение цитотоксических Т-лимфоцитов в строме различных структур инвазивного компонента рака молочной железы, а также проанализирована связь с прогрессией опухоли (рецидивированием, лимфогенным и гематогенным метастазированием).
Материалы и методы исследования
В исследование были включены 54 больных с инвазивным раком молочной железы неспецифического типа в возрасте от 37 до 80 лет, средний возраст составил 54,9 ± 9,7 года. Пациенты были разделены на четыре группы: 1 – без каких-либо форм прогрессии (n = 16), 2 – с лимфогенным метастазированием (n = 9), 3 – с гематогенным метастазированием (n = 8), 4 – с наличием рецидива (n = 7). Предоперационного лечения больные не получали. Среди пациентов 59,5 % имели люминальный А тип, 14,3 % – люминальный В тип, 16,7 % – трижды негативный тип, 9,5 % – тип с гиперэкспрессией Her2neu. Всем больным проводилась операция в размере радикальной мастэктомии и секторальной резекции молочной железы. По соотношению разных молекулярно-генетических типов и вида проведенного хирургического лечения группы не различались. Образцы тканей фиксировались в 10 % нейтральном формалине. Материал обрабатывался по стандартной методике и заливался в парафин. Морфологическое исследование операционного материала осуществлялось по стандартной методике с использованием светового микроскопа «CarlZeissAxio Lab.A1». Гистологический тип рака устанавливался согласно рекомендациям ВОЗ (Женева, 2012). Наличие цитотоксических Т-лимфоцитов в строме опухоли оценивали по иммуногистохимическому окрашиванию клеток, формирующих микроокружения тубулярных, альвеолярных, солидных, трабекулярных структур и дискретно расположенных групп клеток (ГК), антителами против CD45, CD3, CD8. При исследовании применяли антитела фирмы «Dako» к CD 3 (клон UCHT1, рабочее разведение 1:100), к CD8 (клон C8/144B, рабочее разведение 1:100),фирмы «Biogenex» к CD45LCA (клон PD7/26/16&2B1, RTU, мышиные). Экспрессию СD 45, СD 3, СD 8 в клетках воспалительного инфильтрата оценивали полуколичественно (0 баллов – отсутствие; 1 балл – 1–5 клеток; 2 балла – 6–20 клеток; 3 балла – более 20 клеток) вблизи каждого варианта структур паренхиматозного компонента опухоли (не далее чем на 2 диаметра малого лимфоцита), а также в строме новообразования в отдалении от паренхиматозных структур. Отдаленные результаты оценивались через 5 лет. Статистическая обработка проводилась с использованием пакета программ «Statistica 6.0 for Windows». Проверка на соответствие нормальному закону распределения проводилась с использованием критерия Шапиро-Уилка. Для проверки гипотезы применялся критерий Краскала-Уолиса. Результаты считались достоверными при р < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Подсчитанное в соответствии с рекомендациями J. Galon et al. соотношение CD3/CD8 оказалось выше в группе пациенток с рецидивами рака молочной железы в сравнении со случаями без прогрессии болезни. Причем результат не зависел от того проводился ли подсчет количества соответствующих лимфоцитов в случайных полях зрения или в отдалении от опухолевых структур (соответственно: 0,911 ± 0,946 и 1,260 ± 0,240, р = 0,003; 0,940 ± 0,150 и 1,430 ± 0,730, р = 0,006). При анализе общего количества CD45LCA+ лейкоцитов и CD8+ лимфоцитов в воспалительном инфильтрате в зависимости от формы прогрессии были обнаружены достоверные различия. Показано, что наличие СD45LCA+ лейкоцитов и CD8+ лимфоцитов в инфильтрате вне зависимости от типа морфологических структур было достоверно выше в группе пациентов без рецидива (3,05 (2,55–3,95) и 2,80 (2,00–3,30) усл.ед., соответственно) по сравнению с группой пациентов, имеющих рецидив (2,12 (1,76–2,71) и 1,50 (1,20–2,22) усл.ед., соответственно) (р = 0,008 и р = 0,027, соответственно).
Далее, для того, чтобы определить вклад морфологической гетерогенности опухоли в выявленные различия, нами было определено содержание CD3+, CD45LCA+, CD8+ клеток и соотношение CD3/CD8 в воспалительном инфильтрате вблизи каждого из пяти типов структур инфильтративного компонента опухоли (тубулярных, альвеолярных, солидных, трабекулярных и дискретно расположенных групп клеток) в зависимости от формы прогрессии. Было обнаружено, что в группе больных без рецидива количество CD45LCA+ и CD8+ клеток в инфильтрате вокруг ГК и CD8+ клеток в инфильтрате в отдалении от опухолевых структур повышалось (3,00 (2,00–4,00); 3,00 (2,50–4,00) и 4,00 (3,00–4,00) усл.ед., соответственно) по сравнению с аналогичными показателями группы больных с наличием рецидивов (2,00 (1,00–2,00); 1,00 (1,00–2,00) и 2,00 (2,00–2,75) усл.ед., соответственно) (р = 0,011, р = 0,019 и р = 0,001, соответственно). С наличием гематогенных метастазов было ассоциировано достоверное снижение количества CD45+ и CD8+ лимфоцитов до 1,00 (1,00–2,00) и 1,00 (1,00–2,00) усл.ед., соответственно, вблизи дискретно расположенных опухолевых клеток (р = 0,018 и р = 0,017, соответственно). Соотношение CD3/CD8 вблизи разных структур не различалось в группах с наличием рецидивов или гематогенных метастазов в сравнении с контрольной группой (p > 0,05).
Лимфогенное метастазирование не было связано с инфильтрацией стромы CD3+, CD45LCA+ и CD8+ клетками (p > 0,05).
Заключение
Предлагаемое соотношение CD3/CD8 оказалось эффективным только для прогноза рецидивов. Причем такой прогноз не зависел от морфологической гетерогенности опухоли. Оказалось, что для оценки риска возникновения рецидивов и гематогенных метастазов опухоли достаточно определение CD45LCA+ или CD8+ клеток в микроокружении дискретно расположенных опухолевых клеток и CD8+ клеток в инфильтрате в отдалении от каких-либо опухолевых структур. Из всех типов структур инвазивного компонента опухоли, только характер иммуно-воспалительной инфильтрации вблизи дискретно расположенных опухолевых клеток оказался связанным с рецидивированием и гематогенным, но не с лимфогенным метастазированием. Выявленное снижение инфильтрации лейкоцитами и количества цитотоксических Т-лимфоцитов в строме опухоли у пациентов, имеющих рецидив или гематогенные метастазы, может свидетельствовать в пользу важной роли дискретных опухолевых клеток и иммуно-воспалительной реакции Th1-CD8 типа в развитии и торможении рецидивирования и метастазирования инвазивного рака молочной железы неспецифического типа.
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 15-34-20864 мол_а_вед.
Библиографическая ссылка
Таширева Л.А., Завьялова М.В., Завьялова М.В., Савельева О.Е., Савельева О.Е., Вторушин С.В., Вторушин С.В., Кайгородова Е.В., Кайгородова Е.В., Денисов Е.В., Денисов Е.В., Слонимская Е.М., Слонимская Е.М., Перельмутер В.М., Перельмутер В.М. ГЕТЕРОГЕННОСТЬ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ Т-ЛИМФОЦИТОВ В СТРОМЕ ИНВАЗИВНОЙ КАРЦИНОМЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ: ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2015. № 7-1. С. 73-75;URL: https://applied-research.ru/en/article/view?id=6964 (дата обращения: 03.07.2026).