Инфестация собак иксодовыми клещами влечет за собой возможность заражения бабезиозом, нередко с летальном исходом. Гибель собак сопровождается экономическими потерями. В случае смерти собаки-компаньона хозяин помимо экономического ущерба испытывает психоэмоциональный стресс.
В настоящее время существует большой выбор инсектоакарицидных средств, выпускаемых в форме ошейников, капель на холку, аэрозолей, шампуней и др. Они представляют особые объекты исследований в ветеринарной медицине, так как негативные эффекты их действия на организм животных являются недостаточно изученными.
Цель исследования – установить характер изменения морфологических и биохимических показателей крови у крыс при обработке препаратами на основе фипронила и перметрина в форме капель на холку с последующей коррекцией Тималином®.
Материалы и методы исследования
Экспериментальные исследования выполнены в течение 2014 года на базе кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина.
Исследование было проведено на 25 беспородных белых крысах с массой тела 250 – 300 г, содержащихся в стандартных условиях вивария. По принципу аналогов были сформированы 5 групп животных: 1 – интактные животные (контроль); 2 – животные, подвергавшиеся воздействию фипронила в составе инсектоакарицидных капель Дана Ультра® для собак (ООО НПО «АПИ-САН», М.О., Балашихинский р-н., Полтевское ш.); 3 – животные, подвергавшиеся воздействию фипронила с последующей фармакокоррекцией Тималином® (ООО «Самсон-Мед», Санкт-Петербург, Московское шоссе 13); 4 – животные, подвергавшиеся воздействию перметрина в составе инсектоакарицидных капель Деликс® для собак (ЗАО «Топ-Вет», СПб., Железнодорожный проспект); 5 – животные, подвергавшиеся воздействию перметрина с последующей фармакокоррекцией Тималином® (ООО «Самсон-Мед», Санкт-Петербург, Московское шоссе 13).
Согласно инструкции по применению в составе инсектоакарицидного препарата Дана Ультра® для собак содержатся фипронил 50 мг/мл и вспомогательные вещества: спирт изопропиловый – 300 мг/мл, диметилформамид – 100 мг/мл, кислота лимонная – 1 мг/мл и полиэтиленгликоль до 1 мл. Вспомогательные вещества улучшают проникновение фипронила к местам локализации паразитов и снижают воспалительные процессы в коже. Препарат Дана Ультра® для собак эффективен в течение 4–6 недель. С целью профилактики обработку животных необходимо проводить не чаще, чем 1 раз в месяц.
В составе инсектоакарицидного препарата Деликс® для собак содержится 5 % перметрина. С целью профилактики энтомозов препарат используют не чаще, чем 1 раз в месяц. Информация о вспомогательных компонентах в составе препарата отсутствует.
Тималин®, согласно инструкции, содержит полипептиды тимуса – 10 мг и вспомогательное вещество глицин – 20 мг в 1 флаконе. Регулирует количество и соотношение Т- и В-лимфоцитов, ответственных за формирование клеточных и тканевых защитных сил организма, и их субпопуляций, стимулирует реакции клеточного иммунитета, усиливает фагоцитоз, стимулирует процессы регенерации и кроветворения в случае их угнетения, а также улучшает процессы клеточного метаболизма.
Инсектоакарицидные капли наносили на кожу в области холки методом spot-on. При этом для крыс 2-й и 3-й групп доза фипронила составила 37,5 мг/кг в составе инсектоакарицидных капель Дана Ультра® для собак, для крыс 4-й и 5-й групп доза перметрина – 16,25 мг/кг в составе инсектоакарицидных капель Деликс® для собак. Через неделю после обработки препаратами Дана Ультра® и Деликс® крысам 3-й и 5-й групп вводили Тималин® внутримышечно в дозе 1,5 мг/кг 1 раз в день в течение 7 дней. Животным контрольной группы в области холки наносили 0,1 мл растительного масла. По истечении 28 суток осуществляли забор крови.
Исследование проб крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе для ветеринарии BC–2800Vet оригинального производства Mindray. Статистическую обработку результатов исследования проводили в программе STATISTICA6.1rus. Достоверность различий оценивали по непараметрическому критерию Манна–Уитни для независимых выборок. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
В течение эксперимента проводили визуальное наблюдение за состоянием животных. Клинических признаков интоксикации и изменения пищевого поведения крыс не отмечали. Резкого снижения или повышения массы тела по сравнению с контрольными животными не установлено. Результаты исследования крови отражены в табл. 1 и 2.
После однократной обработки крыс инсектоакарицидными каплями Дана Ультра® через четыре недели у животных опытной группы было установлено статистически значимое увеличение количества лейкоцитов на 74,5 %. При этом отмечено повышение абсолютного содержания нейтрофилов на 76 %, лимфоцитов – на 76,6 %, моноцитов – на 60 % и эозинофилов – на 33,3 %. В процентном отношении доля моноцитов увеличилась на 20 %, эозинофилов – на 52,4 %. После однократной обработки инсектоакарицидными каплями Деликс® через тот же срок у крыс опытной группы было отмечено статистически значимое увеличение на 63,5 % количества эозинофилов, а также повышение их процентного содержания. В результате семидневной фармакокоррекции Тималином® в группе крыс, подвергавшихся воздействию Дана Ультра®, отмечается снижение количества лейкоцитов на 52,6 %, в том числе нейтрофилов – на 31,8 %, лимфоцитов – на 57,4 %, моноцитов – на 60 % и эозинофилов – на 77,7 %. В процентном отношении доля моноцитов снизилась на 11,9 %, эозинофилов – на 57,1 %. В группе лабораторных животных, обработанных препаратом Деликс® и Тималином®, также отмечено снижение количества эозинофилов с тенденцией к достижению контрольного уровня. При этом в лейкограмме крыс, обработанных препаратом Дана Ультра®, после введения Тималина® увеличилась доля нейтрофилов на 37,2 %, у животных, обработанных препаратом Деликс® и Тималином®, – на 15,8 %. Фармакокоррекция Тималином® на фоне действия препарата Дана Ультра® у крыс опытной группы вызывает повышение количества эритроцитов на 68,1 %, уровня гемоглобина – на 80 %, гематокрита – на 77,1 %. Резкое повышение данных показателей может свидетельствовать о возможном синергизме между препаратами, так как аналогичные, но менее выраженные изменения у крыс отмечаются при введении Тималина® после обработки препаратом Деликс®. Так, например, незначительное увеличение количества эритроцитов сопровождается увеличением их среднего объема на 17,2 %, уровня гемоглобина – на 24,5 %, среднего содержания гемоглобина в эритроците – на 11,6 %, гематокрита – на 24,5 %, что подтверждает стимулирующий эффект препаратов тимуса на эритропоэз [2] [3].
После однократного применения препарата Деликс® через четыре недели установлено статистически значимое увеличение количества тромбоцитов на 23,5 %, снижение среднего объема тромбоцитов – на 11,9 % и, как следствие, снижение тромбокрита на 25,6 %. При фармакокоррекции Тималином® происходит снижение уровня тромбоцитов на 14,5 % и тромбокрита – на 24,1 %. При этом средний объем тромбоцитов увеличился на 19,2 % у крыс, обработанных препаратом Деликс®, и на 9,5 % – у животных, обработанных Дана Ультра®, что свидетельствует о появлении в периферической крови молодых форм тромбоцитов и стимуляции тромбоцитопоэза [1].
Таблица 1
Морфологический состав крови крыс при контакте с фипронилом (ДанаУльтра® для собак) в форме капель на холку с последующей фармакокоррекцией Тималином®, Ме (Р25;Р75), n = 5
|
Показатели |
Контроль |
Дана Ультра |
р |
Дана Ультра + Тималин |
р |
|
Лейкоциты, ×109/л |
11 (9; 12) |
19,2 (16,2; 22,3) |
0,016 |
9,1 (8,6;10,9) |
0,009 |
|
Нейтрофилы, ×109/л |
2,5 (2,4; 2,5) |
4,4 (4,2; 4,6) |
0,008 |
3 (2,5;3,2) |
0,036 |
|
Лимфоциты, ×109/л |
7,7 (6,8; 8,7) |
13,6 (10,7; 16,5) |
0,047 |
5,8 (5,4;6,8) |
0,009 |
|
Моноциты, ×109/л |
0,3 (0,3; 0,4) |
0,75 (0,67; 0,85) |
0,008 |
0,3 (0,3;0,3) |
0,008 |
|
Эозинофилы, ×109/л |
0,19 (0,1;0,2) |
0,45 (0,4;0,45) |
0,008 |
0,1 (0,1;0,2) |
0,007 |
|
Базофилы, ×109/л |
0,3 (0,2;0,3) |
0,2 (0,2;0,2) |
0,324 |
0,2 (0,2;0,3) |
1,0 |
|
Нейтрофилы, % |
25,6 (21,1;27,) |
26,3 (21,2;31,3) |
0,916 |
36,1 (35,5;37;3) |
0,047 |
|
Лимфоциты, % |
71,3 (70;71,4) |
67,7 (61,5;72,8) |
0,601 |
60,5 (58,5;60,5) |
0,171 |
|
Моноциты, % |
3,5 (3,4;3,6) |
4,2 (3,5;3,9) |
0,011 |
3,7 (3,3;3,9) |
0,091 |
|
Эозинофилы, % |
1 (1;1,8) |
2,1 (2;2,8) |
0,019 |
0,9 (0,9;1,3) |
0,008 |
|
Базофилы, % |
0 (0;0,1) |
0 (0;0) |
0,317 |
0 (0;0) |
1,0 |
|
Эритроциты, ×1012/л |
7,1 (6,82;7,3) |
7,4 (7,34;7,46) |
0,174 |
12,44 (12,3;12,63) |
0,009 |
|
Гемоглобин, г/л |
130 (127;131) |
138 (136;140) |
0,021 |
249 (230;251) |
0,009 |
|
Средний объем эритроцита, мкм3 |
53,9 (51,7;53,4) |
57,9 (57,6;58,1) |
0,250 |
59,5 (58,9; 60,6) |
0,117 |
|
Средний показатель анизоцитоза, % |
13,8 (13,4;14,) |
14,05 (13,8;14,2) |
0,834 |
16,5 (16,3;16,6) |
0,009 |
|
Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг |
17,5 (17,4;18,) |
18,6 (18,5;18,7) |
0,117 |
19,4 (19,2; 19,8) |
0,093 |
|
Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л |
321 (318;322) |
322 (321;322) |
0,453 |
327 ( 326;328) |
0,008 |
|
Гематокрит, % |
40,9 (40,2;41,) |
42,8 (42,2;43,3) |
0,009 |
75,8 (73,1;76,5) |
0,009 |
|
Тромбоциты, 109/л |
966 (844;106) |
823 (801;844) |
0,208 |
390 (352; 465) |
0,117 |
|
Средний объем тромбоцитов, мкм3 |
5,9 (5,9;5,9) |
6,3 (6,3;6,3) |
0,004 |
6,9 (6,9;7,05) |
0,005 |
|
Тромбокрит, % |
0,569 (0,505;0,630) |
0,518 (0,504;0,531) |
0,347 |
0,306 (266; 0,446) |
0,117 |
Примечание. Достоверность различий определяли между группами: контроль и ДанаУльтра®, ДанаУльтра® и ДанаУльтра® +Тималин * – р < 0,05; ** – р ≤ 0,01.
Таблица 2
Морфологический состав крови крыс при контакте с перметрином (Деликс® для собак) в форме капель на холку с последующей фармакокоррекцией Тималином®, Ме (Р25;Р75), n = 5
|
Гематологичекие показатели |
Контроль |
Деликс (перметрин 5 %) |
р |
Деликс + Тималин |
р |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
Лейкоциты, ×109/л |
11 (9; 12) |
13,8 (11,5; 14,7) |
0,347 |
12,2 (10,7;12,9) |
0,347 |
|
Нейтрофилы, ×109/л |
2,5 (2,4; 2,5) |
3,3 (2,7; 3,9) |
0,114 |
3,5 (3;3,7) |
0,916 |
|
Окончание табл. 2 |
|||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
Лимфоциты, ×109/л |
7,7 (6,8; 8,7) |
8,8 (7,7; 9,8) |
0,529 |
7,6 (7;8) |
0,174 |
|
Моноциты, ×109/л |
0,3 (0,3; 0,4) |
0,5 (0,4;0,6) |
0,080 |
0,4 (0,3;0,4) |
0,126 |
|
Эозинофилы, ×109/л |
0,19 (0,1;0,2) |
0,52 (0,27;0,6) |
0,035 |
0,2 (0,2;0,3) |
0,171 |
|
Базофилы, ×109/л |
0,3 (0,2;0,3) |
0,2 (0,2;0,3) |
0,746 |
0,1 (0,1;0,2) |
0,118 |
|
Нейтрофилы, % |
25,6 (21,1;27,) |
25,9 (24,5;27,3) |
0,916 |
30 (28,8;30,4) |
0,016 |
|
Лимфоциты, % |
71,3 (70;71,4) |
67 (65,5;67,3) |
0,174 |
64 (64;65,7) |
0,4 |
|
Моноциты, % |
3,5 (3,4;3,6) |
3,5 (3,2;3,8) |
0,834 |
3,5 (3,2;3,6) |
0,752 |
|
Эозинофилы, % |
1 (1;1,8) |
3,8 (2,1;4,9) |
0,007 |
2,1 (2;2,3) |
0,208 |
|
Базофилы, % |
0 (0;0,1) |
0 (0;0,1) |
1,0 |
0 (0;0) |
1,0 |
|
Эритроциты, ×1012/л |
7,1 (6,82;7,3) |
7,85 (7,29;8,4) |
0,464 |
8,27 (8,18;8,84) |
0,250 |
|
Гемоглобин, г/л |
130 (127;131) |
135 (125;145) |
0,464 |
164 (162;169) |
0,009 |
|
Средний объем эритроцита, мкм3 |
53,9 (51,7;53,4) |
52,3 (51,6;52,9) |
0,054 |
61,3 (59,5;61,4) |
0,009 |
|
Средний показатель анизоцитоза, % |
13,8 (13,4;14,) |
15,8 (15,7;15,9) |
0,116 |
16,3 (16,2;16,7) |
0,008 |
|
Среднее содержание гемоглобина в эритроците, пг |
17,5 (17,4;18,) |
17,2 (17,2;17,2) |
0,133 |
19,2 (19,1;19,8) |
0,008 |
|
Средняя концентрация гемоглобина в эритроците, г/л |
321 (318;322) |
330 (325;334) |
0,059 |
323 (322;323) |
0,114 |
|
Гематокрит, % |
40,9 (40,2;41,) |
40,8 (38,4;43,2) |
0,916 |
50,8 (50,1:52,2) |
0,009 |
|
Тромбоциты, 109/л |
966 (844;106) |
1291 (1256;1337) |
0,009 |
1127 (1084;1238) |
0,075 |
|
Средний объем тромбоцитов, мкм3 |
5,9 (5,9;5,9) |
5,2 (5,15;5,2) |
0,008 |
6,2 (6,2;6,3) |
0,008 |
|
Тромбокрит, % |
0,569 (0,505;0,630) |
0,423 (0,416;0,465) |
0,047 |
0,558 (0,505;585) |
0,047 |
Примечание. Достоверность различий определяли между группами: контроль и Деликс®, Деликс® и Деликс® +Тималин * – р < 0,05; ** – р ≤ 0,01.
Заключение
Инсектоакарицидные капли Дана Ультра® и Деликс® являются относительно безопасными, экономически доступными и эффективными средствами профилактики инфестации животных эктопаразитами, но не исключается их резорбция и негативное влияние на картину крови.
Однократная обработка лабораторных крыс инсектоакарицидными препаратами Дана Ультра® и Деликс® в условиях эксперимента не вызывает клинических признаков интоксикации, но сопровождается изменением лейко-, эритро- и тромбоцитопоэза. Введение Тималина® в дозе 1,5 мг/кг в течение 7 дней после обработки нивелирует данные изменения.