Введение в клиническую практику инновационных методов лечения рака шейки матки несколько улучшило ситуацию для больных, тем не менее, общий ответ на такое лечение остается умеренным. При распространенном раке шейки матки (РШМ) каждая вторая больная погибает в течение первых двух лет. Основными причинами неудач лечения являются высокая частота рецидивов и метастазов, относительная резистентность плоскоклеточного гинекологического рака к большинству цитостатиков и их побочные эффекты. Рассматриваются альтернативные подходы к прерыванию карцерогенеза, которые могут быть синергетическими со стандартными методами лечения. На передовом рубеже исследований – таргетные молекулярные методы лечения, которые, как ожидается, в противовес традиционным химиопрепаратам, повысят эффективность лечения, не ухудшая профиля токсичности [8].
В этой связи весьма актуален на наш взгляд поиск объективных критериев оценки эффективности и прогноза противоопухолевого лечения.
В литературе активно обсуждается роль оксида азота (NO) при опухолевом росте. Показана возможность как проопухолевого, так и противоопухолевого его действия [10]. В настоящее время несомненно значение оксида азота (NO) как универсального регулятора клеточного и тканевого метаболизма при опухолевом росте. Система оксида азота реализует свое действие не только через NO-радикал, но и через молекулы NO-производных [2]. Изучена взаимосвязь между продукцией гамма-интерферона Т-клетками и количеством оксида азота, вырабатываемого различными видами клеток, в том числе и опухолевыми. Макрофаги, стимулированные гамма-интерфероном, синтезируют NO, что обусловливает их цитотоксическую активность в отношении опухолевых клеток [5]. В то же время показана способность клеток опухоли Эрлиха отвечать на гамма-интерферон значительным повышением выработки оксида азота. При этом, несмотря на высокий уровень интерферона и оксида азота, опухоль Эрлиха прогрессивно развивается, приводя к гибели экспериментальных животных [1]. Включение интерферона в схему лечения больных лимфомой Ходжкина способствует снижению степени выраженности эндогенной интоксикации, препятствует накоплению пероксинитрита, продукта превращения оксида азота, и снижению скорости свободнорадикальных процессов [7].
Цель исследования заключалась в изучении значимости ряда биохимических показателей в прогнозе и оценке эффективности применения комбинации аутогемохимиотерапии и аутоиммунотерапии с использованием рекомбинантного интерлейкина-2 и интерферона-альфа (АГХИТ) у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки.
Исследовали интенсивность Н2O2-люминолзависимой хемилюминесценции, уровень пероксинитрита (ONOO−) и производных оксида азота: нитрозогемоглобина, нитрозоглутатиона и нитротирозина, определяемых спектрометрически, оксидазную активность церулоплазмина, содержание веществ средней молекулярной массы – МСМ254 и МСМ280, уровень общей и эффективной концентрации альбумина – ОКА и ЭКА, резервную связывающую способность альбумина по отношению ЭКА/ОКА∙100 %. Расчетным путем определяли коэффициент интоксикации, отражающий баланс между накоплением и связыванием токсических лигандов по формуле: КИМСМ/ЭКА = (МСМ254/ЭКА)∙1000.
Исследования проведены у 27 больных с рецидивной и генерализованной формой РШМ до и после АГХИТ. В зависимости от степени регрессионного эффекта проводимого противоопухолевого воздействия больные были распределены на две подгруппы: 1-я – с регрессией опухоли на 50–80 % (55,6 % больных) и 2-я – со стабилизацией процесса (44,4 %). Контрольную группу составили 26 женщин аналогичного возраста без онкологической патологии. Результаты представлены в табл. 1 и 2.
До лечения у больных РШМ отмечалось увеличение интенсивности хемилюминесценции в 2,95 раз и практически двукратное повышение уровня пероксинитрита в сравнении с контрольной группой (табл. 1). Уровень нитрозил-гемоглобина в сравнении со значениями у здоровых повышен менее значительно. Обращает внимание снижение связывающей способности альбумина и увеличение концентрации молекул средней массы, приводящее к нарастанию коэффициента интоксикации в 2 раза. Отмеченное на этом фоне у данного контингента больных повышение содержания церулоплазмина – основного белкового антиоксиданта плазмы крови, в 1,7 раза по сравнению с контрольными значениями (1,692 ± 0,208 мкМ/л и 0,995 ± 0,054 мкМ/л соответственно), носит, вероятно, защитный адаптивный характер (табл. 1). Существенный вклад в выявленные нами метаболические нарушения у больных с рецидивами и метастазами РШМ вносит, по-видимому, интенсификация свободнорадикальных процессов. Известно, что окислительная модификация белковых компонентов мембраны вследствие интенсификации свободнорадикальных процессов сопровождается изменениями организации мембраны, в том числе и нарушением подвижности мембранных полипептидов, повышенной чувствительностью белков к протеолизу и конформационным изменениям [4].
По данным литературы активация свободнорадикального окисления при неопластическом процессе приводит к накоплению в организме больных эндогенных липопероксидов, продуктов деградации белковых молекул, что вызывает блокирование или аллостерические изменения центров связывания на молекуле альбумина, снижение его комплексообразующей способности и транспортной функции [9].
Согласно полученным нами данным, у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки наблюдается выраженное изменение показателей, отражающих степень эндогенной интоксикации: увеличено содержание молекул средней массы на 27,5 % (МСМ254) и на 53,7 % (МСМ280), эффективная концентрация альбумина снижена на 33,3 %, а его связывающая способность – на 27,8 % (табл. 2). Снижение ЭКА у обследуемой категории больных привело к почти двукратному увеличению коэффициента интоксикации, который составил 12,5 ± 1,2 (в контроле – 6,94 ± 0,312), что свидетельствует о глубоком дисбалансе между накоплением и связыванием токсических лигандов.
Анализ непосредственных результатов АГХИТ больных РШМ был сопоставлен с результатами биохимических исследований. У больных с эффектом от лечения (регрессия) отмечалось снижение уровня пероксинитрита в 2 раза, которое достигло значений в группе без онкопатологии, на фоне заметного повышения антиоксидантной активности церулоплазмина (табл. 1). Наблюдаемое при этом резкое увеличение интенсивности хемилюминесценции (на 51,7 % от исходных значений) и нарастание концентрации среднемолекулярных продуктов, является, по-видимому, отражением интенсивного распада опухолевого субстрата. Напротив, больные РШМ со стабилизацией опухолевого процесса характеризовались снижением интенсивности хемилюминесценции (на 54,0 % от исходных значений), что ассоциируется с менее интенсивным распадом опухолевого субстрата.
Таблица 1
Интенсивность хемилюминесценции, содержание NO- производных и активность церулоплазмина у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки до и после АГХИТ
|
Исследуемые показатели |
Группы |
||||
|
Контрольная |
РШМ до АГХИТ |
РШМ после АГХИТ (регрессия) |
РШМ после АГХИТ (стабилизация) |
||
|
Интенсивность хемилюминесценции, имп. за 6 с |
3310 ± 219 |
9787 ± 2144,0 p < 0,001 |
14846 ± 2333,2 p < 0,001 р1 < 0,001 |
4472 ± 202,5 p < 0,05 p1 < 0,001 p2 < 0,001 |
|
|
NO-гемоглобин |
418 нм |
9,43 ± 0,94 |
12,54 ± 1,19 0,05 < p < 0,1 |
11,56 ± 1,7 р > 0,1 р1 > 0,1 |
14,7 ± 1,4 p < 0,01 р1 > 0,1 р2 > 0,1 |
|
545 нм |
21,93 ± 1,28 |
30,46 ± 8,28 р < 0,05 |
29,78 ± 2,91 p < 0,02 р1 > 0,1 |
24,57 ± 1,9 р > 0,1 р1 < 0,05 р2 < 0,02 |
|
|
Пероксинитрит |
85,51 ± 5,31 |
156,44 ± 25,0 p < 0,001 |
80,62 ± 2,87 р > 0,1 p1 < 0,001 |
141,5 ± 7,62 p < 0,001 р1 > 0,1 р2 < 0,001 |
|
|
NO-глутатион |
27,22 ± 1,43 |
24,08 ± 2,12 р < 0,02 |
27,01 ± 1,5 р > 0,1 р1 < 0,02 |
25,86 ± 1,71 р > 0,1 р1 > 0,1 р2 > 0,1 |
|
|
NO-тирозин |
5,06 ± 0,49 |
7,10 ± 2,20 р > 0,1 |
2,82 ± 0,48 p < 0,01 р1 < 0,001 |
2,19 ± 0,18 p < 0,01 p1 < 0,001 р2 > 0,1 |
|
|
Активность церулоплазмина, мкМ/л |
0,995 ± 0,054 |
1,692 ± 0,208 p < 0,01 |
2,158 ± 0,189 p < 0,001 р1 < 0,01 |
1,256 ± 0,194 p > 0,1 р1 < 0,05 p2 < 0,01 |
|
Примечание. р – значимость различий по сравнению с контрольной группой; р1 – значимость различий по сравнению со значениями до АГХИТ; р2 – значимость различий по сравнению со значениями в группе больных РШМ с регрессией опухоли.
Обращает внимание, что антиоксидантная активность церулоплазмина у больных с высокой эффективностью АГХИТ превышала таковую у больных со стабилизацией процесса на 71,8 % и была достоверно выше значений у здоровых, что, по-видимому, препятствовало избыточному образованию высокотоксичных продуктов свободно- радикальных реакций. В частности, уровень пероксинитрита, образующегося в результате взаимодействия оксида азота с супероксидным анион-радикалом, у больных с выраженной регрессией опухоли был на 75,5 % ниже, чем у больных со стабилизацией процесса (табл. 1). Как следствие, при эффективном лечении коэффициент интоксикации был почти вдвое ниже (на 76,6 %) по сравнению с больными со стабилизацией процесса (10,21 ± 0,4 и 18,03 ± 2,27 соответственно) за счет более высокой эффективной концентрации альбумина и его связывающей способности (выше на 71,1 % и 79,7 %, чем у больных со стабилизацией) (табл. 2). Отсутствие положительной динамики сочеталось с повышенным уровнем пероксинитрита, снижением активности церулоплазмина, резким увеличением коэффициента интоксикации, почти вдвое превышающим значения у больных с эффектом от лечения за счет снижения связывающей способности альбумина. Можно предположить, что указанные нарушения – следствие дальнейшей активации свободнорадикальных процессов.
Для изучения причинно-следственных отношений между исследуемыми показателями крови и состоянием больных, а также для определения наиболее значимых из них в оценке эффективности АГХИТ и прогнозе течения заболевания был проведен дисперсионный анализ степени влияния ряда факторов на результативный признак [3]. Взаимосвязь выраженности регрессионного эффекта от проводимого нами противоопухолевого воздействия с изменением значений изученных показателей подтверждена результатами дисперсионного анализа [6]. Связывающую способность альбумина, содержание пероксинитрита, содержание NO-тирозина, содержание NO-гемоглобина можно рекомендовать к применению в практической медицине при прогнозировании течения заболевания, а так же оценке эффективности противоопухолевого лечения.
Таблица 2
Показатели эндогенной интоксикации у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки до и после АГХИТ
|
Исследуемые показатели |
Группы |
|||
|
контрольная |
РШМ до АГХИТ |
РШМ после АГХИТ (регрессия) |
РШМ после АГХИТ (стабилизация) |
|
|
ОКА, г/л |
45,33 ± 0,77 |
42,1 ± 1,5 0,05 < p < 0,1 |
46,18 ± 1,86 р > 0,1 р1 > 0,1 |
47,54 ± 1,32 р > 0,1 p1 < 0,05 р2 > 0,1 |
|
ЭКА, г/л |
43,01 ± 1,1 |
28,7 ± 1,6 p < 0,001 |
33,66 ± 1,76 p < 0,001 p1 < 0,05 |
19,67 ± 2,27 p < 0,001 p1 < 0,01 p2 < 0,01 |
|
ССА, % |
94,8 ± 2,01 |
68,5 ± 3,2 p < 0,001 |
74,0 ± 3,43 p < 0,001 р1 < 0,1 |
41,19 ± 4,36 p < 0,001 p1 < 0,001 p2 < 0,001 |
|
МСМ254, усл. ед. экс. |
0,273 ± 0,005 |
0,348 ± 0,027 p < 0,01 |
0,339 ± 0,01 p < 0,001 р1 > 0,1 |
0,327 ± 0,014 p < 0,001 р1 > 0,1 р2 > 0,1 |
|
МСМ280, усл. ед. экс. |
0,203 ± 0,005 |
0,312 ± 0,032 p < 0,001 |
0,265 ± 0,01 p < 0,001 р1 < 0,1 |
0,258 ± 0,013 p < 0,001 р1 > 0,1 р2 > 0,1 |
|
КИ (МСМ254/ЭКА∙1000) |
6,94 ± 0,312 |
12,5 ± 1,2 p < 0,001 |
10,21 ± 0,41 p < 0,001 р1 < 0,1 |
18,03 ± 2,27 p < 0,001 p1 < 0,05 p2 < 0,01 |
Примечание. р – значимость различий по сравнению с контрольной группой; р1 – значимость различий по сравнению со значениями до АГХИТ; р2 – значимость различий по сравнению со значениями в группе больных РШМ с регрессией опухоли.
Заключение
Таким образом, ряд биохимических показателей определяет чувствительность рецидивного и метастатического рака шейки матки к многокурсовой аутогемохимиоиммунотерапии. Фоновые значения пероксинитрита и нитрозилгемоглобина можно использовать в качестве высокоинформативных предикторов чувствительности рака шейки матки к аутогемохимиоиммунотерапии. При изначально резко сниженном уровне пероксинитрита и увеличенном содержании нитрозилгемоглобина можно ожидать отсутствие или слабо выраженный эффект и, возможно, пересмотреть схему лечения. Напротив, изначально увеличенный или нормальный уровень пероксинитрита и отсутствие увеличения нитрозилгемоглобина позволяет прогнозировать выраженную регрессию опухоли после проведения противоопухолевой терапии. При этом у больных в процессе высоко эффективного лечения имеет место снижение уровня пероксинитрита, определенную роль в этом может играть умеренное увеличение содержания нитрозилгемоглобина, тогда как в процессе мало эффективной АГХИТ наблюдается увеличение агрессивного свободнорадикального соединения – пероксинитрита. Отсутствие эффекта лечения отмечено при фоновом трехкратном снижении содержания пероксинитрита и высоком (в 3 раза выше нормы) уровне нитрозилгемоглобина.