Известные традиционные способы цитологической диагностики рака мочевого пузыря (РМП) по осадку мочи или по смыву мочевого пузыря имеют ряд недостатков: загрязнение фона исследуемого препарата воспалительными элементами, кристаллами мочевых солей, слизью, эритроцитами, бактериями; плохая сохранность и повреждение клеток; клеточный материал на предметном стекле располагается неравномерно; имеются участки многослойности, что затрудняет невозможность быстроту обзора препарата. Диагностическая ценность традиционного цитологического исследования в диагностике РМП невелика и составляет не более 40–54 % [2; 4; 5; 7].
Цель исследования – повышение достоверности морфологической диагностики РМП и его рецидивов.
Материалы и методы исследования
За период 2011–2013 гг. в исследование было включено 323 человека, из них 150 пациентов с подозрением на РМП, проходивших диагностическое обследование в ГБУЗ «Онкологический диспансер № 3» (г. Новороссийск), и 173 больных РМП после проведенного лечения (комбинированного или комплексного). Этим больным были выполнены различные варианты органосохраняющих операций.
Всем обследуемым выполняли цистоскопию гибким фиброцистоскопом «KarlStorz». После окончания которой получали спиртовой смыв по методу В.Т. Кузьмина (1963), делили его на две порции, одну из которых исследовали традиционным цитологическим методом, другую – методом жидкостной цитологии. При выполнении жидкостной цитологии полученный смыв центрифугировали на центрифуге «Эликон ЦЛМН-Р10-01» при скорости 1500 об/мин в течение 10 мин. К полученному осадку в объеме 100–400 мкл добавляли питательную среду 199 в объеме 4 мл для получения клеточной суспензии. Клеточную суспензию центрифугировали в «CytoFuge 2» при скорости 1000 об/мин в течение 8 мин. Полученные монослойные tospin-препараты высушивали на воздухе. Фиксацию цитологического препарата проводили фиксатором Май-Грюнвальда. Окраску препарата выполняли по методу Романовского-Гимза.
Для оценки эффективности метода жидкостной цитологии проводили сопоставление результатов исследуемого и традиционного метода цитологического исследования.
Кроме того была проведена экспериментальная отработка методики получения клеточных блоков из смывов мочевого пузыря (12 больных раком мочевого пузыря и 9 у больных рецидивом заболевания) и получения гистологических препаратов для морфологической диагностики первичного РМП и его местных рецидивов. Все обследуемые имели верифицированный морфологический (цитологический и/или гистологический) диагноз.
Клеточные блоки для гистологического исследования получали путем центрифугирования эксудата брюшной полости, затем сливали надосадочную жидкость и, используя метод накопления, получали клеточный осадок не менее 0,3 см3 в центрифужной пробирке. К клеточному осадку в пробирку добавляли раствор ренампластина и к образовавшемуся сгустку добавляли 10 % нейтральный забуференный раствор формалина. Затем полученный фибрин, содержащий клеточный осадок, переносили в гистологический мешочек и помещали его в кассету для гистологической проводки, последовательно обрабатывали его в растворах дегидротантов и в промежуточных смесях. Полученный клеточный блок помещали в парафин, затем производили нарезку гистологического блока санным микротомом, срезы переносили на предметное стекло и производили окраску гистологического препарата гематоксилин-эозином с последующей дегидратацией и депарафинизацией. Полученный гистологический препарат покрывали клеем и покровным стеклом, который использовали для гистологического исследования.
Результаты исследования и их обсуждение
В результате проведенного исследования обнаружена существенная разница в диагностике РМП и его рецидивов после проведенного лечения среди сравниваемых групп (таблица).
Сравнительная оценка эффективности цитологических методов
|
Исследуемая группа |
Количество исследуемых |
Метод жидкостной цитологии N ( %) |
Традиционное цитологическое исследованиеN ( %) |
Р |
|
Подозрение на РМП |
150 |
118 (76,6) |
89 (59,3) |
р < 0,05 |
|
Диспансерные больные РМП |
173 |
70 (40,4) |
54 (31,2) |
р < 0,05 |
Из 150 обследуемых первой групп традиционным цитологическим методом РМП диагностирован в 89 (59,3 %) случаях, а методом жидкостной цитологии – в 118 (76,9 %). Выявляемость РМП при использовании метода жидкостной цитологии оказалась больше на 17,3 %, чем при традиционном цитологическом исследовании (р < 0,05).
Во второй группе из 173 больных, находящихся на диспансерном наблюдении после проведенного лечения по поводу РМП, рецидив заболевания традиционным методом диагностирован в 54 (31,2 %) случаев, а при использовании метода жидкостной цитологии в 70 (40,4 %). В этой группе диагностическая ценность жидкостной цитологии на 2,9 % выше (р < 0,05), чем при обычном цитологическом методе.
В результате применения метода жидкостной цитологии снизилось количество неудовлетворительных микроскопических препаратов на 24,6 %. Диагностическая ценность метода жидкостной цитологии в диагностике РМП и его рецидивов в целом выше в 1,3 раза.
При проведении экспериментальной отработки методики получения клеточных блоков из смывов мочевого пузыря для изготовления гистологических препаратов у 12 больных РМП и 9 у больных с рецидивом заболевания. Во всех случаях был диагностирован переходно-клеточный РМП или его рецидивы.
Выводы
Таким образом, жидкостная цитология с использованием питательной среды 199, в отличие от традиционного цитологического исследования осадка мочи или смыва мочевого пузыря, значительно повышает чувствительность цитологического метода исследования за счет получения монослойных tospin-препаратов. Tospin-препараты характеризуются равномерным, тонкослойным (монослойным) распределением клеточного материала на небольшом участке предметного стекла, хорошей визуализацией деталей ядра и цитоплазмы, значительным снижением числа элементов воспаления, эритроцитов, слизи, бактерий, кристаллов мочевых солей, артефактов, сокращает время и повышает производительность исследования.
Качественный и количественный состав питательной среды 199 при использовании в диагностике рака мочевого пузыря является адекватным для нормального метаболизма клеток, способен поддерживать их нормальное осмотическое давление и необходимый уровень кислотно-щелочного равновесия. Использование питательной среды 199 значительно повышает возможности сохранения и транспортировки клеток (до 72 ч) и их дальнейшего использования для морфологических и иммуноцитохимических исследований [1; 5].
Используемая питательная среда 199 для получения tospin-препаратов методом жидкостной цитологии, а также все расходные материалы для получения клеточных блоков и изготовления гистологических препаратов выпускается отечественной промышленностью. Это обуславливает невысокую себестоимость и обеспечивает соответствие заявляемого способа критерию промышленной применяемости.
Совокупное применение традиционного цитологического исследования смывов мочевого пузыря, жидкостной цитологии, иммуноцитохимических исследований, получение клеточных блоков для дальнейшего гистологического и иммуногистохимических исследований с использованием моноклональными антителами (СК7, СК20, САМ5.2, СК5/6, СК14, СК17, уроплакин III, тромбомодулин и др.) позволят повысить чувствительность морфологической диагностики и дает возможность проводить дифференциальную и уточняющую диагностику опухолей мочевого пузыря [3; 7].
Заключение
Широкое использование методов цитологической (традиционное цитологическое исследование, жидкостная цитология, иммуноцитохимическое исследование) и гистологической диагностики (получение гистологических препаратов из клеточных блоков и иммуногистохимическое исследование) в онкологии, урологии, клинической лабораторной диагностике и патологической анатомии значительно повышает чувствительность метода цитологического исследования в диагностике опухолей мочевого пузыря.