Частота повреждения печени, по мнению разных авторов, может колебаться от 15 до 57 %. [3, 12, 16]. Причем, это самый высокий показатель среди всех повреждений органов брюшной полости [3].
Важным остается и тот факт, что количество осложнений, несмотря на высокое развитие медицины, из года в год продолжает расти, и наблюдаются у 17-38 % пациентов [3, 7, 18, 19, 20]. Хотя некоторые авторы приводят данные о частоте встречаемости послеоперационных осложнений у 20-80 % пациентов [14, 15]. Установлено, что характер осложнений зависит от объема оперативного вмешательства, а так же от области поражения печени [2]. Вторичная операция необходима в среднем 7 – 8,7 % пострадавших [3].
Печень обладает регенеративной способностью, но, как и любой восстановительный процесс, он очень энергозатратен. Этим и объясняется высокий рост количества белка в гепатоцитах.
Именно исследования общего белка позволят правильно оценить стрессовое посттравматическое состояние органа.
Спектр применение иммуномодуляторов очень разнообразен. Они широко используют для лечения таких заболеваний, как: ОРВИ, гриппа, гепатит B и С, остроконечных кондилом, [1, 4, 5, 8].
Так же иммуномодуляторы нашли широкое применение и в хирургической практике [6].
Новое направление использования иммуномодуляторов получили в регенеративной медицине [10].
Цель работы: определить динамику содержания и распределения общего белка в гепатоцитах печени крыс после механической травмы органа и использовании в качестве стимулятора регенеративных процессов «Лайфферон» растворенного в воде для инъекции.
Материалы и методы исследования
Объектом исследования послужили 75 беспородные крысы средним весом 180 ± 5 грамм, в возрасте 90 суток. Все животные содержались в стандартных условиях вивария.
Животные были разделены на 4 группы:
Контрольная группа – динамика содержания и распределения общего белка в гепатоцитах (3 крысы – самцы).
Экспериментальная группа № 1 – динамика содержания и распределения общего белка в гепатоцитах печени крыс после механической травмы с использованием в качестве ускорителя регенеративных процессов иммуномодулятора «Лайфферон» растворенного в воде для инъекции (72 крысы – самцы). Все животные были поделены на несколько подгрупп (табл. 1).
Каждое животное помещали в специализированную камеру, вводили в медикаментозный сон, с помощью раствора хлороформа в дозе 1 мл/180 гр, после чего приступали к эксперименту.
Протокол всей экспериментальной работы был составлен в соответствии с принципами биоэтики, с приказом МЗ РФ №267 от 19.06.2003, «Об утверждении правил лабораторной практики», (Минздрав ССР №755 от 12.08.1977); правилами лабораторной практики (GLP).
У всех лабораторных животных после выведения их эксперимента выделяли печень для изготовления гистологических микропрепаратов.
Всем животным экспериментальных групп проводилась механическая травматизация органа методом резекции после срединной лапаротомим. Повреждение органа осуществлялась скальпелем. Разрез проводился в V сегменте печени длиной 10 мм, глубиной 4 мм. После травматизации, рану обрабатывали раствором «Лайфферон» в различных концентрациях, на печень накладывались п – образные швы и послойно зашивались ткани. В некоторых экспериментальных группах ежедневно вводился препарат в различных концентрациях.
Выведение животных из эксперимента осуществлялось на 3-е, 5-е и 7-е сутки после оперативного вмешательства.
Количественное определение белка в контрольной и экспериментальной группе проводилось с помощью комплекса «Морфолог». Определение концентрации белка проводилось в 400 гепатоцитах в цитоплазме клетки в условных единицах.
Материалы обрабатывались на персональном компьютере с помощью программ «Microsoft Office Windows 2007», «Microsoft Office Excel 2007».
Результаты исследования и их обсуждение
В ходе исследования выявлены следующие колебания общего белка (табл. 2).
В предыдущих работах мы уже обговаривали о важности исследования суточных ритмов, и как итог проделанной работы, выявление предпочтительного времени оперативного вмешательства на исследуемый орган. Поэтому за норму принят показатель 12 часов дня – 4220 ± 10 усл.ед. [9, 11].
Таблица 1
Распределение лабораторных животных в экспериментальной группе
|
Количество животных |
||||
|
3 сутки |
5 сутки |
7 сутки |
||
|
«Лайфферон» в дозе 10625 ЕД |
однократно |
3 |
3 |
3 |
|
ежедневно |
3 |
3 |
3 |
|
|
«Лайфферон» в дозе 21250 ЕД |
однократно |
3 |
3 |
3 |
|
ежедневно |
3 |
3 |
3 |
|
|
«Лайфферон» в дозе 42500 ЕД |
однократно |
3 |
3 |
3 |
|
ежедневно |
3 |
3 |
3 |
|
|
«Лайфферон» в дозе 85000 |
однократно |
3 |
3 |
3 |
|
ежедневно |
3 |
3 |
3 |
|
|
Всего |
72 |
|||
Таблица 2
Динамика общего белка в гепатоцитах печени крыс после механической травмы
|
Показатель общего белка в условных единицах |
||||
|
3 сутки |
5 сутки |
7 сутки |
||
|
Норма |
4220 ± 10,5 |
|||
|
Контроль, без использования «Лайфферон» |
7389 ± 19,4 |
7370 ± 23,5 |
7323 ± 08,3 |
|
|
10625 ЕД |
однократно |
5892 ± 10,3 |
5660 ± 06,2 |
5524 ± 04,1 |
|
ежедневно |
5731 ± 05,2 |
5538 ± 08,3 |
5311 ± 09,4 |
|
|
21250 ЕД |
однократно |
5634 ± 08,4 |
5388 ± 07,3 |
5164 ± 05,2 |
|
ежедневно |
5464 ± 06,2 |
5212 ± 06,3 |
5037 ± 08,3 |
|
|
42500 ЕД |
однократно |
5206 ± 05,3 |
4961 ± 07,4 |
4728 ± 05,5 |
|
ежедневно |
5077 ± 07,5 |
4805 ± 03,5 |
4698 ± 08,6 |
|
|
85000 ЕД |
однократно |
5100 ± 03,5 |
4694 ± 09,4 |
4299 ± 10,3 |
|
ежедневно |
5053 ± 05,3 |
4623 ± 08,2 |
4234 ± 06,1 |
|
Анализируя данные табл. 2 наблюдается изменение показателей общего белка и приближение его к норме в результате увеличения дозы препарата. Важно отметить, что при ежедневном введении препарата во всех исследованиях наблюдается более выраженная противовоспалительная реакция.
Однако показатель разницы между этими двумя значениями не имеет закономерной тенденции колебания (Гистограмма).
Из данной гистограммы видно, что во всех концентрациях, кроме 10625 ЕД заметна тенденция поднятия показателей с 3-х на 5-е сутки и падение с 5-х на 7-е. При использование самой min дозы, 10625 ЕД, наблюдается абсолютная противоположность колебания показателей, падение с 3-х на 5-е сутки и подъем 7-м суткам.
Min разница колебаний показателей между одновременным введением препарата и ежедневным зафиксировано при самой Max значение дозы на 7-е сутки эксперимента. Min значение зафиксировано на 7-е сутки в концентрации 42500 ЕД. Maxзначение на 7-е сутки при Min концентрации препарата.
Исследуя данные табл. 2, выявлены практически одинаковые показатели общего белка: 5212 ± 06 и 5206 ± 05 усл. ед., 5524 ± 04 и 5538 ± 08 усл. ед., 4698 ± 08 и 4694 ± 09 усл. ед. В двух выявленных случаях показатель соответствовал данным ранее взятой пробы при более высокой концентрации препарата.
Выводы
1. Применение иммуномодулятора «Лайфферон» ускоряет процессы регенерации печени.
2. Чем выше доза препарата «Лайфферон», тем быстрее снимается противовоспалительный эффект и а результат этого процесса, происходит снижение показателя общего белка.
3. Ежедневное введение препарата оказывает более выраженное действие, нежели одновременное введение.
4. Min разница колебаний показателей между одновременным введением препарата и ежедневным зафиксировано при самой Max значение дозы на 7-е сутки эксперимента.