Ненуклеозидные ингибиторы вирусной репродукции, имеющие пуриновую природу, открывают новые перспективы для разработки эффективных и безопасных противовирусных лекарственных средств [2, 4, 14]. Значительный интерес среди веществ этого класса представляют собой производные арилоксиалкиладенина [5], обладающие низкой токсичностью [1, 6] и демонстрирующие высокую активность in vitro в отношении цитомегаловируса человека [7, 10], а также ВИЧ-1, цитомегало- и Коксаки-вируса [8, 9]. Кроме того, ряд производных арилоксиалкиладенина одновременно с противовирусной продемонстрировал выраженную психотропную активность in vivo [3, 12], в результате чего в условиях Федеральной целевой программы «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» по Государственному контракту с Минпромторгом России был выполнен полный комплекс доклинических исследований субстанции соединения-лидера – 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина, обладающего антидепрессантным и противострессорным действием [11].
Цель исследования. Изучение лекарственной безопасности и психотропной активности таблеток 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина.
Материалы и методы исследования
При выполнении исследований были использованы круглые двояковыпуклые таблетки белого цвета, имеющие следующий состав: 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденин – 0,050 г, лактоза моногидрат (ТУ 9229-128-04610209-2003) – 0,120 г, повидон (ФСП 42-0345-4369-03) – 0,002 г, крахмал кукурузный (ГОСТ Р 51985-2002) – 0,020 г, тальк (ФС 42-0066-01) – 0,006 г, кальция стеарат (ТУ 6-09-4233-76) – 0,002 г. Масса таблетки – 0,200 г. Исследования на мелких лабораторных животных (мыши и крысы) были выполнены с использованием гранулята таблеток, имеющего идентичный состав. Изучение лекарственной безопасности таблеток 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина (острой токсичности, хронической токсичности, аллергизирующего действия), их фармакологической кинетики и специфической фармакологической активности проводили в соответствии с руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ [13].
Результаты исследования и их обсуждение
С учетом известных результатов определения параметров острой токсичности субстанции 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина (ЛД50 при внутрижелудочном введении половозрелым животным составляет: 992 мг/кг у мышей самок и 1035 мг/кг – у мышей самцов; 4812 мг/кг – у крыс самок и самцов [11]), при изучении острой токсичности лекарственную форму в виде гранулята таблеток вводили внутрижелудочно мышам в дозах 18, 20, 22, 24 и 26 г/кг, крысам в дозах 30, 35, 40, 45 и 50 г/кг. Установлено, что у мышей и крыс под действием лекарственной формы не возникает гибели в ранние и отдаленные сроки наблюдений. При введении лекарственной формы в максимальных дозах у животных не выявлено отчетливых нарушений в общем состоянии, поведенческих и нервно-мышечных реакциях, но прослеживались тенденции депримирующего непродолжительного воздействия на двигательную и эмоциональную активность животных. Уровень ЛД50 лекарственной формы при внутрижелудочном введении был определен ориентировочно (по максимально введенному объему) и составил при внутрижелудочном введении мышам и крысам 26 г/кг и 50 г/кг, соответственно. С учетом классификации токсичности веществ по И.В. Саноцкому, лекарственная форма 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина в виде гранулята таблеток может быть отнесена к классу малотоксичных препаратов.
По результатам хронических исследований установлено, что таблетки 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина при внутрижелудочном введении крысам в течение 6 мес. и кроликам в течение 3 мес. в суточных дозах 10, 75 и 150 мг/кг не оказывают влияния на общее состояние животных, прирост массы тела, не способствуют гибели животных. Установлено, что под действием лекарственной формы в дозах 10 и 75 мг/кг у животных существенно не изменяются поведенческие реакции, электрофизиологическая активность миокарда, периферическая кровь, биохимические показатели плазмы крови, детоксицирующая и выводящая функции печени и почек. Патоморфологическими исследованиями показано отсутствие у данных групп животных патологических изменений в головном мозге и внутренних органах животных.
У животных, получавших твердую лекарственную форму в дозе 150 мг/кг, обратимо снижались локомоторная и исследовательская активности, в периферической крови в пределах физиологических норм снижалось общее количество эритроцитов и лейкоцитов, а в лейкоформуле – содержание агранулоцитов. Указанные изменения полностью нивелировались до состояния контрольных значений после отмены введения препарата. Функциональными исследованиями установлено укорочение длительности гексеналового сна, отсутствие изменений в электрофизиологической активности миокарда у крыс и активация этой активности у кроликов. Биохимическими исследованиями установлено снижение поглотительно-выделительной функции печени и повышение детоксицирующей функции почек. Патоморфологическим исследованиями не обнаружено изменений в массе органов и патологических изменений в них.
Оценка анафилактогенной активности в реакции общей анафилаксии не выявила аллергенных свойств препарата и позволяет судить об отсутствии возможности развития наиболее опасных для жизни аллергических реакций, таких как анафилактический шок, отек Квинке, крапивница и определенные виды бронхиальной астмы. Исследуемое лекарственное средство не оказывало влияния на кооперацию субпопуляций Т-лимфоцитов, в частности, цитотоксических Т-лимфоцитов, подавляющих гиперчувствительность замедленного типа. В конъюнктивальной пробе, обладающей высокой чувствительностью к циркулирующим агентам, не выявлено реакции на аллерген при курсовом 14-дневном пероральном введении препарата морским свинкам в виде суспензии гранулята таблеток в терапевтической дозе 10 мг/кг и в дозе, в 10 раз ее превышающей (100 мг/кг).
При изучении фармакологической кинетики было установлено, что таблетки 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина при внутрижелудочном введении близки по своим фармакокинетическим свойствам к субстанции соединения. Статистически значимых различий не обнаружено. Относительная биодоступность составляет 93 % (таблица).
Фармакокинетические параметры субстанции и таблеток 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина у кроликов при пероральном введении
|
Препарат |
Фармакокинетические параметры |
||||
|
AUC, мкг/мл/ч |
T1/2, ч |
MRT, ч |
Сl, л/ч/кг |
Vd, л/кг |
|
|
Субстанция, 50 мг/кг |
46,29±3,62 |
5,62±0,41 |
7,80±0,28 |
1,084±0,082 |
8,77±0,34 |
|
Таблетки, 200 мг/кг |
43,05±1,79 |
5,60±0,14 |
7,72±0,06 |
1,160±0,046 |
9,39±0,29 |
|
Относительная биодоступность |
93,44±7,73 |
||||
Осуществлено сравнительное изучение спектра психотропного действия для субстанции и таблеток 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина. Был использован стандартный набор методических подходов, позволяющий выяснить наличие и выраженность седативного (тест «Открытое поле»), анксиолитического (тесты «Открытое поле», «Приподнятый крестообразный лабиринт», «Черно-белая камера»), антидепрессивного (тесты «Подвешивание мышей за хвост» и «Принудительное неизбегаемое плавание по Порсольту»), а также ноотропного действия (тесты «Условная реакция пассивного избегания» и «Экстраполяционное избавление»). Во всех тестах субстанция и ее лекарственная форма оказывали сопоставимое выраженное противотревожное и антидепрессивное действие. Ноотропный эффект был выражен незначительно. Полученные данные свидетельствуют о том, что таблетки 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина по своему действию биоэквивалентны действию субстанции.
Заключение
В результате проведенных исследований доказаны высокая эффективность и безопасность таблеток 9-[2-(4-изопропилфенокси)этил]аденина. Разрабатываемое лекарственное средство может обеспечить эффективное лечение пациентов с депрессивными расстройствами, являющимися частой причиной заболеваемости и преждевременной смертности трудоспособного населения.
Исследования выполнены в рамках Государственного контракта от 13 сентября 2011 г. № 11411.1008700.13.077 с Минпромторгом России.