Экстракорпоральная иммунофармакотерапия (ЭИФТ), к которой относится внутривлагалищная аутолимфоцитотерапия (ВАЛТ), является отдельным, возникшим на стыке иммунологии и экстракорпоральной гемокоррекции. В основе метода ЭИФТ лежит индукция вне организма фармакологическим приёмом клеток с определённой функциональной направленностью и последующее введение в организм таких индуцированных in vitro аутологичных клеток-регуляторов иммунного ответа (Лесков В.П., Гущин И.С., 1993 г.). ЭИФТ делает возможным предварительный, до введения в организм, лабораторный контроль количества и степени индукции желаемой функции клеток.
В последние годы всё большее внимание уделяется изучению иммунологических причин бесплодия. Исследования показали, что иммунная система принимает активное участие в процессе имплантации, адгезии и инвазии трофобласта и – как следствие – нормальном развитии беременности [Yoshioka S. и соавт. 2003). Учитывая тесную взаимосвязь иммунной и репродуктивной системы в регуляции овариальной функции, развитии эмбриона, его имплантации и сохранении беременности, становится очевидным тот факт, что наличие исходных иммунных дисфункций, а также развитие их в процессе стимуляции овуляции может быть серьезной причиной низкого качества ооцитов, дефекта оплодотворения яйцеклетки, нарушения развития и имплантации эмбриона и, в конечном итоге, потери беременности (Mouzon J. и соавт. 2006).
Одним из альтернативных методов воздействия на иммунную систему, который не влечет за собой негативного влияния на организм, является внутривлагалищная ВАЛТ. ВАЛТ основана на оригинальном методе, используемом в лечении аллергических заболеваний – аутолимфоцитотерапии (АЛТ – от греч. autos сам, лат. lymphocyte – основная иммунокомпетентная клетка, греч. therapeia – лечение), который применяется уже более 18 лет (Лесков В.П., Гущин К.С., 1993). В основе этого метода лежит индукция вне организма фармакологическим приёмом клеток с определённой функциональной направленностью и последующее введение в организм таких индуцированных in vitro аутологичных клеток-регуляторов иммунного ответа (Логина Н.Ю., Ольшанский А.Я., 1997). Экстракорпоральная иммунофармакотерапия делает возможным предварительный, до введения в организм, лабораторный контроль количества и степени индукции желаемой функции клеток.
Целью нашего исследования было оценить эффективность внутривлагалищной аутолимфоцитотерапии при лечении женщин с бесплодием, включенных в программу ЭКО и ПЭ.
Материалы и методы исследования
В период с 2010 по 2014 годы нами было проведено обследование и лечение 80 пациенток репродуктивного возраста с бесплодием различного генеза.
Пациентки были распределены на 2 группы, что было основано на личных предпочтениях больных. Основную группу составили 40 женщин, которым перед стандартной процедурой ЭКО был проведен курс ВАЛТ, в группу сравнения вошли 30 женщин со стандартной схемой ведения.
Исследования проводили в группах пациенток, однородных по возрастному составу, причинам бесплодия и сопутствующим заболеваниям. При обследовании всех пациенток проводили анализ анамнестических данных, использовали клинические, инструментальные, в том числе эндоскопические и ультразвуковые, лабораторные и статистические методы исследования.
Оценка иммунологического статуса пациенток до и после лечения во всех группах проводилась по следующим показателям: абсолютное количество в крови лейкоцитов, абсолютное и относительное содержание лимфоцитов, а также их субпопуляций: хелперов СД 3+ СД 4+; цитотоксичных Т-клеток СД 3+ СД 8+; активированных Т-лимфоцитов СД 3+DR+; В-лимфоцитов СД 19+; естественных киллерных клеток СД 16+СД 56+.
Всем пациенткам основной группы за 3 месяца до предполагаемого экстракорпорального оплодотворения производили курс внутривлагалищной аутолимфоцитотерапии по следующей методике:
1. После забора 10-20 мл крови осуществляли получение лейкоцитарной суспензии. После чего проводили подсчет клеток в камере Горяева и проверку препарата на чистоту клеточной популяции и жизнеспособность клеток. После подсчета числа лимфоцитов концентрацию клеток доводили до 106-107 кл/мл.
2. Полученные клетки ресуспензировали в культуральной ростовой среде или в стерильном изотоническом растворе натрия хлорида. Клетки культивировали совместно с иммуномодуляторами (имунофан) в течение 3-4 часов, при 37 °C в атмосфере, содержащей 5 % CO2, и при 95 % влажности.
3. Внутривлагалищное введение аутолимфоцитов, активированных имунофаном, проводилось в условиях дневного стационара под контролем врача гинеколога. Взвесь аутолимфоцитов вводилась в 5,0 мл стерильного физиологического раствора 1-2 раза в неделю, в количестве 6-8 процедур. Экспозиция составляла 40-60 мин.
Результаты исследования и их обсуждение
Возраст обследованных пациенток колебался от 28 до 42 лет и в среднем составил для пациенток основной группы 35 ± 1,6 года; в группе сравнения – 33,6 ± 2,5 года. К моменту настоящего исследования продолжительность бесплодия у обследованных больных составила от 2-х до 11-ти лет, в среднем ± 5,2 года.
Менструальную функцию у обследованных больных оценивали по возрасту наступления менархе, характеру менструального цикла с учетом особенностей менструального кровотечения. Средний возраст наступления менархе в основной группе составил 12,6 ± 1,2 года, в контрольной 12,8 ± 1,6 года. Различными нарушениями менструального цикла страдали в основной группе 30 % женщин, в группе сравнения – 33 %. Структура нарушения менструального цикла по группам представлена на рис. 1.
Рис. 1. Структура нарушений менструального цикла в исследуемых группах
Анализ сведений о половой жизни показал, что средний возраст сексуального дебюта составил 18,7 ± 1,9 года и 18,2 ± 1,3 года в основной и группе сравнения соответственно. Подавляющее большинство женщин (96,4 %) имело одного полового партнера на протяжении последних двух лет и более. Причины бесплодия в исследуемых группах распределились следующим образом (рис. 2).
Рис. 2. Причины бесплодия в исследуемых группах
Рис. 3. Результаты программы ЭКО и ПЭ в исследуемых группах
Особенности акушерского анамнеза пациенток обеих групп представлены в таблице.
Особенности акушерского анамнеза пациенток обеих групп
|
Показатель |
Основная группа |
Группа сравнения |
|
Беременности в анамнезе |
18(45 %) |
13(43,3 %) |
|
- роды |
5(27,78 %) |
3(23,07 %) |
|
- искусственные аборты |
4(22,22 %) |
4(30,77 %) |
|
- самопроизвольные выкидыши |
6(33,33 %) |
4(30,77 %) |
|
- эктопическая беременность |
3(16,67 %) |
2(15,38 %) |
|
Попытки ЭКО и ПЭ |
31(77,5 %) |
20(66,6 %) |
|
- 2 и более попытки ЭКО и ПЭ |
25(62,5 %) |
12(40 %) |
|
Первичное бесплодие |
22 (55,0 %) |
17 (56,67 %) |
|
Вторичное бесплодие |
18 (45,0 %) |
13 (43,33 %) |
При изучении гинекологического анамнеза установлено, что ведущей перенесенной патологией в обеих группах являлись воспалительные заболевания органов малого таза (более 50 % пациенток обеих групп), то есть каждая вторая женщина перенесла по крайней мере один эпизод той или иной формы генитальной инфекции. Более того, у определенной части больных наблюдалась тенденция к рецидивирующему течению. У подавляющего числа больных обеих групп (92 % и 86,7 % соответственно) ранее уже проводилось стационарное и амбулаторное курсовое лечение с применением системных и местных антибактериальных средств, кортикостероидных препаратов, иммунных стимуляторов, физиотерапии. При этом лекарственная непереносимость, в том числе антибиотиков, выявлена у 11,3 % пациенток первой группы и у 13,3 % – контрольной. Среди других гинекологических заболеваний, таких как миома матки, эндометриоз, опухоли яичников статистически значимых различий распространенности в исследуемых группах не выявлено. Каких-либо достоверных различий между исследуемыми группами не обнаружено. В итоге лечения в обеих группах произведено 70 процедур ЭКО и ПЭ. 40 программ ЭКО в основной группе завершились переносом 63 эмбрионов, в контрольной группе перенос эмбрионов произведен в 30-ти случаях, количество перенесенных эмбрионов составило 46.
Частота имплантации (на перенос эмбриона) в основной группе составила 38,1 %, в группе сравнения – 30,4 %, при этом различия между данными показателями оказались статистически значимыми (р = 0,04).
В результате лечения в основной группе беременность наступила у 21 пациентки (52,5 %), при этом беременность двойней оказалась у 3-х женщин. В группе сравнения беременность наступила у 12 пациенток (40 %), у 2-х из них беременность двойней. Таким образом после проведенного ВАЛТ в основной группе частота наступления беременности была статистически достоверно выше, чем в контрольной группе.
Из числа наступивших беременностей 72,7 % закончились рождением здорового потомства, у 9 пациенток (27,3 %) пролонгировать беременность не удалось (самопроизвольные выкидыши и неразвивающиеся беременности).
Несмотря на проводимую комплексную сохраняющую терапию, частота прерывания беременности в 1 триместре в основной группе составила 19,05 %, в сравниваемой – 41,67 %. Прерывания беременности во втором и третьем триместре в данном исследовании не наблюдалось.
Одним из оптимальных путей повышения эффективности программ ВРТ является оценка состояния иммунологических показателей крови и инфекционного профиля пациенток, а также их подготовка к проведению программы ЭКО с использованием аутолимфоцитоиммунотерапии под контролем показателей иммунного статуса. Возможное влияние и определение роли данного метода лечения показателя требует дальнейшего изучения.
Заключение
Метод внутривлагалищной аутолимфоцитотерапии приводит к повышению эффективности лечения пациенток с бесплодием и позволяет повысить эффективность процедур ЭКО и ПЭ.