С целью оптимизации обследования доноров и реципиентов в 1990 году Lapierre был разработан метод гелевой технологии для определения фенотипа эритроцитов по системе АВ0, Rhesus, Kell и скринингу антиэритроцитарных антител [2]. Метод характеризуется высокой чувствительностью, превосходит по объему получаемой информации традиционные методы исследования, что чрезвычайно важно в клинической практике, тем более в онкологии, где частота проведения гемотрансфузионных мероприятий особенно высока. Это связано, как с особенностями самого заболевания, протекающего на фоне анемического синдрома, депрессии общего и местного иммунитета [3, 5], так и со спецификой проводимого комплексного противоопухолевого лечения, включая оперативное вмешательство, сложное, с точки зрения резектабельности опухолей [4]. В этой связи представлялось целесообразным исследование фенотипических характеристик эритроцитов по системе АВО, Rhesus и Kell у онкологических пациентов, в частности, у детей с солидными новообразованиями.
Цель исследования – установление частоты распространения антигенов по системе АВ0, Rhesus, Kell для выявления трансфузионно опасных фенотипов эритроцитов.
Материалы и методы исследования
Исследованы образцы крови 114 детей с солидными новообразованиями – 62 (54,3 %) мальчика и 52 (45,7 %) девочки в возрасте от 1 года до 16 лет, получивших лечение в ФГБУ «РНИОИ» Минздрава России в период 2014-2015 гг. Проведено определение групп крови по системе АВ0, Rh-фактора, типирование антигенов эритроцитов – D, С, с, Сw, Е, е, К, k, скрининг антиэритроцитарных антител – Rh-hr, Kell, Duffi, Kidd методом микроколоночной агглютинации на анализаторе AutoVue Innova (США) с использованием кассет ORTHO BioVue.
Результаты исследования и их обсуждение
Данные о распространенности антигенов эритроцитов системы АВ0 показали, что из 114 пациентов 0(I) группу крови имели 39 (34,2 %), A(II) – 41 (36,0 %), B(III) – 27 (23,7 %), AB(IV) – 7 (6,1 %) (табл. 1). Распределение групп крови по системе АВ0 представлялось как: A(II) > > 0(I) > B(III) > AB(IV) и соответствует данным в центральном регионе России с преобладанием лиц с группой крови A(II) [1].
Таблица 1
Распределение антигенов эритроцитов системы АВ0
Группы крови |
Частота распределения |
|
абсолютное число |
% |
|
0(I) |
39 |
34,2 |
A(II) |
41 |
36,0 |
B(III) |
27 |
23,7 |
AB(IV) |
7 |
6,1 |
Всего |
114 |
100 |
Анализ частоты обнаружения Rh(D) фенотипов показал, что Rh(D)- положительный фенотип имели 82 пациента (71,9 %) из 114: 47 (57,3 %) мальчиков и 35 (42,6 %) девочек, Rh(d)-отрицательный фенотип выявлен у 32 больных (28,1 %) из 114 – 15 (46,8 %) мальчиков и 17 (53,1 %) девочек соответственно (табл. 2).
Таблица 2
Частота распространения Rh(D) фенотипов с учетом антигенов АВ0
Пол |
Rh(D)+ |
Rh(d)- |
||||||||
0(I) |
A(II) |
B(III) |
AB(IV) |
Всего |
0(I) |
A(II) |
B(III) |
AB(IV) |
Всего |
|
М n = 62 |
18 |
17 |
9 |
3 |
47 (57,3) |
8 |
5 |
2 |
0 |
15 (46,8) |
Д n = 52 |
7 |
15 |
12 |
1 |
35 (42,6) |
6 |
4 |
4 |
3 |
17 (53,1) |
Всего |
25 |
32 |
21 |
4 |
82 (71,9) |
14 |
9 |
6 |
3 |
32 (28,1) |
Результаты исследования антигена «К» системы Kell показали, что из числа обследуемых детей только 8 (7 %) имели Kell-положительный фенотип, что соответствует частоте распространенности антигена у европейского населения (7-9 %) (табл. 3) [10]. Исходя из этого, можно предположить о возможных сложностях при подборе донора для проведения гемотрансфузий Kell-положительным реципиентам.
Таблица 3
Фенотипические характеристики эритроцитов среди Rh(D)-положительных и Rh(d)-отрицательных лиц
Rh(D)+ n = 82 |
Rh(d)- n = 32 |
||||
Фенотипы антигенов эритроцитов |
Абсолютное число |
% |
Фенотипы антигенов эритроцитов |
Абсолютное число |
% |
СсDееК- |
28 |
34,1 |
СсddееК- |
2 |
6,3 |
СwСсDееК- |
2 |
2,4 |
|||
ССDееК- |
18 |
22,0 |
|||
СсDEeK- |
9 |
11,0 |
|||
СwСсDEeK- |
1 |
1,2 |
|||
ссDЕеК- |
11 |
13,4 |
ссddЕеК- |
4 |
12,5 |
СwссDЕеК- |
1 |
1,2 |
|||
СwСсDЕЕК- |
1 |
1,2 |
|||
ссDЕЕК- |
5 |
6,1 |
|||
СсDEeK+ |
1 |
1,2 |
|||
СсDееК+ |
2 |
2,4 |
|||
СсDЕЕК+ |
1 |
1,2 |
|||
ссDЕеК+ |
1 |
1,2 |
ссddЕеК+ |
1 |
3,1 |
ссDЕЕК+ |
1 |
1,2 |
|||
ссddееК+ |
1 |
3,1 |
|||
ссddееК- |
24 |
75,0 |
Согласно полученным данным среди Rh(D)-положительных пациентов наиболее распространены 4 фенотипа эритроцитов: СсDееK−, ССDееK−, ccDEeK− и СсDЕеK−, из которых с наибольшей частотой определяются фенотипы СсDееK− (34,1 %) и ССDееK− (22,0 %) (табл. 3). То есть более половины детей с онкопатологией, а точнее 56,1 % являются носителями указанных Kell-отрицательных фенотипов – СсDееK− и ССDееK−. В 2,3 раза реже, у 24,4 % пациентов обнаружены фенотипы ccDEeK− (13,4 %) и СсDЕеK− (11,0 %). Полученные результаты не противоречат данным других авторов [9]. У 86,4 % Rh(D)-положительных пациентов встречаются гомозиготные сочетания антигенов системы Rhesus – СС, сc, ЕЕ и ее, представляющие наибольшую опасность в трансфузионном отношении. Так, 18 (22,0 %) Rh(D)-положительных пациентов гомозиготны по антигену «С», а 64 (77,8 %), то есть каждый третий с Rh(D)- положительным фенотипом, содержат антиген «с». По имеющимся данным [6] распространенность антигена «с» среди людей составляет около 80 %, соответственно 20 % не содержат антигена «с» и являются гомозиготными по аллельному антигену «С». Это означает, что 22,0 % обследованных нами детей, имеющих антиген «С», не являются исключением и могут быть сенсибилизированы антигеном «с» при проведении им гемотрансфузионной терапии с последующим развитием осложнений гемолитического типа. Количество Rh(d)-отрицательных детей, имеющих антиген «с», составило 30 (93,8 %). Большинство Rh(d)-отрицательных лиц представлено фенотипом ссddeeK− (75,0 %), в меньшей степени фенотипом ссddEeK− (12,5 %) и еще реже фенотипом СсddeeK− (6,3 %) (табл. 3).
Все обследованные нами пациенты были носителями антигена k (Cellano), но с учетом полученных нами результатов по обнаружению антигена «К» по системе Kell, 93 % детей имели фенотип kk, а 7 % – Кk. Однако известно [8], что 0,2 % людей имеют фенотип KK и потому подбор k-негативного донора (1 из 500 человек) для них весьма сложен, в связи с чем, лица с фенотипом КК могут быть иммунизированы k-антигеном, но в анализируемой нами группе лиц фенотип КК не выявлен. При подборе крови детям с фенотипом kk (как потенциальным реципиентам), совместимыми будут доноры крови с фенотипом kk, а совместимыми с реципиентами Кk – доноры с фенотипом Кk, kk и КК [7].
Антиген Сw (Willis) обнаружен только у 5 (6,0 %) Rh(D)-положительных пациентов (табл. 3). В 2-х случаях Cw выражен у лиц с группой крови 0(I), еще в 2-x – с В(III) и в 1 – с А(II) группой крови, образуя так называемые редкие фенотипы крови – СwСсееК- в 2-х наблюдениях, и по 1-му – с фенотипами СwссЕеК-, СwСсЕЕК-, СwСсЕеК-. Для лиц – носителей одного из указанных редких фенотипов возможны проблемы с подбором доноров.
Результаты первичного скрининга антиэритроцитарных антител к антигенам эритроцитов систем Rh-Hr, Kell, Duffy, Kidd в наших исследованиях были отрицательными у всех детей, что объяснимо в одних случаях отсутствием в анамнезе пациентов факта гемотрансфузионной терапии, либо при наличии такового – отсутствием конфликта между компонентами крови донора и самого реципиента.
Таким образом, проведенные исследования демонстрируют информативность методов гелевой технологии в оценке фенотипических характеристик эритроцитов по системе АВО, Rhesus и Kell, позволяют выявить распространённость трансфузионно опасных антигенов эритроцитов у детей с онкологической патологией, и, тем самым – оптимизировать процесс подготовки и проведение гемотрансфузионных мероприятий.
Выводы
1. Результаты по частоте распределения групп крови системы АВО, Rhesus – принадлежности и фенотипов эритроцитов D, С, с, Сw, Е, е, К, k, полученные при обследовании детей с солидными новообразованиями, соответствуют данным по Российской Федерации, частота обнаружения Kell антигена – общеевропейским показателям.
2. Типирование антигенов эритроцитов и скрининг антиэритроцитарных антител с использованием гелевой технологии необходим для профилактики посттрансфузионных реакций и осложнений гемолитического типа, особенно у детей, имеющих Kell-положительную принадлежность по антигену К, у детей – гомозиготных по антигену «С» с фенотипом ССDееК-, у детей – носителей антигена Сw с фенотипами СwСсееК-, СwссЕеК-, СwСсЕЕК- и СwСсЕеК-.