Scientific journal

International Journal of Applied and fundamental research

ISSN 1996-3955

ИФ РИНЦ = 0,593

На сегодняшний день перед хирургами остро стоит проблема профилактики нагноения чистых и лечения гнойных ран. По литературным данным гнойные осложнения составляют от 32 % до 45 % от всех хирургических заболеваний, доля внутригоспитальной инфекции составляет от 12 % до 20 %, а летальность порой достигает 25 % [1, 3]. Данное обстоятельство связано с широким распространением микроорганизмов-возбудителей гнойной инфекции, которые стали резистентными к большинству известных антибиотиков [2, 5, 6]. На наш взгляд является необходимой разработка новых комбинаций многокомпонентных препаратов с антисептиками для местного применения (т.к. к ним реже развивается резистентность, реже возникают аллергические реакции, они более дешевые, чем антибиотики) [4]. Более того, на современном этапе необходимо стремиться создавать формы, которые не требуют частой смены повязки, а могут пролонгировано воздействовать на раневой процесс и препятствовать травмированию раневой поверхности.

Цель исследования: изучить ранозаживляющую активность разработанного нами многокомпонентного раневого покрытия (пленки) с Хлоргексидина биглюконатом и Метронидазолом в сравнительном аспекте с официнальной мазью «Левомеколь».

Материалы и методы исследования

Материалом для исследования послужил препарат, состав которого разработан коллективом Курского государственного медицинского университета.

Раневое покрытие (пленка) содержит в качестве лечебных компонентов антисептик хлоргексидина биглюконат 0,05 % и стимулятор регенерации метилурацил, содержит в качестве основы полиэтиленоксид с молекулярной массой 400 (ПЭО-400) и натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ), так же в качестве лечебного компонента – метронидазол, в качестве анестетика содержит лидокаина гидрохлорид, в качестве стабилизатора – глицерин в следующих массовых долях:

Метронидазол 1,0

Лидокаина гидрохлорид 2,0

Метилурацил 2,0

Глицерин 1,0

Полиэтиленоксид с молекулярной массой 400 1,0

Натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы 1,75

Раствор хлоргексидина биглюконата (0,05 %) 91,25

В экспериментах in vitro изучали антимикробный спектр мази «Левомеколь» и разработанной нами пленки. Было выполнено по 6 параллельных исследований каждого экспериментального образца. Определение спектра антимикробного действия препаратов осуществляли в опытах методом диффузии в агар на плотных питательных средах с использованием тест-штаммов микроорганизмов St. aureus ATCC 6538-P, Вас. cereus ATCC 10702, E. coli ATCC 25922, Proteus vulgaris и Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Candida albicans ATCC 885-653.

Эксперименты in vivo выполнены на 108 белых крысах-самцах породы «Вистар». Для исследования отбирали животных массой 181,7±4,20 г без внешних признаков заболевания, прошедших карантин в виварии ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России. Эксперимент выполнен в соответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes, 18.03.1986). Все животные содержались в одинаковых условиях на стандартном пищевом рационе.

Таблица 1

Распределение животных по сериям исследования

Животным под наркозом в стерильных условиях моделировалась гнойная рана по следующей методике П.И. Толстых. Через 48 часов после моделирования у всех животных формировался абсцесс со всеми характерными признаками воспаления.

Экспериментальные животные были разделены на 3 серии: 1 – модель (лечение не проводилось), 2 – контроль (проводили лечение мазью «Левомеколь»), 3 – опытная (проводили лечение разработанным нами средством (пленки размером 2х2 см)). Распределение животных по сериям представлено в табл. 1. Перевязки экспериментальным животным во всех сериях производили один раз в день, ежедневно в течение 14 суток.

Течение раневого процесса у экспериментальных животных оценивали планиметрическим, микробиологическим, гистологическим методами. Протоколирование показателей и выведение животных из эксперимента осуществляли на 1-е, 3-и, 5-е, 8-е, 10-е и 15-е сутки от начала лечения.

При планиметрии гнойной раны оценивались динамика уменьшения площади и скорости заживления (по методике Л.Н. Поповой). Во время стандартного бактериологического исследования определялась микробная обсемененность раны (КОЕ/1г ткани) путем посева инфильтрата раны в чашки Петри с плотной питательной средой (агар). Гистологическое изучение микропрепаратов ран производили на 1-е, 5-е, 10-е сутки от начала лечения после выведении подопытного животного из эксперимента путем передозировки наркоза. Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием методов однофакторного дисперсионного анализа. Вычисляли средние величины количественных показателей (М) и среднюю ошибку средней (m). Распределение признаков определяли по критерию Шапиро-Уилка. Достоверность различий оценивали по критерию Ньюмена-Кейлса.

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты исследования спектра антимикробного действия в отношении тест-штаммов St. aureus ATCC 6538-P, Вас. cereus ATCC 10702, E. coli ATCC 25922, Proteus vulgaris и Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Candida albicans ATCC 885-653 представлены в табл. 2.

Таблица 2

Спектр антимикробного действия разработанных иммобилизованных препаратов (М ± m)

Примечание. * – p ≤ 0,05 при сравнении мази «Левомеколь» с опытным образцом.

Из анализа данных, представленных в табл. 2, следует, что разработанный нами препарат обладает высоким противомикробным действием в отношении всех исследуемых тест-штаммов. Опытный образец статистически достоверно превосходил мазь «Левомеколь» по зонам задержки роста в отношении Вас. cereus ATCC 10702, E. coli ATCC 25922 и Candida albicans ATCC 885-653.

Для изучения ранозаживляющей активности использовался планиметрический метод: процент уменьшения площади ран и скорость заживления ран у экспериментальных животных. Исходные экспериментальные раны у всех животных были сопоставимы по своей площади (251,8 ± 5,65 мм2). Полученные в ходе эксперимента данные по планиметрическому методу представлены в табл. 3.

Таблица 3

Динамика площади и скорости заживления ран (М ± m)

Примечание. * – p ≤ 0,05 при сопоставлении контроля и опытной серии с серией модель; ** – p ≤ 0,05 при сопоставлении контроля с опытной серией.

Данные представленные в табл. 3 указывают на то, что с течением времени во всех сериях происходило увеличение процента уменьшения площади ран. Статистически достоверные отличия между опытной серией и контролем наблюдались в течение всего срока эксперимента.

Скорость заживления в опытной серии была максимальной на отрезке 1-3 сутки (20,9 ± 0,85 %/сутки), что достоверно превосходило значения в остальных сериях, затем скорость заживления постепенно снижалась, что указывает на максимальную активность препарата в первую фазу раневого процесса.

Во всех сериях микробная обсемененность ран на 1-е сутки составляла в среднем 14,8 ± 1,95х107 КОЕ/г. С течением времени во всех сериях происходило уменьшение микробной обсемененности ран. Статистически значимые отличия между опытной серией (9,7 ± 1,25х104) и контролем (15,5 ± 0,38х104) были отмечены начиная с 8 суток наблюдения, что свидетельствует о высокой деконтаминационной активности разработанного нами препарата.

Гистологическое изучение микропрепаратов ран производили на 1-е, 5-е, 10-е сутки от начала лечения после выведении животного из эксперимента.

Во всех сериях к первым суткам после моделирования раневого дефекта вся поверхность раны была покрыта массивным фибринозно-гнойными массами, в которых обнаруживалось большое количество погибших лейкоцитов. Подлежащие ткани резко отечны и инфильтрированы полиморфно-ядерными лейкоцитами (ПЯЛ) и макрофагами на разных стадиях дифференцировки, пучки коллагеновых волокон разрыхлены и разделены друг от друга очагами инфильтрата. Кровеносные и лимфатические сосуды расширены. Отек тканей и инфильтрат в сочетании с пропитыванием эритроцитами распространялся за пределы раневого дефекта по всей толщине дермы и переходил на гиподерму.

На 5 сутки наблюдения в контрольной серии рана покрыта лейкоцитарно-некротическим струпом, под струпом грануляционная ткань, признаки эпителизации отсутствуют. Глубокие участки дермы несколько отечны. В опытной серии грануляционная ткань покрыта фибрином и достаточно четко отграничена грануляционным валом. В молодой грануляционной ткани наблюдаются ярко выраженные процессы неоангиогенеза.

На 10 сутки в контрольной серии происходит формирование эпителиального вала на границе раневого дефекта. Грануляционная ткань четко отграничена от интактной дермы и инфильтрирована лейкоцитами. Во всех гистопрепаратах опытной серии отмечалось полное покрытие грануляций эпидермисом. Производные эпидермиса отсутствовали по всей площади раневого дефекта.

Заключение

Анализ результатов, полученных при определении зон задержки роста тест-штаммов микроорганизмов, показал, что разработанный нами препарат обладает широким спектром антимикробной активности в отношении как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов. Полученные результаты планиметрического, микробиологического и гистологического исследования гнойных ран свидетельствуют о более выраженном положительном эффекте санации раны разработанным нами препаратом, чем мазью «Левомеколь». Кроме того, было отмечено, что максимальная активность опытного препарата приходится на первую фазу раневого процесса и способствует более раннему началу регенерации. Данный результат достигается высокой абсорбционной активностью полиэтиленоксида и натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы, а так же высокой противомикробной активностью при сочетании хлоргексидина биглюконата и метронидазола, что приводит к уменьшению срока течения первой фазы раневого процесса, а наличие в составе метилурацила способствует раннему началу и ускорению процесса регенерации. Данные обстоятельства позволяют рекомендовать разработанный нами препарат для лечения при гнойно-воспалительном процессе мягких тканей.