В настоящее время область применения тромбоцитарных лизатов достаточно обширна – от лечения акне и аллопеции, пролежней и отморожений, до стимуляции роста клеток в регенеративной медицине и косметологии (PRP-терапия).
Кроме того, препараты пептидных фракций, тромбоцитарных лизатов (hPL), обладают антимикробной активностью и ингибируют биопленкообразование у стафилококков [1].
По мнению исследователей [3, 4, 5], основным терапевтическим эффектом тромбоцитарных лизатов (hPL) является, так называемый «регенеративный» эффект. Скорее всего, речь идет о комбинированном эффекте, связанным с сочетанным действием низкомолекулярных тромбоцитарных пептидов, факторов роста и высокомолекулярных адгезивных белков (фибрин, фибронектин, витронектин, ламинин).
В последние годы тромбоцитарный протеом активно изучается, определены молекулярные массы большинства тромбоцитарных пептидов (PubMed; UniProt). Секвенированы и получены гомологи низкомолекулярных тромбоцитарных пептидов, что привело к созданию диагностических тест-систем для иммуноферментного анализа. Но, несмотря на это, в клинической практике используют биологические препараты тромболизата, не стандартизованные по качественному и количественному составу пептидов.
Процедура приготовления фильтратов аутогенных тромбоцитарных пептидов заключается в заборе 50 мл крови пациента, из которой путем аффереза готовится тромбоконцентрат. После стимуляции выделения низкомолекулярных тромбоцитарных пептидов проводят фильтрацию и ультрафильтрацию тромболизата [2]. Использование для ультрафильтрации центрифужных концентраторов позволяет разделить рацемическую смесь пептидов на ряд фракций 3, 5, 10, 20, 30, 50 кДа. Качественный и количественный состава фракций тромбоцитарных пептидов определяют с помощью иммуноферментного анализа.
В большинстве случаев удается разделить тромбоцитарные лизаты (hPL) на ряд фракций, но более высокомолекулярная фракция содержит и низкомолекулярные пептиды.
Комбинированный (синергический) эффект воздействия тромбоцитарных лизатов (hPL) на ткани (стимуляция пролиферации клеток, хемотаксис иммунокомпетентных клеток и антимикробная активность), связан с содержанием в них низкомолекулярных тромбоцитарных пептидов, с молекулярной массой до 10 кДа (RANTES/CCL5 (7.851 Да), PF-4/CXCL4 (7.765 Да), CTAP-3 (9.287 Да) и NAP-2 (7.436 Да), тимозин β4 (4.963 Да) и факторов роста, пептидов с молекулярной массой от 20 до 40 кДа (тромбоцитарный фактор роста (PDGF) 27.283 Да, основной фактор роста фибробластов (bFGF) 16.800-25.000 Да, сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) 27.042 Да) (UniProt).
Однако, низкая эффективность воздействия на клетки связана с разнонаправленным характером воздействия: одни пептиды оказывают потенцирующий «регенеративный» эффект, другие ингибируют этот эффект, что в конечном итоге не позволяет оценить вклад отдельных пептидов или отдельных фракций тромбоцитарного лизата (hPL) в «регенеративный» эффект. Кроме того, межбелковые взаимодействия (димеризация пептидов) тоже имеют немаловажное значение в потенцировании или ингибировании конечного эффекта.
Альтернативой препаратам фракций тромбоцитарных пептидов, полученных из аутогенной крови пациента, может явиться использование обогащенной тромбоцитами плазмы от доноров, гетерогенных тромбоцитарных пептидов КРС или применение рекомбинантных тромбоцитарных пептидов. Однако, риск проявления аллергических реакций, связанных с сенсибилизацией к аллогенным пептидам и низкая рентабельность получения рекомбинантных пептидов, делает метод фракционирования аутогенных пептидов тромбоцитарного лизата (hPL) безальтернативным.
Несомненно, что эффективность и безопасность применения препаратов, содержащих тромбоцитарный лизат (hPL), будет трудно оценить, пока они не будут стандартизированы по качественному и количественному пептидному составу, а в качестве одного из критериев стандартизации предлагается использовать их молекулярную массу.