Длительное употребление опийных наркотиков приводит к формированию иммунодефицита, который характеризуется нарушением гуморального и клеточного иммунитета, включая повышенный апоптоз лимфоцитов, дефицит Т-хелперов с инверсией соотношения Т-хелперы/Т-супрессоры, снижение количества NK-клеток, нарушение антителогенеза, фагоцитоза, цитокинового и хемокинового баланса [6, 9]. Для коррекции нарушений в иммунной системе при опийной наркомании в настоящее время применяют различные иммуномодуляторы в том числе Тактивин и Миелопид [2]. Ранее нами было показано, что введение препаратов Миелопид и Тактивин в ходе развития зависимости от морфина достоверно увеличивало время, необходимое для формирования хронической зависимости у животных на модели принудительного спаивания с 25 дней [9] до 32 и 34-35 дней, соответственно [4].
Целью работы являлась оценка влияния иммунокорригирующего действия препаратов Тактивин и Миелопид на функции клеточного иммунитета животных в процессе формирования зависимости от морфина.
Материалы и методы исследования
В экспериментах были использованы крысы Вистар (n = 54) в возрасте 1,5 мес. (Лаборатория разведения экспериментальных животных ИЦиГ, г. Новосибирск). Крыс содержали в индивидуальных клетках, при световом режиме 12 часов день/ночь и свободном доступе к еде. Работа проведена с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинкской декларации, и одобрена комитетом по биомедицинской этике ФГБНУ НИИ МББ.
Животные были разделены на 4 группы – одна контрольная и три опытные. Разброс в группах по исходной массе не превышел ± 10 %. У животных опытных групп для развития хронической опиатной зависимости использовали протокол поступления морфина с питьевой водой, содержащей 2 % сахарозы для маскировки горького вкуса. Концентрацию морфина в потребляемой жидкости изменяли следующим образом: 0,1 мг/мл, 0,2 мг/мл, 0,3 мг/ мл – в течение 48 часов каждая, и 0,4 мг/мл – в течение всего последующего периода. Контрольная группа животных получала 2 % раствор сахарозы. Первая и вторая опытные группы животных получали внутрибрюшинные инъекции Миелопида (ООО НПЦ «Медицинская иммунология») 100 ?г/кг веса или Тактивина (ОАО «Биомед» им. И. Мечникова) 10?г/кг веса в 1-й и 10-й дни спаивания. Животные третьей опытной и контрольной групп получали инъекции изотонического раствора хлорида натрия.
Индукцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) проводили по методу Langrange P.H. [8]. Животным внутрибрюшинно вводили стандартный антиген – эритроциты барана (ЭБ) в дозе 1х108 клеток в объеме 0,5 мл раствора Хэнкса. Через 4 суток после иммунизации, животным под апоневроз стопы задней правой лапы вводили разрешающую дозу эритроцитов барана 5х107 в объеме 0,1 мл раствора Хэнкса. В левую заднюю лапку вводили стерильный физиологический раствор в том же объеме. Реакцию гиперчувствительности замедленного типа оценивали через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена. Интенсивность кожной реакции оценивали по разности толщины стоп левой и правой задних лапок животного, определяемой с помощью инженерного микрометра МК-0-25. Индекс реакции (ИР) определяли для каждого животного по формуле: ИР = (Роп- Рк )/Рк х100 %; Роп – опыт, Рк – контроль.
Статистическую обработку результатов проводили в программе «Statistica 9.0». Данные представлены в виде арифметического среднего (М) ± стандартная ошибка среднего. Для оценки достоверности различий использовали критерий Манна-Уитни. Различия между группами считались достоверными при уровне значимости p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Исследование влияния препаратов Тактивин и Миелопид на иммунную систему при формировании зависимости от морфина у животных проводили с использованием реакции гиперчувствительности замедленного типа, отражающей активность клеточного звена иммунной системы.
Анализ полученных данных показал, что на 25 день потребления наркотика у животных, получавших инъекции изотонического раствора хлорида натрия, выявлено достоверное угнетение реакции ГЗТ (в 3,06 раза; p ? 0,05) по сравнению с группой контроля и двумя опытными группами (таблица).
Влияние Миелопида или Тактивина на реакцию гиперчувствительности замедленного типа у крыс Вистар на 25 день применения морфина
|
контроль |
морфин |
морфин + Миелопид |
морфин + Тактивин |
|
|
ГЗТ |
4,86 ± 0,98 (n = 12) |
1,6 ± 0,93 (n = 6); р ? 0,05 |
4,62 ± 0,94 (n = 6) |
5,7 ± 1,6 (n = 6) |
Достоверное иммуносупрессивное действие морфина сохранялось на 30-й и 35-й дни спаивания при сравнении с контрольной группой (в 2,4 раза и 1,6 раз (p ? 0,05), соответственно).
У животных, получавших инъекции иммуномодуляторов Миелопида или Тактивина, на 25-й день спаивания интенсивность реакции ГЗТ не отличалась от реакции в контрольной группе. На 30-й день спаивания отмечено ингибирование реакции ГЗТ в 2,07 раза в группе, получавшей Тактивин, по сравнению с контрольной (р?0,05), что говорит о снижении реактивности клеточного звена иммунитета. В то же время реакция у группы, получавшей Миелопид, хотя и снижалась, но достоверных различий с контрольной группой не было выявлено.
Супрессия индукции реакции гиперчувствительности замедленного типа при действии экзогенных опиатов показана на различных моделях экспериментальных животных с опиатной зависимостью [6] и подтверждена клиническими данными, полученными при оценке состояния отдельных компонентов неспецифической резисцентности у наркозависимых лиц [7, 10]. Иммуномодулирующее действие Тактивина выражается в адекватном изменении функционального состояния клеток Т-системы иммунитета, тенденцией к восстановлению баланса субпопуляций Т-лимфоцитов и их функциональной активности [1]. Действие Миелопида основано на том, что он не только активирует эффекторные клетки гуморального иммунного ответа, продуцирующие антитела, но также стимулирует функциональную активность фагоцитов, усиливает активность Т-киллеров [5], входящий в его состав миелопептид (МП-1) нормальзует баланс Т-хелперы/Т-супрессоры, специфически связываясь с Т-хелперными клетками [5]. Использование обоих иммуномодуляторов в процессе развития хронической зависимости от морфина предотвращает супрессию реакции гиперчувствительности замедленного типа и, тем самым, вероятно, вносит определенный вклад в увеличение сроков формирования хронической зависимости.
Заключение
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что введение препаратов Миелопид или Тактивин во время формирования опиатной зависимости у крыс оказывает иммунокорригирующее действие на клеточный иммунитет.