Научный журнал
Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований
ISSN 1996-3955
ИФ РИНЦ = 0,564

ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ У МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ГЕНЕТИЧЕСКИ АТТЕНУИРОВАННОГО ШТАММА PASTEURELLA MULTOCIDA ARO/A

Алиева А.Б. 1 Нурпейсова А.С. 1 Кайсенов Д.Н. 1 Кошеметов Ж.К. 1 Сугирбаева Г.Д. 1 Касенов М.М. 1 Далбаев Н.К. 1 Баракбаев К.Б. 1
1 РГП «Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности» (НИИПББ) КН МОН РК
При появлении каких-либо патологических процессов, гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови изменяются. В данной научной работе представлены результаты изучения иммунологических и гематологических показателей периферической крови овец и коз, иммунизированных генетически аттенуированным штаммом Pasteurella multocida Aro/A. В результате иммунизации у животных на 14 сутки наблюдалось рост антител в сыворотках крови, также отмечается увеличение количество Т- и В-лимфоцитов, палочкоядерных нейтрофилов (незрелых форм), лейкоцитов и моноцитов, что свидетельствует об активизации клеточного иммунитета. На 21-28 сутки количество сегментоядерных нейтрофилов, Д8+Т-супрессоров продолжало снижаться. Все гематологические показатели крови на 42 сутки были в пределах нормы, кроме лейкоцитов, лимфоцитов и моноцитов. Установлено, что иммунизация животных генетически аттенуированным штаммом Pasteurella multocida Aro/A не оказывает отрицательного влияния на иммунологические и гематологические показатели крови.
аттенуация
иммунизация
гематологические показатели
вирулентный штамм
клеточный иммунитет
1. Гематологические показатели у кроликов при экспериментальном пастереллезе / Ф.А. Ширяев, А.В. Потехин, О.В. Бородина. УДК 619:616.98:579.843.95:636.92. // Ветеринарная патология. 2007. № 2. С. 185-187.
2. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: справ.издание / Н.В. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов [и др.]. М.: Агропромиздат, 1985. С. 57-66.
3. Культурально-морфологические и биохимические свойства штаммов Pasteurella multocida, выделенных от крупного рогатого скота. / УДК 616.981.45:59(574)./ Алиева А.Б., Далбаев Н.К., Кайсенов Д.Н., Зинина Н.Н., Еспембетов Б.А., Баракбаев К.Б., Сансызбай А.Р.: Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований/г. Москва // №9, часть 3. С. 414 – 417.
4. Методологические основы оценки клинико-морфологических показателей крови домашних животных: учебное пособие / Е.Б. Бажибина, А.В. Коробов, С.В. Середа, В.П. Сапрыкин. М.: Аквариум-Принт, 2005. 128 с.
5. Новый вид сайги из Монголии / Банников А.Г // Докл Акад. Наук.. – 1946. № 5. С. 397-399.
6. Одновременная вакцинация крупного рогатого скота против пастереллеза и трихофитии / Лазовский В.А., Новикова В.А.УДК 619: 616.98-085.37:636; / УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины», г. Витебск, Республика Беларусь, С. 48-53.
7. Пастереллез крупного рогатого скота / Серикказинов О.Б., Мержакып М.К., Сабырова А.К., Байгазанов А.Н., Нуркенова М.К.: Государственный университет им. Шакарима г. Семей, Казахстан, С. 46-49.
8. Превентивная активность сывороток крови норок, иммунизированных инактивированной вакциной против пастереллеза пушных зверей на лабораторных животных. / А.С. Андрусевич, И.И. Стрельченя / УДК: 619:616.988 // РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского», г. Минск, Республика Беларусь // Ветеринарная патология. 2009. № 4. С. 66-67.
9. Рекомендации по специфической профилактике наиболее распространенных инфекционных болезней крупного рогатого скота в Республике Беларусь: утв. ГУВ МСХ и П РБ 18 января 2007 г. / В.В. Максимович [и др.]. – Витебск: УО ВГАВМ, 2007. – 54 с.
10. Роль хозяйственного освоения территории в изменении численности калмыцкой популяции сайгака // Биота и природная среда Калмыкии. Близнюк А.И. // Москва-Элиста. – 1995. С. 222-244.
11. Руководство по гематологии / под ред. А.И. Воробьева, Ю.И. Лорие. М.: Медицина, 1979. С. 68-101.
12. Сайгак в Казахстане / Фадеев В.А., Слудский А.А. // Алма-Ата. – 1982. – 160 с.

Пастереллез (лат. – Pasteurellosis; геморрагическая септицемия) – это опасное заболевание сельскохозяйственных и диких животных, ведущий за собой большой падеж численности животных, характеризующаяся септическими явлениями, крупозным воспалением легких, плевритом, отеками в различных областях тела. Болезнь распространена во всех странах мира и восприимчивы все виды домашних млекопитающих и птицы. Наиболее чувствительны буйволы, крупный рогатый скот, кролики и куры. Высокую устойчивость к пастереллезу имеют лошади и плотоядные. Большое значение в эпизоотологии болезни имеет пастереллоносительство, которое в неблагополучных хозяйствах среди крупного рогатого скота достигает 70 %, овец – 50, свиней – 45, кроликов более – 50 и среди кур – от 35 до 50 %. Экономический ущерб от пастереллеза складывается из потерь от падежа, вынужденного убоя больных животных и затрат на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий [7].

Объективным способом борьбы с инфекционными заболеваниями является специфическая профилактика. С целью профилактики бактериальных инфекций сельскохозяйственных животных используется огромное количество биологических препаратов. Несмотря на широкое многообразие зарубежных и отечественных производителей вакцин, на данном этапе развития науки проблема эпизоотического благополучия хозяйств остается актуальной [9].

В настоящее время возрастает интерес к использованию в качестве профилактических средств против пастереллеза сельскохозяйственных животных и птиц живых вакцин, приготовленных из «рационально аттенуированных» штаммов бактерий. Повреждение генов, кодирующих патогенные детерминанты, приведет к получению аттенуированного штамма P. multocida. Во многих литературных источниках приводится альтернативный метод, обусловленный введением определенных ауксотрофных мутаций в ген AroA вирулентных штаммов пастерелл, что делает их авирулентными. Функция данного гена существенна для роста бактерий in vivo и для развития инфекционного процесса. На основе данного метода создан ряд коммерческих препаратов для профилактики пастереллеза КРС, буйволов и кур [12, 10]. При введении модифицированных таким образом пастерелл, в организме будут нарабатываться антитела защищающие животного от заражения вирулентными вариантами P. multocida. Кроме того, разрабатываются другие методы связанные с нарушением функций генов ompH, ОRF-15, которые значительно снижают вирулентность родительских штаммов P. multocida [5].

При появлении патологических процессов, гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови изменяются. Большую роль в патогенезе пастереллез играют эндо и экзотоксины возбудителя, способные вызывать стойкие изменения в крови больных животных и одним из видов иммунной реакции характеризующих поствакцинальный иммунитет является гуморальный [8]. Также после вакцинации у животных изменяется интенсивность обменных процессов, что отражается на показателях крови и сыворотки крови. Кровь основной показатель гомеостаза организма, это связано с многократными и сложными функциями крови. По некоторым литературным данным [2, 4, 11] гематологический анализ позволяет судить о ходе инфекционного процесса, появлении осложнений и дает возможность предсказать исход заболевания. Поэтому важным тестом является определение превентивных свойств сывороток крови животных подвергшихся иммунизации.

Исходя из вышесказанных, целью нашей работы было изучение изменений со стороны крови у овец и коз при введении генетически аттенуированного мутанта Р. multocida Aro/A, для дальнейшего применения в разработке вакцины против пастереллеза.

Материалы и методы исследований

В работе использовали генетически мутированный штамм P. multocida Aro/A, облагающиеся стабильными биологическими свойствами и слабой вирулентностью, относящийся к сероварианту В [3].

Исследования проводили на МРС (три овцы и три козы) 12-18 месячного возраста весом 18-20 кг, которые предварительно были протестированы на возможное пастереллоносительство путем исследования сывороток крови в ИФА..

Микробную массу получили путем выращивания пастерелл на агаре (АСМА) при температуре 37 °С в течение 24-36 час. Из выросшей культуры P. multocida Aro/A готовили с физиологическим раствором (рН 7,4) иммунизирующую дозу путем серийных десятикратных разведений. Количество микробных клеток в бактериальных суспензиях определяли по стандарту мутности (10 Ед. ГИСК им. Тарасевича).

Животным вводили подкожно в подмышечную область в дозе 2,5×107 м.к. После вакцинации наблюдали за клиническим состоянием животных, измеряли температуру тела и учитывали местные поствакцинальные реакции.

Для гематологических исследований использовали анализатор фирмы ABACUS JUNIOR Vet, производства Германия. Кровь для исследования забирали в вакуутайнеры содержащие ЭДТА. Затем в течение одного часа определяли: число лейкоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов, CD4+ Т-хелп., CD8+Т-супр., CD3+ Т-лимф., CD20+В-лимф.

Для изучения влияния P. multocida Aro/A на гематологические и иммунологические показатели крови животных опытных и контрольных групп была отобрана цельная кровь и сыворотка крови до иммунизации, затем через 7, 14, 21, 28 и 42 сутки после вакцинации.

Результаты исследования и их обсуждение

По результатам исследования иммунного фона сывороток крови у не иммунизированных овец и коз показало что, они не имеют специфических антител к возбудителю пастереллеза.

Результаты изучения влияния иммунизации животных штаммом P. multocida Aro/A на иммунологические и гематологические показатели крови животных представлены на рис. 1 и в ниже представленной таблице.

При введении живых микробных клеток невосприимчивость животных к P. multocida Aro/A возникало через 7-10 суток, что соответствует с данными литературы [6]. Представленные данные на рис. 1 свидетельствуют о том, что рост антител в сыворотках крови иммунизированных животных отмечался на 14 сутки после вакцинации, также активность в ИФА составляло 1:3200. В контрольной группе изменение в титрах антител не наблюдалось. Среднее значение сывороток крови животных на наличие специфических антител к антигенам P.multocida Aro/A представлены в рис. 1.

aliev1.wmf

Рис. 1. Оценка иммунногенной активности штамма P. multocida Aro/A в ИФА

aliev2.wmf

Рис. 2. Результаты термометрии после иммунизации мелкого рогатого скота штаммом P. multocida Aro/A

Общее состояние животных было удовлетворительное, отклонений со стороны работы пищеварительной, сердечно-сосудистой системы и органов дыхания выявлено не было, снижение аппетита не наблюдалось, животные хорошо принимали корм и воду. На месте введения наблюдалось небольшое покраснение, которое исчезло в течение двух суток.

Организм животного обладает высокой степенью саморегуляции для поддержания стабильной жизнедеятельности и физиологических показателей в пределах нормы. Отклонения температуры от нормы свидетельствуют о серьезных нарушениях в биохимических и биофизических процессах организма животного. На рис. 2, показаны результаты ежедневной ректальной термометрии животных.

Как видно из данных рис. 2, в контрольной группе и в группе иммунизированных животных резких отклонений от нормы не отмечено. Разница температуры тела между фоном и после иммунизации животных составило между (0,2 – 0,8) °С, пик термометрии достигало 40,1 °С. Последующие пять дней к концу эксперимента температура тела иммунизированных животных нормализовалась до пределов физиологической нормы.

Изменение картины периферической крови отражает функциональное сдвиги в различных органах и системах организма, поэтому ее изучение имеет важное значение для расшифровки иммуногенеза. В результате исследования периферической крови после иммунизации на 7 сутки наблюдалось увеличение количество лейкоцитов 8,0 ± 0,5 по сравнению с фоновым показателем. Динамика лейкоцитов на 14 сутки исследования показало увеличение, что составило 12,5 ± 2,0 %, а на 21 сутки исследования – 10,0 ± 2,0 % по сравнению с данными полученными на 7 сутки исследования. Количество палочкоядерных нейтрофилов (незрелых форм) увеличивается с 3,0 ± 1,0 % до 5,5 ± 1,0 %, при этом количество сегментоядерных (зрелых форм) нейтрофилов у животных уменьшается от 50,0 ± 6,0 % до 26,0 ± 2,0 % (таблица).

Результаты гематологического показателя периферической крови

Показатели

Фон

Сроки наблюдения (сутки)

7

14

21

28

42

Лейкоциты, %

6,0-12,0

8,0 ± 0,5

12,5 ± 2,0

10,0 ± 2,0

5,0 ± 2,0

6,0 ± 2,0

Нейтрофилы п/я, %

0,5-4,0

3,0 ± 1,0

5,0 ± 1,0

4,0 ± 1,0

5,5 ± 1,0

5,0 ± 1,0

Нейтрофилы с/я, %

28,0-56,0

50,0 ± 6,0

36,0 ± 2,0

36,0 ± 2,0

34,0 ± 2,0

26,0 ± 2,0

Моноциты, %

2,5-6,0

2,5 ± 1,0

4,0 ± 1,0

3,0 ± 2,0

1,5 ± 1,0

2,0 ± 1,0

Лимфоциты, %

32,0-68,5

28,0 ± 8,0

24,0 ± 6,0

67,0 ± 2,0

42,0 ± 2,0

30,0 ± 1,0

CD4+ Т-хелп., %

24,0 ± 1,0

25,0 ± 0,2

25,0 ± 2,0

24,5 ± 0,5

20,0 ± 1,0

20,0 ± 1,0

D8+ Т- супр., %

28,0 ± 0,03

20,0 ± 0,20

17,0 ± 1,0

22,0 ± 1,0

22,0 ± 0,03

20,0 ± 2,0

CD3+ Т-лимф., %

49,0 ± 0,50

53,0 ± 2,0

50,0 ± 0,01

54,0 ± 1,0

54,0 ± 1,00

55,0 ± 0,10

CD20+В-лимф., %

8,0 ± 1,0

7,5,0 ± 1,0

8,0 ± 0,5

9,0 ± 1,0

8,0 ± 1,00

6,0 ± 1,00

Отмечается повышение лимфоцитов, что составляет 67,0 ± 10,0 %, этот показатель был два раза выше, чем у животных в контрольной группе. Число лимфоцитов у животных в контрольной группе составляло 32,0-6,5 %, на 7 и 14 сутки снизилось с 32,0 ± 68,5 % до 24,0 ± 6,0 % и наблюдается существенное повышение уровня количеств лимфоцитов в крови (67,0 ± 2,0) на 21 сутки. На 28-42 сутки количество палочкоядерных нейтрофилов увеличилось, а количество сегментоядерных нейтрофилов продолжало снижаться. Все гематологические показатели крови на 42 сутки были в пределах физиологической нормы, кроме лейкоцитов, лимфоцитов и моноцитов.

В результате эксперимента наблюдалось снижение лейкоцитов, моноцитов, лимфоцитов, CD4+ Т-хелперов и CD20+В-лимфоцитов.

Заключение

Анализируя данные полученные в ходе эксперимента при применении P. multocida Aro/A на мелких рогатых скотах установлена динамика: накопление титра антител в ИФА с 14 суток 1:800 до 42 суток 1:3200 и наблюдается увеличение количество лейкоцитов, моноцитов, лимфоцитов, CD3+ Т-лимф, CD20+В-лимф. в крови иммунизированных животных, которое достигает своего максимума к 14-21-му дню опыта. Данные показатели крови по нашим исследованиям были близки к показателям крови, полученным зарубежными исследователями [6]. У вакцинированных животных к концу срока наблюдения регистрировали увеличение в крови лимфоцитов (лимфоцитоз) и моноцитов (моноцитоз), что говорит о формировании противопастереллезного иммунитета у иммунизированных животных и показывает, что штамм P. multocida Aro/A вызывает потенциально протективный эффект в крови у животных и можно использовать при разработке вакцины против пастереллеза.

Резюмируя вышеуказанное следует, отметить, что при иммунизации овец и коз штаммом P. multocida Aro/A наблюдается активация как гуморального, так и клеточного иммунитета.


Библиографическая ссылка

Алиева А.Б., Нурпейсова А.С., Кайсенов Д.Н., Кошеметов Ж.К., Сугирбаева Г.Д., Касенов М.М., Далбаев Н.К., Баракбаев К.Б. ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ У МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ГЕНЕТИЧЕСКИ АТТЕНУИРОВАННОГО ШТАММА PASTEURELLA MULTOCIDA ARO/A // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2017. – № 4-3. – С. 539-542;
URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=11510 (дата обращения: 25.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074