Научный журнал
Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований
ISSN 1996-3955
ИФ РИНЦ = 0,564

РЕАКТИВНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ МУКОЗАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ ПРИ ВЕТРЯНОЙ ОСПЕ У ДЕТЕЙ В ПЕРИОД ПЕРВОГО ДЕТСТВА

Куркин А.В. 1 Рыбалкина Д.Х. 2 Барышев Б.Б. 1
1 Медицинский университет Астана
2 Медицинский университет Караганды
Проведен сравнительный анализ цитограмм и морфометрических параметров мукозальных эпителиоцитов в интактных от высыпаний участках слизистой оболочки ротовой полости в области щек при ветряной оспе у детей в период первого детства. Показано, что у больных детей мазки мукозального эпителия ротовой полости при ветряной оспе отличаются обильной клеточностью в связи со сравнительно большим содержанием лейкоцитов и увеличением числа эпителиоцитов с изменениями в клетках. Повышено содержание обсеменённых микробной флорой эпителиоцитов, дистрофически изменённых клеток с крупно- и мелкокапельной вакуолизацией цитоплазмы, Цитопатическое действие вируса приводит к гибели эпителиоцитов путём кариолизиса, кариопикноза и кариорексиса. Возрастает уровень деструкции и появляется воспалительно-деструктивный показатель. Также наблюдается омоложение эпителиального состава буккального мазка, что характеризуется возрастанием показателя левого сдвига: повышается процент клеток третьей стадии и появляются эпителиоциты первой и второй. У больных детей происходит снижение показателя дифференцировки эпителиоцитов слизистой оболочки полости рта: снижается число клеток пятой стадии и роговых чешуек. Изменяются цитометрические показатели эпителиоцитов различных стадий развития: снижается площадь клеток, увеличивается площадь ядер и, соответственно, возрастает ядерно-цитоплазматическое отношение. Разрыхление клеточного пласта, нарушение межклеточных связей приводят к появлению в мазке многоклеточных эпителиальных комплексов, которые в цитограмме здоровых детей не определяются.
цитология
буккальный эпителий
ветряная оспа
дети
1. Пальцев М.А., Кветной И.М., Полякова В.О., Линькова Н.С., Костылев А.В. Сигнальные молекулы в буккальном эпителии: оптимизация диагностики социально значимых заболеваний // Молекулярная медицина. 2012. № 4. С. 18–23.
2. Полякова В.О., Пальцева Е.М., Крулевский В.А. Буккальный эпителий. Новые подходы к молекулярной диагностике социально значимой патологии. СПб.: Изд-во Н-Л, 2015. 128 с.
3. Юй Р.И. Цитологический анализ слизистой оболочки полости рта как достоверный критерий оценки её гистофизиологии, патологии и эффективности лечения // Вестник КазНМУ. 2006. № 1. С. 299–314.
4. Доменюк Д.А., Давыдов Б.Н., Ведешина Э.Г., Ивченко Л.Г. Отклонения цитологических и функциональных показателей буккального эпителия у больных с аутоиммунным сахарным диабетом // Научно-практический журнал Институт стоматологии. 2017. № 3 (76). С. 74–77.
5. Мейер А.Б. Генотоксические и цитотоксические в буккальных эпителиоцитах детей, проживающих в экологически различающихся районах Кузбасса // Цитология. 2010. Т. 52. № 4. С. 305–310.
6. Куркин А.В., Рыбалкина Д.Х. Реактивность буккального эпителия у детей // Морфология. 2011. Т. 139. № 1. С. 60–63.

Буккальный эпителий является частью мукозальной системы, которая характеризуется высокой чувствительностью к действию факторов внешней и внутренней среды. Он играет важную роль в диагностике социально значимых заболеваний [1, 2]. Буккальные эпителиоциты могут быть индикатором местных и общих нарушений гомеостаза у взрослых и детей [3–5], Представляет практический интерес изучение показателей дифференцировки и реактивности буккального эпителия у детей при ветрянной оспе. Это острое инфекционное вирусное заболевание, характеризующееся появлением на коже и слизистых оболочках мелких пузырьков с прозрачным содержимым. Формирование ветряночного пузырька начинается с поражения клеток шиповатого слоя многослойного эпителия. Пораженные клетки подвергаются баллонной дистрофии, вплоть до полного некроза. Нами показаны изменения в цитограммах мазков буккального эпителия у детей разного возраста в норме и при ветряной оспе [6]. Однако в предыдущих работах не приводится анализ цитометрических параметров эпителиоцитов.

Цель исследования: изучение цитометрических параметров и реактивности мукозальных эпителиоцитов ротовой полости при ветряной оспе у детей в период первого детства.

Материалы и методы исследования

Материалом для исследований послужили мазки со слизистой оболочки выстилающего типа от 56 здоровых (контрольная группа) и 29 больных ветряной оспой детей легкой и средней степени тяжести в возрасте от 3 до 7 лет. До забора материала дети прополаскивали ротовую полость физиологическим раствором. Соскоб эпителия получали пластиковым шпателем со слизистой щеки. У детей с заболеванием слизистая оболочка отличалась незначительной гиперемией, иногда имели место энантемы. Соскоб эпителия проводили в интактных участках. Приготовленные мазки высушивали, фиксировали в спирт-ацетоне (1:1) в течение 5 мин и окрашивали метиленовым синим по Май-Грюнвальду (15 мин) и азур-эозином по Романовскому – Гимза (30 мин). На мазках из расчета на 1000 клеток определяли в процентах эпителиоциты различных стадий дифференцировки, нейтрофилы и лимфоциты. мононуклеары с цитоплазмой, голоядерные мононуклеары. По данным цитограмм изучали процессы дифференцировки буккальных эпителиоцитов. Для этого использовали показатель дифференцировки клеток, который представляет собой сумму клеток соответствующих стадий в процентах с учётом их цифровых обозначений. С целью изучения процессов ороговения эпителиальных клеток применяли показатель ороговения эпителиальных клеток, который равен отношению количества безъядерных пластинок к общему числу эпителиальных клеток в процентах. Для выявления омоложения клеточного состава определяли показатель левого сдвига, который равен отношению суммы базальных и парабазальных клеток к общему числу эпителиоцитов. Для количественной оценки цитологических изменений в эпителии применяли показатели деструкции и воспалительно-деструктивный индекс, который представляет собой отношение суммы количества лейкоцитов, голоядерных моноцитов и фибробластоподобных клеток к количеству неизменённых моноцитов. Цитометрически с помощью комплекса микроскоп – видеокамера – процессор определяли площади эпителиоцитов, ядер и ядерно-цитоплазматичекое отношение. Статистический анализ полученных данных проводили с помощью профессионального пакета статистических программ Statsoft «Statistica-6», методами вариационной статистики.

Результаты исследования и их обсуждение

Мазок у детей от 3 до 7 лет при ветряной оспе отличается умеренной или обильной клеточностью (более 8 клеток в поле зрения микроскопа при увеличении х600), в отличие от нормы, где клеточность мазка только умеренная (не более 5–6 клеток в поле зрения). Фон препаратов при заболевании варьирует от прозрачного до слегка эозинофильного, в норме фон мазка прозрачный. Среди клеток различают эпителиоциты и лейкоциты. Количество эпителиальных клеток преобладает над неэпителиальными и составляет в норме 94,7 ± 1,02 %. В норме среди эпителиоцитов в мазке выделяют клетки 3-й, 4-й, 5-й и 6-й стадий развития.

При ветряной оспе у детей в период первого детства в мазке появляется незначительное количество 0,1 ± 0,04 % базальных клеток, которые соответствуют 1-й стадии дифференцировки, среди эпителиоцитов их число равно 0,2 ± 0,05 %. В норме эти клетки в соскобе отсутствуют. Они имеют округлую форму и интенсивно окрашенную базофильную цитоплазму. Ядра в них относительно крупные, тёмно-фиолетового цвета. Процентное содержание буккальных эпителиоцитов 2-й стадии дифференцировки, которые в нормальной цитограмме также отсутствуют, в мазке составляет 1,6 ± 0,24 %, среди эпителиоцитов их количество равно 2,4 ± 0,27 %. Цитоплазма клеток сохраняет базофильность, но менее интенсивной окраски, чем в эпителиоцитах 1-й стадии дифференцировки. Нередко наблюдается неровность контуров цитоплазмы до образования вытянутых участков. Ядро в эпителиоцитах также относительно крупное и тёмно-фиолетовое. Эпителиоциты 1-й стадии имеют небольшую площадь, которая в среднем равна 159 ± 2,8 мкм2. Средняя площадь ядра базальных клеток составляет 98 ± 1,3 мкм2. Ядерно-цитоплазматическое отношение данных клеток в среднем больше единицы (0,64 ± 0,097). Площадь клеток 2-й стадии дифференцировки в среднем составляет 745 ± 48,7 мкм2, то есть происходит её увеличение, по сравнению с клетками 1-й стадии (р < 0,001). Площадь ядра в среднем составляет 89 ± 4,1 мкм2. ЯЦО эпителиоцитов 2 степени дифференцировки составляет в среднем 0,15 ± 0,015.

Содержание клеток 3-й стадии дифференцировки по отношению к норме увеличивается почти в 7 раз и составляет 11,5 ± 0,89 %, среди эпителиальных клеток их доля равна 17,9 ± 1,06 %. В норме содержание клеток 3-й стадии дифференцировки в цитограмме незначительно и составляет 2,7 ± 0,53 %, среди эпителиоцитов равно 2,9 ± 0,53 %. Площадь клеток 3-й стадии дифференцировки составляет в среднем 2167 ± 68,7 мкм2, без значительных различий по сравнению с нормой (2363 ± 42,5 мкм2). Площадь ядер в среднем равняется 111 ± 1,7 мкм2, против 106 ± 0,9 мкм2 незначительно увеличиваясь в размерах от нормы (р < 0,05). Ядерно-цитоплазматическое отношение эпителиоцитов 3-й стадии в среднем равняется 0,06 ± 0,002, против 0,05 ± 0,001, также несильно увеличиваясь по отношению к норме (р < 0,01). Эти клетки отличаются овальной формой, цитоплама в них умеренно-базофильна, в ядрах хроматин. нежносетчатого характера. В эпителиоцитах под воздействием вируса ветряной оспы иногда выявляются морфологические проявления цитопатического действия, такие как вакуолизация ядра и цитоплазмы, внутриядерные эозинофильные и базофильные цитоплазматические включения. Обнаруживается микробная адгезия эпителиоцитов 3-й стадии от незначительного количества бактериальных тел на поверхности клетки до множественного, что в норме не наблюдается. Этот факт, по-видимому, отражает активность воспалительного процесса в слизистой ротовой полости.

Процентное содержание в мазках, у детей от 3 до 7 лет, эпителиоцитов 4-й стадии дифференцировки равняется 21,3 ± 1,90 %, что ниже нормы (р < 0,001), среди эпителиоцитов их количество составляет 33,1 ± 1,90 %. Число эпителиоцитов 4-й стадии в цитограмме в норме равно 31,1 ± 1,70 %, среди эпителиоцитов 33,7 ± 1,70 %. Площадь клеток 4-й стадии имеет среднее значение 2102 ± 44,6 мкм2, против 2549 ± 13,4, что меньше нормы. Площадь ядер в среднем равняется 94 ± 1,1 мкм2, незначительно увеличиваясь в объёме от нормы (88 ± 0,3 мкм2). Ядерно-цитоплазматическое отношение в среднем составляет 0,08 ± 0,001, сохраняя тенденцию увеличения нормальных параметров (0,04 ± 0,001. При ветряной оспе клетки сохраняют нормальный светло-базофильный тон цитоплазмы. В них также проявляется крупнокапельная вакуолизация цитоплазмы. Появляются двуядерные эпителиоциты и клетки с перетяжкой ядра, что, возможно, указывает на усиление процессов пролиферации.

Количество эпителиоцитов 5-й степени дифференцировки в цитограмме больных детей становится значительно меньше, чем у здоровых (р < 0,001), в среднем оно составляет 28,2 ± 1,39 %, среди эпителиоцитов их содержание равно 43,8 ± 2,89 %. В норме число клеток 5-й стадии превалирует в цитограмме и составляет 58,0 ± 2,35, среди эпителиоцитов – 61,2 ± 2,12 %. Уменьшение числа поверхностных эпителиоцитов свидетельствует о замедлении процессов дифференцировки клеток. Существенная разница между долевым содержанием эпителиальных клеток в цитограмме и среди эпителиоцитов объясняется значительным увеличением неэпителиального компонента цитограммы, по сравнению с нормой

Площадь клеток 5-й стадии составляет в среднем 1830 ± 40,3 мкм2, против 2511 ± 9,8 мкм2, что достоверно ниже, чем в норме (р < 0,001). Площадь ядер в среднем имеет значение 68 ± 1,0 мкм2, против 67 ± 0,2 мкм2, не отличаясь от нормы. Ядерно-цитоплазматическое отношение составляет в среднем 0,04 ± 0,001, против 0,03 ± 0,001, сохраняя направленность превышения показателей нормы. Клетки имеют полигональную форму со слабобазофильной до оксифильной цитоплазмой. Ядра поверхностных клеток приобретают неправильную форму, всё более уменьшаясь в размере. При этом выявляются эпителиоциты с пикнотичными, гиперхромными ядрами, так как максимальная оптическая плотность ядер при ветряной оспе выше, чем в норме.

Процентное соотношение клеток 6-й степени дифференцировки в мазке составляет 1,7 ± 0,14 %, что ниже нормы (р < 0,001). Среди эпителиоцитов их число равно 2,6 ± 0,14 %. Процент клеток в норме составляет 2,1 ± 0,27, среди эпителиоцитов равен 2,2 ± 0,22 %. Они имеют неправильную форму. Цитоплазма безъядерных пластинок окрашивается в серый или белесый цвет. На месте ядра нередко видна полость. Средняя площадь клеток 6-й степени дифференцировки составляет 1379 ± 15,8 мкм2, против 1246 ± 8,6 мкм2 в норме. Адгезированные микробами клетки 3-й, 4-й и 5-й степеней дифференцировки в препаратах составляют 12,1 ± 0,24 %, это выше нормы (р < 0,001). У здоровых детей в 7,9 ± 0,51 % наблюдается микробная адгезия эпителиальных клеток 4–5 стадий дифференцировки. Бактерии имеют округлую форму с диаметром около 1 мкм и фиолетовую окраску, располагаясь гроздьями или в виде цепочек Увеличение процентного содержания обсеменённых эпителиоцитов в мазке у детей в период первого детства нельзя однозначно объяснить неудовлетворительной гигиеной полости рта во время заболевания. Выявление значительного числа бактерий, прикреплённых к поверхности эпителиоцитов, возможно подтверждает подавление активности обычных механизмов очищения слизистой оболочки полости рта. При этом микробы могут нарушить целостность эпителия, внедриться в него, и, действуя своими токсинами, усугубить цитопатическое воздействие вируса.

Дистрофически изменённые клетки с крупно- и мелкокапельной вакуолизацией цитоплазмы составляют 0,7 ± 0,10 %, против 0,2 ± 0,08 %, что выше нормы в 2,5 раза. Содержание фагирующих клеток равно 1,0 ± 0,05 %, против 0,2 ± 0,01 %. Цитопатическое действие вируса приводит к гибели эпителиоцитов путём кариолизиса, кариопикноза и кариорексиса. Кариологические данные цитограммы, указывающиена кариотоксическое действие вируса ветряной оспы, имеют следующие значения: кариолизис и кариорексис, соответственно 22,6 ± 0,21 ‰ и 3,2 ± 0,10 ‰; вакуолизация ядра в 4,9 ± 0,04 ‰; в 6,5 ± 0,10 ‰ встречаются двуядерные эпителиоциты и в 4,9 ± 0,04 ‰ клетки с перетяжкой ядра. Кариопикноз наблюдается в 26,9 ± 0,28 ‰.

Кроме различных типов эпителиальных клеток в препаратах определяются нейтрофилы, лимфоциты и макрофаги. Последние составляют 35,8 ± 0,33 %, против 5,3 ± 0,29 % у здоровых, что в 6,5 раз выше нормы. Из лейкоцитов в цитограмме преобладают нейтрофилы в 24,4 ± 0,98 %, против 3,3 ± 0,12 %, среди которых большое количество разрушенных клеток. У нейтрофилов могут отмечаться проявления фагоцитарной функции – от единичных бактерий в цитоплазме до цитоплазмы, заполненной бактериями.

Тропизм вируса ветряной оспы к клеткам моноцитарно-макрофагальной системы вызывает изменение функциональной активности макрофагов, появляются признаки выраженной мембранной активности. Среди моноцитов (5,8 ± 0,46 %), которые в норме составляют 1,1 ± 0,09 %, нередко встречаются голоядерные клетки, лишённые цитоплазмы, и балонирующие мононуклеары с ярко выраженной мелко- и крупнокапельной вакуолизацией цитоплазмы и ядра.

3аключение

В период первого детства мазки мукозального эпителия ротовой полости при ветряной оспе отличаются от нормы обильной клеточностью в связи со сравнительно большим содержанием лейкоцитов и увеличением числа эпителиоцитов с деструктивными изменениями в клетках. Повышается уровень деструкции и появляется воспалительно-деструктивный показатель. Также наблюдается омоложение эпителиального состава буккального мазка,что характеризуется возрастанием показателя левого сдвига: повышается процент клеток третьей стадии и появляются эпителиоциты первой и второй. У больных детей происходит снижение показателя дифференцировки эпителиоцитов слизистой оболочки полости рта: снижается число клеток пятой стадии и роговых чешуек. Изменяются цитометрические показатели эпителиоцитов различных стадий развития: снижается площадь клеток, увеличивается площадь ядер и, соответственно, возрастает ядерно-цитоплазматическое отношение. Разрыхление клеточного пласта, нарушение межклеточных связей приводят к появлению в мазке многоклеточных эпителиальных комплексов, которые в цитограмме здоровых детей не определяются.


Библиографическая ссылка

Куркин А.В., Рыбалкина Д.Х., Барышев Б.Б. РЕАКТИВНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ МУКОЗАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ ПРИ ВЕТРЯНОЙ ОСПЕ У ДЕТЕЙ В ПЕРИОД ПЕРВОГО ДЕТСТВА // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2019. – № 7. – С. 56-59;
URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=12799 (дата обращения: 26.06.2022).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074