Научный журнал
Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований
ISSN 1996-3955
ИФ РИНЦ = 0,564

ВЛИЯНИЕ ПЕПТИДНОГО ТИМОМИМЕТИКА НА ТЕЧЕНИЕ ЭРОЗИВНОГО ГАСТРИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Щербак В.А. 1
1 ГБОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия»
Цель состояла в изучении влияния вилона на течение эрозивного гастрита и иммунный ответ в эксперименте. Исследования проведены на 58 беспородных белых крысах-самцах (возраст 3-5 мес.) весом 160 – 200 гр. Для создания эрозивного процесса в слизистой желудка использовали острый иммобилизационный стресс. Животные были разделены на 2 группы: 1- получала физраствор (1,0 мл внутримышечно), 2 – вилон в дозе 10 мкг. Вилон или физраствор вводили 1 раз в сутки на протяжении 10 дней подряд. Материал забирали на 2, 9 и 21 сутки эксперимента. Острый иммобилизационный стресс сопровождался значительными нарушениями системы иммунитета. Наибольшие изменения наблюдались у крыс, получавших физраствор. Если же в комплекс лечения включали вилон, то отклонения от исходных величин были менее выражены, а нормализация изучаемых показателей наступала значительно раньше. Острый иммобилизационный стресс у крыс характеризуется развитием эрозий и иммунными нарушениями в слизистой оболочке желудка. Тимомиметик вилон ликвидирует нарушения, вызванные стрессом, и оказывает протекторное действие при введении его до стресса.
стресс
пептиды
тимомиметик
вилон
крысы
желудок
иммунитет
протекция
1. Забродин О.Н. Роль адренергических механизмов в развитии и заживлении экспериментальных нейрогенных повреждений слизистой желудка (фармакологический анализ): Автореф. дис. …д-ра мед. наук. – Л., 1982. – 42 с.
2. Лиханов И.Д., Цепелев В.Л. Синдром системного воспалительного ответа у больных с перитонитом и возможности его коррекции // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). – 2007. – Т. 68, № 1. – С. 21–23.
3. Поливанова Т.В. Гистоархитектоника коллагеновых волокон в слизистой оболочке желудка у детей с синдромом диспепсии // Забайкальский медицинский вестник. – 2015. – № 2. – С. 94–98.
4. Степанов А.В., Цепелев В.Л. Влияние синтетических пептидов сумки Фабрициуса на функциональную активность макрофагов // Забайкальский медицинский вестник. – 2014. – № 2. – С. 44–47.
5. Степанов А.В., Цепелев В.Л. Иммуностимулятор из центрального органа гумораль­ного иммунитета – сумки Фабрициуса // Сибирский медицинский журнал. – 2013. – № 2. – С. 32–34.
6. Степанов О.Г. Синдром раздраженного кишечника. – Челябинск: Пирс, 2011. – 159 с.
7. Хавинсон В.Х., Соловьев А.Е., Тарновская С.И., Линькова Н.С. // Механизм биологической активности коротких пептидов: проникновение в клетку и эпигенетическая регуляция экспрессии генов //Успехи современной биологии. – 2013. – Т. 133, № 3. – С. 310–316.
8. Цепелев В.Л., Степанов А.В. Влияние регуляторных пептидов на продукцию провоспалительных цитокинов // Забайкальский медицинский вестник. – 2015. – № 2. – С. 147–150.
9. Щербак В.А. Динамика интерлейкинов при лечении детей, больных хроническим гастродуоденитом // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. – 2003. – № 1. – С. 120–121.
10. Щербак В.А. Роль иммуномодуляторов в комплексной терапии детей с хроническим гастродуоденитом, ассоциированным с Helicobacter pylori // Вопросы практической педиатрии. – 2008. – Т. 3, № 1. – С. 30–35.
11. Щербак В.А. Современные проблемы детской гастроэнтерологии // Забайкальский медицинский вестник. – 2012. – № 2. – С. 128–137.
12. Щербак В.А. Терапия Helicobacter pylori-ассоциированного эрозивного гастродуоденита у детей с использованием цитаминов // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. – 2004. – № 1. – С. 180.
13. Щербак В.А., Витковский Ю.А., Кузник Б.И. Иммунные нарушения и обоснование их коррекции при хроническом гастродуодените у детей // Медицинская иммунология. – 2008. – Т. 10, № 1. – С. 59–66.
14. Щербак В.А., Хышиктуев Б.С., Аксенова Т.А., Малежик Л.П. Влияние вентрамина на перекисное окисление липидов у детей, больных эрозивным гастродуоденитом // Клиническая лабораторная диагностика. – 2005. – № 1. – С. 12–14.
15. Shcherbak V.A. Lymphocyte-thrombocyte rosette adhesion in children with chronic gastritis // Journal of Thrombosis and Haemostasis. – 2005. – Vol. 3, Suppl. 1. – P. 1559.

К настоящему времени сложилась общепринятая точка зрения о том, что стресс-реакции служат одной из причин развития эрозивно-язвенных процессов в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ), ибо этот симптом включен в классическую триаду общего адаптационного синдрома Г. Селье. При стрессе активируется реакция гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы, сопровождающаяся повышенным выбросом в кровь гормонов надпочечников. Это приводит к нарушениям тех локальных процессов в слизистой оболочке желудка (СОЖ), которые обеспечивают поддержание ее целостности, преимущественно иммунной системы.

Цель исследования состояла в изучении влияния вилона на течение эрозивного гастрита и иммунный ответ в эксперименте.

Материалы и методы исследования

Исследования проведены на 58 беспородных белых крысах-самцах (возраст 3–5 мес.) весом 160 – 200 гр. С целью создания эрозивного процесса в слизистой желудка использовали острый иммобилизационный стресс (ОИС) по О.Н. Забродину [1]. За сутки до эксперимента крысы лишались пищи при свободном доступе к воде. Затем животных фиксировали на деревянных станках в положении на спине, привязывая конечности. Для профилактики некрозов через каждые 2 часа конечность (последовательно по одной) освобождалась от лигатур на 5 минут. Фиксация продолжалась 24 часа. После снятия со станков животные были разделены на 2 группы: 1 – получала физраствор (1,0 мл внутримышечно), 2 – вилон в дозе 10 мкг. Пептидный тимомиметик вилон (Lys-Glu) получен путем направленного химического синтеза на основании аминокислотного анализа комплексного препарата тимуса – тималина [7]. Вилон или физраствор вводили 1 раз в сутки на протяжении 10 дней подряд. Материал для исследования забирали на 2, 9 и 21 сутки эксперимента. Сравнение проводили с интактными крысами. Для изучения протекторного действия вилон вводили 1 раз в сутки в течение 3 дней, предшествующих эксперименту, и во время стресса каждые 6 часов по 10 мкг внутримышечно.

Результаты исследования и их обсуждение

В первые сутки после ОИС у крыс наблюдалась общая реакция в виде заторможенности, снижения аппетита, жажды, у некоторых животных отмечалось затруднение движений вследствие синюшности и отека дистальных отделов конечностей.

Гистологическое строение органов животных контрольной группы соответствовало вариантам нормы. Стенка желудка и двенадцатиперстной кишки интактных животных построена из 4 оболочек – слизистой, подслизистой основы, мышечной и серозной. Поверхность слизистой оболочки неровная, имела многочисленные поля, ямки и преимущественно продольные складки, особенно по малой кривизне. Микроскопически слизистая оболочка желудка состояла из эпителия, соединительнотканной основы и мышечной пластинки, образованной гладкой мышечной тканью.

На вторые сутки после ОИС при макроскопическом исследовании внутренней поверхности желудка и ДПК отмечены общие и местные изменения. Общие изменения наблюдались на всем протяжении слизистой в виде отека и усиления кровенаполнения сосудов. Выраженность их варьировала от гиперемии до геморрагического пропитывания СОЖ.

Местные изменения были представлены эрозиями линейной или округлой формы длиной от 1 до 15 мм, шириной 0,5–2 мм, располагающимися на вершинах складок. Эрозии были заполнены геморрагическим содержимым черного цвета, не смывающимся потоком воды. Наиболее часто эрозии формировались в антральном отделе желудка.

Максимальная интенсивность изменений наблюдалась на вторые сутки после иммобилизации. Число эрозивных поражений было примерно одинаковым и составляло в среднем на одно животное 8,80 ± 0,37 в первой группе и 7,40 ± 0,24 во второй (табл. 1).

Положительным результатом действия вилона явилась наименьшая поражаемость СОЖ эрозиями, ибо эрозии в этой группе регистрировались в 82,3 % случаев, тогда как в первой – в 90,7 %. На 9 день количество острых эрозий снижалось во второй группе до 1,60 ± 0,67 на одно животное, в первой – до 5,4 ± 1,12. Поражаемость эрозиями слизистой оболочки желудка крыс второй группы на 9 день после ОИС составила 46,2 %, тогда как в первой группе она достигала 77,4 %. На 21 день у животных, леченных вилоном, эрозивных поражений желудка не отмечено, а в 1 группе они сохранялись в 8,7 % случаев в виде единичных эрозий размером 1–3 мм в стадии заживления. Таким образом, у крыс, получавших вилон, наблюдалось ускорение репаративной регенерации СОЖ, что выражалось более быстрой эпителизацией эрозивных дефектов.

С целью выявления протекторных свойств вилона его предварительно вводили крысам в дозе 10 мкг 1 раз в сутки внутримышечно в течение 3 дней до иммобилизации и через каждые 6 часов (всего 4 раза) во время ОИС. Контрольной группой служили крысы, получавшие физраствор. Результаты этой серии опытов свидетельствовали о том, что вилон обладает выраженным протекторным действием, ибо его предварительное введение резко снижало поражаемость СОЖ крыс после ОИС.

Эрозии в опытной группе зарегистрированы в 61,7 % случаев, а в контрольной группе в 86,6 %. Кроме того, у экспериментальных животных реже формировались крупные эрозии. Отмечено также меньшее количество эрозий в среднем на одно животное: в экспериментальной группе оно составило 1,5 ± 0,9, а в контрольной 9,7 ± 0,4.

При микроскопическом исследовании желудка и двенадцатиперстной кишки на вторые сутки после ОИС выявлены однотипные деструктивно-воспалительные изменения слизистых оболочек у животных обеих групп. Несмотря на большое количество эрозивных поражений, все они характеризовались относительно малой глубиной распространения, не проникая в подслизистую и мышечную оболочки.

Таблица 1

Количество острых эрозий слизистой оболочки желудка у крыс в различные сроки после ОИС (M ± m)

День эксперимента

Крысы, получавшие физраствор

(1 группа)

Крысы, получавшие вилон

(2 группа)

2 день

8,80 ± 0,37 (n = 5)

7,40 ± 0,24 (n = 5) р > 0,05

9 день

5,40 ± 1,12 (n = 6)

1,60 ± 0,67 (n = 6) р < 0,05

21 день

1,50 ± 0,50 (n = 6)

0 ± 0 (n = 5) р < 0,05

Протекторное действие

9,67 ± 0,42 (n = 6)

1,16 ± 0,40 (n = 6) р < 0,001

Примечание. р –значимость различий по сравнению с крысами, получавшими физраствор.

Таблица 2

Толщина слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки крыс в разные сроки после острого иммобилизационного стресса (М ± m, мкм)

Условия опыта

Фундальный отдел желудка

Антральный отдел желудка

Двенадцатиперстная кишка

Интактные животные

(n = 6)

582 ± 22

598 ± 12

714 ± 16

Вторые сутки

1 группа

(n = 6)

742 ± 15

р1 < 0,05

759 ± 21

p1 < 0,05

882 ± 17

р1 < 0,05

2 группа

(n = 7)

731 ± 19

р1 < 0,05

p2 < 0,01

744 ± 16

p1 < 0,05

p2 < 0,01

868 ± 19

p1 < 0,05

p2 < 0,01

Девятые сутки

1 группа

(n = 5)

628 ± 14

р1 < 0,05

651 ± 19

р1 < 0,05

813 ± 24

р1 < 0,05

2 группа

(n = 7)

594 ± 17

p1 < 0,05

p2 < 0,01

616 ± 11

p1 < 0,05

p2 < 0,01

752 ± 14

p1 < 0,05

p2 < 0,01

Двадцать первые сутки

1 группа

(n = 6)

607 ± 19

р1 < 0,05

627 ± 16

р1 < 0,05

745 ± 15

р1 < 0,05

2 группа

(n = 5)

594 ± 17

p1 < 0,05

p2 < 0,01

616 ± 11

p1 < 0,05

p2 < 0,01

752 ± 14

p1 < 0,05

p2 < 0,01

Протекторное действие

1 группа

(n = 6)

745 ± 20

р1 < 0,05

761 ± 19

р1 < 0,05

901 ± 18

р1 < 0,05

2 группа

(n = 6)

588 ± 19

p1 > 0,05

p2 < 0,01

608 ± 19

p1 > 0,05

p2 < 0,01

703 ± 24

p1 > 0,05

p2 < 0,01

Примечания. p1 – достоверность различий по сравнению с интактными крысами; p2 – значимость различий между группами, получавших вилон и физраствор.

Покровно-ямочный эпителий желудка был уплощен, почти кубической формы, местами слущен. Гистохимически в клетках покровно-ямочного и железистого эпителия выявлено некоторое уменьшение ШИК-позитивных веществ и рибонуклеопротеидов, что свидетельствовало о резком снижении регенераторных возможностей СОЖ после стресса. Железы менее извиты, общая поверхность желез на 1 мкм2 СОЖ снижена на 17,2 % (р < 0,001) в результате развившегося мукоидного отека СОЖ.

Стресс-реакция сопровождалась выраженными изменениями кровеносных сосудов в слизистой и подслизистой оболочках органов. Характерна артериальная и венозная гиперемия, большинство артерий имели расширенный просвет, внутренняя оболочка их утолщена, а периваскулярно отмечалось накопление ШИК-позитивных веществ. В сосудах микроциркуляторного русла наблюдалось очаговое утолщение стенок, расширение просвета и полнокровие капилляров и венул. Базальные мембраны сосудов микроциркуляторного русла утолщены.

В глубоких отделах собственной пластинки слизистой тела желудка и в составе ворсинок ДПК выявлялись реактивные изменения артериол и прекапиллярных артерий в виде появления светлых крупных ядер эндотелия. В субэпителиальных слоях и базальных отделах слизистой оболочки в просвете венул и мелких вен отмечался стаз клеток крови с образованием в некоторых сосудах пристеночных агрегатов из эритроцитов или формированием микротромбов. Это существенно затрудняло кровоток в терминальном отделе внутриорганного сосудистого русла и способствовало повышению сосудистой и тканевой проницаемости.

Микрососудистые нарушения и развитие отека ухудшали трофику СОЖ и ДПК. Интегральным количественным показателем трофических изменений слизистых оболочек считается их толщина. Сравнительная оценка этого параметра приведена в табл. 2.

Анализ данных морфометрического исследования показал достоверное увеличение толщины слизистых оболочек фундального, антрального отделов желудка и ДПК на вторые сутки после стресса у животных обеих групп вследствие экссудативно-воспалительной инфильтрации. Изучение динамики этого показателя свидетельствовало о последующем прогрессивном уменьшении толщины слизистых, причем во второй группе она практически достигала исходных величин уже к девятому дню, в то время как умеренно выраженная экссудативно-воспалительная инфильтрация у крыс первой группы сохранялась до 21 дня.

На вторые сутки после ОИС отмечалась выраженная инфильтрация собственной пластинки слизистой и подслизистой основы желудка и ДПК. Плотность клеточного инфильтрата у крыс, получавших вилон, была в 2–2,5 раза больше, чем у интактных животных, особенно в субэпителиальном слое и базальных отделах слизистой. Среди клеток преобладали мононуклеарные элементы, такие как нейтрофильные лейкоциты, плазматические клетки и особенно лимфоциты, которые диффузно пропитывали всю слизистую оболочку.

Микроскопические исследования подтвердили макроскопическую картину. При введении вилона быстрее нормализовалось количество соединительнотканных компонентов желудка и ДПК, что свидетельствует об ускорении процессов регенерации по сравнению с контролем. Толщина СО желудка и ДПК также быстрее достигала исходных цифр во второй группе животных.

Представленные данные свидетельствуют о том, что ОИС сопровождался значительными нарушениями системы иммунитета. Наибольшие изменения наблюдались у крыс, получавших физраствор. Если же в комплекс лечения включали вилон, то отклонения от исходных величин были менее выражены, а нормализация изучаемых показателей наступала значительно раньше.

Обращает внимание тот факт, что у крыс, получавших физраствор, т.е. служивших контролем, параметры иммунитета к 21 дню не достигали нормы. Полученные данные могут патогенетически обосновать продолжительность лечения у больных людей с эрозивным гастритом. Традиционное лечение обычно длится 21 день, что оказывается недостаточным для восстановления нарушенных показателей этих систем. Включение вилона позволит нормализовать иммунитет в эти сроки, следовательно, при использовании вилона будет сокращен койко-день, и улучшатся результаты лечения. Наши данные согласуются с мнением Т.В. Поливановой о важной роли коллагеновых волокон в патологии желудка у людей [3].

Важное значение в минимизации последствий негативного действия стресса играет предварительное введение вилона. Тимомиметик, примененный до ОИС, приводил к менее выраженным изменениям показателей иммунитета и липопероксидации. Это позволяет отнести вилон к цитопротекторам, способным защитить клетки от повреждающего действия стресса.

Таким образом, выявленные эффекты вилона имеют важное практическое значение. Основными этиологическими факторами развития эрозивных гастродуоденитов у людей являются инфекция H. pylori [9, 15] и стрессовые ситуации [6], а основным методом лечения больных – эрадикация H. pylori [12, 14]. Развитие хеликобактерной инфекции у людей сопровождается иммунодефицитом [10, 11, 13]. Использование антибактериальных средств, а в настоящее время рекомендуется четырехкомпонентная схема терапии для борьбы с H. pylori, может еще больше усугублять иммунодефицит и вызывать развитие антибиотикоустойчивых штаммов микроорганизма. Примененная нами модель гастрита у крыс показывает, что стресс приводит к выраженным эрозивным изменениям слизистой желудка. В современных условиях стрессовые ситуации у человека встречаются очень часто и являются одним из факторов, способствующих развитию эрозивно-язвенных изменений желудка. Это подтверждается и данными других авторов, получивших положительный эффект от применения вилона при других заболеваниях у людей [2]. Также перспективным представляется применение других иммуномодуляторов [4, 5, 8].

Назначение вилона людям, больным гастродуоденитом, имеет двоякое положительное действие. С одной стороны, он ликвидирует иммунные нарушения, а с другой – способствует лучшей переносимости стрессовых ситуаций. Это позволяет нам рекомендовать тимомиметик вилон для лечения эрозивных гастродуоденитов у человека и для предупреждения формирования иммунодефицита при различных заболеваниях, в том числе и эрозивных повреждениях слизистой оболочки верхних отделов пищеварительного тракта. На наш взгляд, хорошим дополнением, а иногда и альтернативой антибиотикам должна являться биорегулирующая терапия. Мы не отрицаем необходимость эрадикации H. pylori, а полученные данные позволяют создавать схемы терапии с включением, как антибиотиков, так и иммуномодуляторов.


Библиографическая ссылка

Щербак В.А. ВЛИЯНИЕ ПЕПТИДНОГО ТИМОМИМЕТИКА НА ТЕЧЕНИЕ ЭРОЗИВНОГО ГАСТРИТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2015. – № 12-4. – С. 672-676;
URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=8001 (дата обращения: 26.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074