Цель работы – оценить возможности применения традиционных гистологических и гистохимических методик к изолированным энтероцитам (ИЭ), широко используемым для изучения механизмов пристеночного пищеварения, трансмембранного переноса субстратов, а также для тестирования фармакологических препаратов. ИЭ, выделенные из фрагментов тощей кишки голодных крыс-самцов по методу А.М. Уголева (с использованием в качестве хелатора Са+2 и Mg+2 двунатриевой соли этилендиаминтетраацетата), окрашивали (в состоянии клеточной взвеси) гематоксилинами Эрлиха, Бемера, Шуенинова, фосфорно-вольфрамовым гематоксилином, кармином Шнейдера, а также ставили гистохимические реакции с янусом зеленым, на щелочную (ЩФ) и кислую (КФ) фосфатазы, аденозинтрифосфатазу (АТФ-аза), сукцинатдегидрогеназу (СДГ), лактатдегидрогеназу (ЛДГ) и гликозаминогликаны. Показано, что при окраске ИЭ гематоксилином Эрлиха структура клетки сохраняется, ядро окрашивается достаточно интенсивно, хорошо прослеживаются контуры щеточной каймы. При использовании гематоксилинов Бемера, Шуенинова, фосфорно-вольфрамового гематоксилина наряду с ядром диффузно окрашивается цитоплазма клеток. Хорошие результаты получены при окраске ядер кармином Шнейдера. При окраске ИЭ янусом зеленым, который, как известно, используется для прижизненного выявления митохондрий, последние обнаруживаются преимущественно в надъядерной зоне в виде узкой темной полосы. Попытка избирательно окрасить щеточную кайму ИЭ с помощью гистохимической реакции на гликозаминогликаны не дала положительного результата. Активность ЩФ и АТФ-азы выявляется в виде мелкой зернистости в зоне щеточной каймы, в то время как СДГ, ЛДГ и КФ – в апикальном полюсе и надъядерной области ИЭ. Необходимо отметить, что предварительная фиксация ИЭ в 5 % растворе формалина существенно не изменяет результаты окрашивания, однако удаление фиксатора путем центрифугирования и ресуспендирования приводит к деструкции многих клеток. В результате проведенного исследования можно прийти к заключению, что основные цитологические и цитохимические характеристики ИЭ и энтероцитов в составе эпителия интактной кишки принципиально сходны. Вместе с тем следует иметь в виду, что ИЭ как объект морфологического анализа не свободны от ряда недостатков, основным из которых является невозможность приготовления из клеточной взвеси стабильных препаратов. В то же время использование ИЭ для проведения количественных морфометрических и денситометрических исследований предпочтительнее по сравнению со срезами кишки, поскольку известно, что результаты измерений, полученных на цельных клетках, отличаются большей точностью и достоверностью.
Библиографическая ссылка
Цибулевский А.Ю. ТИНКТОРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ИЗОЛИРОВАННЫХ ЭНТЕРОЦИТОВ // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2015. – № 12-6. – С. 1144-1145;URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=8106 (дата обращения: 19.04.2024).