Научный журнал

Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований

ISSN 1996-3955

ИФ РИНЦ = 0,593

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Ивановский А.А. 1 Ивановский А.А. 2 Андреева С.Д. 2

---

1 ФГБНУ НИИСХ «Северо-Востока им. Рудницкого Н.В.»

2 ФГБОУ ВГСХА

В статье описан поиск естественного, экологически безопасного источника биологически активных веществ для последующего создания препарата – иммуностимулятора. Для дальнейшей работы на основании атоксичных свойств был отобран штамм Н-95 гриба D. Graminea. Индуцированный автолиз мицелия гриба не выявил повышения стимулирующей активности культуральной жидкости (КЖ). В результате проведенных исследований на беспородных белых мышах установлено, что подкожное введение КЖ в объеме 0,2, 0,3 и 0,5 мл белым мышам, не вызывает их гибели либо отклонений в клиническом состоянии. Определены оптимальные условия культивирования безопасного для теплокровных животных штамма гриба D. graminea и установлен химический состав культуральной жидкости и мицелия.

Статья в формате PDF

917 KB

иммуностимулятор

штамм

культура гриба

1. Билай В.И. Методы экспериментальной микологии. – Киев.: Наукова думка. – 1982. – С. 296–330.

2. Ревво А.В. Иммуностимулятор Достим // Ветеринария. – 1992. – № 1. – С. 31–32.

3. Технические условия № 9383-004-00479979-98, 25.12.1998 на препарат Субалин.

4. Ракова Г.Н. Применение микробных метаболитов в животноводстве. – Воронеж, 1985. – С. 24–35.

5. Ракова Г.Н., Коровкин И.Я. О влиянии препарата ПЭФАГ на рост поросят, переболевших диспепсией // Профилактика незаразных болезней сельскохозяйственных животных. – М, 1977. – С. 156–158.

6. Туманян М.А., Масякин Е.Б., Краснянская Т.А., Молчанова Е.Т. Изучение механизма действия бактериальных полисахаридов на естественную резистентность к инфекции // Труды НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. – М., 1988. – С. 18–21.

7. Филиппова Г.В., Разумовский П.Н., Евреев В.Н., Пушкаренко Я.Е. Действие полисахаридного комплекса актиномицетов на образование иммунных тел при вакцинации против бруцеллы // Известия АН МССР. – М., 1977. – 115 с.

Одними из источников получения иммуностимулирующих препаратов являются продукты метаболизма некоторых микроорганизмов. Так, например, в научно-внедренческом центре Игнатова созданы препараты Достим и Мастим, основой для получения которых послужили некоторые виды дрожжей [2, 3].

Из культуры микроскопического гриба Strеptococcus griseus получен биологически активный препарат ПЭФАГ, представляющий собой комплекс липидов этого микроба, обладающий высокой биологической активностью [4, 5].

Рядом исследователей установлено влияние полисахаридного комплекса, выделенного из актиномицетов на образование антител в организме животных и повышение их естественной резистентности к инфекционным заболеваниям [6, 7].

В связи с этим целью настоящей научной работы являлся поиск естественного, экологически безопасного источника биологически активных веществ, для последующего создания препарата – иммуностимулятора.

Материалы и методы исследования

Работа проводилась на базе НИИСХ Северо-Востока, г. Киров. Для получения целевого объекта исследовали штаммы грибов, выделенные с листьев ячменя пораженных грибом Drechslera (D) graminea. Экспериментальным путем подбирали оптимальную питательную среду для культивирования D. graminea.

Изыскание безвредного для теплокровных животных штамма микромицета и культивирование выделенных с растительного материала чистых культур грибов, осуществляли на агаре Чапека и жидкой питательной среде по общепринятой методике. Отобранный штамм культивировали в термостате на жидкой питательной среде (модификации среды Чапека) для получения культуральной жидкости (КЖ). Аминокислотный состав мицелия гриба и КЖ определяли на аминокислотном анализаторе ААА-Т-339, триптофан на ФЭКе. Общий азот определяли по Къельдалю, фосфор с ванадатмолибдатным реактивом, калий с помощью пламенной фотометрии на пламенном фотометре ПАЖ-1, кальций и магний определяли трилонометрическим методом, содержание сахара устанавливали общепринятыми тестами.

Испытание КЖ гриба осуществляли на беспородных белых мышах в возрасте 30 дней, основываясь на методических указаниях Билай В.И и Курбацкой З.А. [1]. Животных распределяли на 4 группы по 10 мышей в каждой. Две группы мышей – контрольные (№ 1 и № 2) и две – опытные на введение культуральной жидкости (№ 3, 4). В качестве плацебо использовалась дистиллированная вода, используемая для приготовления жидкой питательной среды (группа № 5). Основным контролем служила жидкая питательная среда. В обоих вариантах жидкости инъецировали в дозе 0,5 мл/мышь.

В опытных группах КЖ вводили однократно, подкожно: в 3-ей – 0,2 мл, 4-ой – 0,3 мл и 5-ой – 0,5 мл. Наблюдения за состоянием мышей вели в течение 10 суток, после чего животных взвешивали. Статистическую обработку проводили, используя критерий Стьюдента, считая результат достоверным при Р < 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

В процессе изыскания подходящей среды испытаны 10 различных питательных сред, из которых отобрана оптимальная. Эта среда представляет из себя модификацию среды Чапека, которая стерилизовалась в автоклаве при 0,5 атмосфер в течение 30 мин. Культивирование гриба D. graminea осуществлялось при температуре 25 °С в течение 30 дней.

Определение некоторых химических характеристик веществ, входящих в КЖ и мицелий гриба выявило следующее. В мицелии гриба, выращенном на жидких средах в составе аминокислот доминирующими являются: аспарагиновая, глутаминовая и аргинин с фенилаланином, на долю которых приходится 45 % от всей суммы аминокислот. Аналогичным образом представлена картина аминокислот и в КЖ, однако, концентрация этих четырех аминокислот занимает не менее 50 % от всех суммарно представленных аминокислот. Содержание аминного азота в образцах КЖ, автоклавированной при 0,5 атмосферах в течение 30 минут, составляет к общему азоту до 70 %. Из минеральных элементов основу мицелия гриба составляют фосфор, калий и магний. В культуральную жидкость переходит больше калия и кальция (на 30-й день культивирования). В КЖ основу составляли сахара до 41 % и сырой протеин до 57 % в пересчете на сухое вещество.

Установлено, что подкожное введение КЖ в объеме 0,2 мл, 0,3 мл и 0,5 мл белым мышам не вызывает их гибели либо отклонений в клиническом состоянии. Данные приведены в таблице.

Как видно из результатов, приведенных в таблице, введение КЖ в дозе 0,2 и 0,3 мл/мышь вызывает достоверное (Р < 0,05) увеличение массы тела на 18–24 % соответственно. Однако, более высокая доза (0,5 мл/мышь) не влияет на изменение весового показателя (Р > 0,05).

Штамм Н-95 гриба D. graminea, на основании атоксичных свойств, был отобран для дальнейшей работы. Индуцированный автолиз мицелия гриба не выявил повышения стимулирующей активности КЖ.

Выводы

В результате проведенных исследований на беспородных белых мышах отобран безопасный для теплокровных штамм гриба D. graminea. Определены оптимальные условия его культивирования и установлен химический состав культуральной жидкости и мицелия.

Библиографическая ссылка