Научный журнал
Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований
ISSN 1996-3955
ИФ РИНЦ = 0,564

АНТИКОАГУЛЯНТНО-ФИБРИНОЛИТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ СОЕДИНЕНИЙ ГЕПАРИНА С АСПИРИНОМ И НИКОТИНОВОЙ КИСЛОТОЙ В НОРМЕ И ПРИ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА

Сороколетов С.М. 1 Ляпина Л.А. 2
1 ГБУЗ ГКБ им. С.П. Боткина
2 Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова
Установлено, что комплексный препарат гепарин-аспирин-никотиновая кислота обладает фибриндеполимеризационным и антикоагулянтным действием в условиях in vitro. В эксперименте при внутривенном введении здоровым животным (крысам) это соединение вызывало усиление в крови антикоагулянтной и фибринолитической активности как ферментативной, так и неферментативной природы. При пероральном курсовом поступлении препарата в организм больных ишемической болезнью сердца он способствовал, кроме того, повышению уровня тканевого активатора плазминогена в сосудистом русле и оказывал защитное противотромботическое действие. Делается вывод о перспективности изучения соединений гепарина с низкомолекулярными лекарственными антиагрегантами в качестве препаратов, предупреждающих процессы образования тромбов в организме.
соединения гепарина
аспирин
никотиновая кислота
антикоагулянт
ишемическая болезнь сердца
фибринолиз
1. Бокарев И.Н., Попова Л.В. Атеротромбоз. Современное состояние проблемы и пути ее разрешения // Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов. –2008. – № 7. – С. 5-30.
2. Кондашевская М.В. Морфофункциональные и психофизиологические эффекты высокомолекулярного гепарина (экспериментальное исследование): Автореф. дис… докт. биол. наук. – М., 2006. – 47 с.
3. Кухарчук В.В.,. Семенова А.Е. Коррекция гиперлипидемии: особенности терапии статинами на примере пострегистрационного исследования «КОМПЛАЕНС» // Атеросклероз и дислипидемии. – 2015. – № 1. – C. 5–12.
4. Ляпина Л.А., Григорьева М.Е., Оберган Т.Ю., Шубина Т.А. Теоретические и практические вопросы изучения функционального состояния противосвертывающей системы крови. – М.: Адвансед Солюшнз, 2012. – 160 с.
5. Оберган Т.Ю. Глипролины и их комплексные соединения с гепарином как физиологические модуляторы функции противосвертывающей системы организма: . дис… канд. биол. наук. – М., 2004. – 225 с.
6. Регистр лекарственных средств РЛС. Энциклопедия лекарств – 19-й вып./ Гл. ред. Г.Л. Вышковский. – М.: «РЛС-Медиа», 2010. – 1368 с.
7. Ухачева П., Ежов М.В. Значение никотиновой кислоты в современной кардиологии // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. – 2011. – Т. 7. – № 3. – С. 365-370.
8. Lyapina L.A., Obergan T.Y., Pastorova V.E. Regulatory role of heparin compounds with low molecular ligands of blood in plasma and thrombocyte hemostasis// Biology Bulletin, изд.-во M A I K Nauka – Interperiodica (Russian Federation), – 2011. – Т. 38. – № 2. – С. 165-175.
9. Napoli C., Stanley W.C., Ignarro L.J. Nutrition and cardiovascular disease: Putting a pathogenetic framework into focus // Cardiovasc. Res. 2007. V. 73, № 2. P. 253-256.
10. Stief T.W. Inhibition of thrombin in plasma by heparin or arginine // Clin. Appl. Thromb. Hemost. – 2007. – Vol. 13. – № 2. – C. 146–153.

Известно, что естественный гликозаминогликан крови – гепарин проявляет антикоагулянтную активность вследствие блокады свертывающей активности тромбина и других коагуляционных белков организма, нормализует уровень холестерина и сахара в крови и увеличивает скорость заживления ран в организме [2].

Гепарин взаимодействует через свои сульфатные и карбоксильные группы с различными аминокислотами, пептидами, белками с образованием комплексных соединений. Введение животным этих соединений с некоторыми аминами и другими низкомолекулярными веществами приводило к повышению антикоагулянтной активности крови, значительно превышающей ее эффект, достигаемый при введении эквивалентной по отношению к комплексу дозы гепарина [5].

В настоящее время еще нет достаточно определенных данных о механизмах действия комплексных соединений гепарина с низкомолекулярными лигандами в проявлении антитромбоцитарных, антикоагулянтных и фибринолитических эффектов плазмы крови в организме. Предполагается, что они способны действовать в кровотоке как прямо, так и опосредованно, т.е. оказывать свои эффекты через взаимодействие с рецепторами [8]. Известно, что такие лекарства, как никотиновая кислота и аспирин участвуют в снижении агрегации тромбоцитовза счет уменьшения образования тромбоксана А2 (никотиновая кислота) или ингибирования циклооксигеназы (аспирин) [6]. Никотиновая кислота включается в простетическую группу ферментов, являющихся переносчиками водорода: никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ), регулирует окислительно-восстановительные процессы, тканевое дыхание, синтез белков и жиров, распад гликогена. Угнетает липолиз в жировой ткани, уменьшает скорость синтеза ЛПОНП. Нормализует липидный состав крови: снижает уровень общего холестерина, ЛПНП, триглицеридов и повышает уровень ЛПВП, обладает антиатерогенными свойствами. Оказывает сосудорасширяющее действие, в т.ч. на сосуды головного мозга, улучшает микроциркуляцию, повышает фибринолитическую активность крови [7].

Учитывая возможность проявления вазоактивного действия аспирина и никотиновой кислоты через комплексообразование с гепарином, они могут проявить защитное противотромботическое лействие в процессах тромбоцитарного и плазменного гемостаза, что имеет немаловажное значение в предупреждении нарушений системы свертывания крови.

В то же время известно, что сердечно-сосудистые заболевания зачастую сопровождаются предтромбозами, приводящими в последующем к тромбозам [1, 3].

Применение отдельных лекарственных веществ разнонаправленного действия – антикоагулянтного, антиагрегантного или фибринолитического при сердечно-сосудистых заболеваниях, хотя и оказывает положительное влияние на состояние системы гемостаза, но при передозировках может привести к нежелательному явлению [9].

Цель работы заключалась в исследовании антикоагулянтно-фибринолитичесих эффектов соединения гепарина с аспирином и никотиновой кислотой in vitro и при его применении человеку для коррекции нарушений гемостаза при ишемической болезни сердца.

Материалы и методы исследования

В работе использовали препараты отечественного производства – высокомолекулярный гепарин (Г) (учитывая, что одно его монозвено имеет мол.массу 600 D), аспирин (А) и никотиновую кислоты(НК). Готовили препарат из трех перечисленных ингредиентов (ГАНК) в молярном соотношении, равном 4.8:1.3:1.0. В условиях in vitro при разных разведениях соединения ГАНК (от 10-7 до 10-1 М) определяли антикоагулянтную по тесту АЧТВ и фибринолитическую (суммарную, неферментативную) активность на пленках нестабилизированного фибрина, а также активность тканевого активатора плазминогена (ТАП).

В условиях in vivo внутривенно вводили препараты (опыт – тройное соединение ГАНК в дозе 1.5 мг/кг массы тела и контроль 1 – гепарин, контроль 2 – никотиновая кислота, контроль 3 – аспирин, контроль 4 – 0.85 %-ый физиологический раствор в дозах, эквивалентных их содержанию в соединении)) 30 здоровым животным (белым лабораторным крысам-самцам с массой тела 180-200 г). Все исследования проводили в соответствии с этическими принципами и документами, рекомендованными Европейским научным фондом о гуманном отношении к животным.

Таблица 1

Антикоагулянтная активность (по тестам АЧТВ и ТВ), суммарная фибринолитическая активность (СФА), фибриндеполимеризационная активность (ФДПА), активность тканевого активатора плазминогена (ТАП) у здоровых крыс через 10 мин после внутривенного введения им соединения гепарина с аспирином и никотиновой кислотой в дозе 1.5 мг/кг массы тела (M ± m)

Условия эксперимента

АЧТВ, с

СФА, мм2

ФДПА, мм2

ТАП, мм2

Опыт – Введение соединения ГАНК

46.0 ± 2.0**

(140 %)

50.0 ± 3.0**

(138 %)

38.3 ± 2.6**

(170 %)

21.5 ± 0.9**

(148 %)

Контроль 1 – введение гепарина

39.6 ± 0.7*

(120 %)

38.0 ± 2.4

(106 %)

24.5 ± 0.5

(110 %)

19.8 ± 2.8*

(137 %)

Контроль 2 – никотиновая кислота

35.1 ±1.9

(106 %)

38.7 ± 5.0

(107 %)

27.4 ± 1.1*

(124 %)

16.5±0.6

(114 %)

Контроль 3 – аспирин

34.0 ± 0.9

(103 %)

39.4 ± 1.7

(109 %)

29.3 ± 2.4*

(132 %)

15.8 ± 3.0

(108 %)

Контроль 4 – 0.85 %-ый NaCl

33.0 ± 1.3

(100 %)

36.0 ± 2.3

(100 %)

22.1 ± 1.5

(100 %)

14.4 ± 1.7

(100 %)

Примечание. Статистические показатели рассчитаны относительно соответствующих проб контроля 4 (0.85 %-ый NaCl), принятых за 100 %. Обозначения: **р < 0,01; *р < 0,05.

Таблица 2

Изменение антикоагулянтной активности (по тестам АЧТВ и ТВ), суммарной фибринолитической активности (СФА), фибриндеполимеризационной активности (ФДПА), активности тканевого активатора плазминогена (ТАП) у больных ИБС на фоне перорального приема соединений гепарина с аспирином и никотиновой кислотой (M ± m)

Группы

АЧТВ, с

ТВ, с

СФА, мм2

ФДПА, мм2

ТАП, мм2

Доноры (здоровые)

36.0 ± 2.0

21.4 ± 0.9

50.0 ± 3.0

15.5 ± 2.6

9.5 ± 0.9

Больные ИБС – до лечения

28.1 ± 1.7

(100 %)

15.4 ± 0.9

(100 %)

35.0 ± 2.4

(100 %)

12.5 ± 0.5

(100 %)

9.8 ± 2.8

(100 %)

Больные ИБС– после лечения

37.0 ± 0.9**

(131 %)

19.5 ± 0.1**

(127 %)

58.7 ± 5.8**

(167 %)

38.3 ± 2.4**

(300 %)

26.5 ± 0.6**

(170 %)

Примечание. Статистические показатели рассчитаны относительно соответствующих проб «до лечения», принятых за 100 %.

В последующем препарат ГАНК вводили 18 больным (10 мужчин и 8 женщин) ишемической болезнью сердца (ИБС) перорально. Разовая лечебная доза препарата составляла 110 мг/70 кг массы тела. При наблюдениях за больными соблюдали этические принципы Хельсинской декларации и информированное согласие больного Схема лечения больных ишемической болезнью сердца (ИБС) предусматривала прием комплексного препарата 2 раза в сутки до еды в течение 10 суток. Кровь на анализы брали из локтевой вены до лечения и спустя 10 суток после приема комплексных препаратов. В качестве контроля использовали донорскую венозную кровь здоровых людей. Кровь подвергали центрифугированию в течение 12 мин при 3000 g для получения бедной тромбоцитами плазмы. В плазме крови определяли антикоагулянтную активность по тестам АЧТВ и тромбинового времени (ТВ) на анализаторе АСКа 201-Астра; суммарную (СФА) и фибриндеполимеризационную активность (ФДПА), активность тканевого активатора плазминогена (ТАП) [41].

Статистическая обработка данных проведена согласно методу Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

В условиях in vitro при разных концентрациях соединения ГАНК от 10-5М до 10-1М выявлена его антикоагулянтная активность, которая повышалась на 20-25 % по сравнению с контролем (добавление к нормальной плазме крови 0.85 %-ного NaCl) и соответствовала антикоагулянтному действию эквивалентной дозы Г. Наряду с этим впервые была установлена ФДПА у соединения ГАНК при его концентрациях в системе от 10-3М до 10-1М (зоны лизиса на нестабилизированном фибрине составляли при этом 45 ± 2.2 мм2). Эта активность практически отсутствовала у составных частей препарата. В условиях in vitro нами также было показано, что препараты ГАНК ингибируют активность тромбина на 18-20 %.

В экспериментах на здоровых крысах-самцах с массой тела 180-200 г через 10 мин после внутривенного введения ГАНК (т.е. при поступлении препарата непосредственно в кровоток) установлено достоверное повышение антикоагулянтной активности на 40 %, СФА – на 38 %, ФДПА – на 70 %, ТАП – на 48 % по сравнению с контрольными пробами (0.85 %.-ый NaCl). В контрольных образцах после введения эквивалентной дозы Г повышалась антикоагулянтная активность в значительно меньшей степени – на 20 % и активность ТАП – на 37 %, после введения НК и А увеличивалась ФДПА на 24 – 32 % соответственно (табл. 1).

При исследовании крови больных ИБС отмечено угнетение функции противосвертывающей системы, на что указывало повышение свертываемости крови по тестам АЧТВ и ТВ, снижение фибринолиза по тестам СФА, ТАП и низкий уровень ФДПА по сравнению с теми же показателями в крови здоровых людей (табл. 2).

После 10-суточного приема препарата ГАНК у больных отмечалось не только восстановление до нормального уровня, но даже превышение антикоагулянтной активности на 27-31 % по тестам ТВ и АЧТВ соответственно. Достоверное удлинение при этом показателей ТВ свидетельствовало о способности гепариновых соединений, как и самого гепарина [10], ингибировать активность тромбина. На фоне приема комплексов в крови больных повышались СФА – на 67 %, ФДПА – на 200 % раз и активность ТАП – на 170 %.

Заключение

Установлено, что комплексный препарат гепарин-аспирин-никотиновая кислота, обладая фибриндеполимеризационным и антикоагулянтно-фибринолитическим действием in vitro и in vivo, способен оказать защитное действие на организм больных ишемической болезнью сердца от развития тромботических осложнений. В перспективе комплексные соединения гепарина могут быть применены при нарушениях свертываемости крови, сопровождающихся процессами тромбообразования.


Библиографическая ссылка

Сороколетов С.М., Ляпина Л.А. АНТИКОАГУЛЯНТНО-ФИБРИНОЛИТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ СОЕДИНЕНИЙ ГЕПАРИНА С АСПИРИНОМ И НИКОТИНОВОЙ КИСЛОТОЙ В НОРМЕ И ПРИ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2016. – № 6-3. – С. 493-495;
URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=9639 (дата обращения: 26.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074